实验11染色体分带技术.ppt

实验11染色体分带技术 一 实验目的 了解染色体分带技术的原理及应用了解染色体G带和C带显示的原理掌握染色体G带和C带显色技术流程 2020 3 31 1 二 实验原理 人们用物理 化学因素处理后 再用染料对染色体进行分化染色 使每条染色体上出现明暗相间 或深浅不同带纹的技术称为显带技术 bandingtechnique 染色带的数目 部位 宽窄和着色深浅均具有相对稳定性 所以每一条染色体都有固定的分带模式 即称带型 染色体带型是鉴别染色体的重要依据 2020 3 31 2 二 实验原理 G带是将处于分裂中期的细胞经胰酶或碱 热 尿素等处理后 再经吉姆萨染料染色后所呈现的区带 是目前被广泛应用的一种带型 其特性是显带方法简单恒定 带型稳定 保存时间长 一般认为 易着色的阳性带为含有AT多的染色体节段 在间期核呈固缩状态 而且是DNA晚复制区之一 有相当一部分中度重复序列DNA可能在G带区 相反 含GC多的染色体段则不易着色 也有人认为 Giemsa染料在G带区是与DNA结合 而且与结合DNA的染色质非组蛋白有关 总的来说 G显带的机制还未搞清 C带是染色体标本经强碱 NaOH或Ba OH 2 热处理后 在着丝粒周围区域和异染色质区经Giemsa染成深色 而染色体两臂的常染色质部分仅有浅淡轮廓 这是一种染色体上不显示带纹的特殊显带法 主要显示着丝粒区和异染色质区的变化 2020 3 31 3 二 实验原理 双翅目昆虫 果蝇 摇蚊等 幼虫期的唾腺细胞很大 其核内的染色体称为唾腺染色体 由于它们比普通染色体大100 150倍 宽约5 m 长约400 m 因而也称为巨大染色体 另外唾腺染色体经多次复制而不分开 所以又称作多线染色体 唾腺染色体经染色后出现深浅不同 疏密有别的横纹 且其数目和位置常常是恒定的 标志着物种的特征 2020 3 31 4 三 实验仪器材料 洋葱 蚕豆 大蒜根尖果蝇唾腺1NHCl溶液Ba OH 2溶液Giemsa染液显微镜 2020 3 31 5 四 实验步骤 2020 3 31 6 四 实验步骤 2020 3 31 7 唾腺呈半透明 球棒状 前端较细 后端粗钝 有时成对粘在一起成 V 字型 其外侧有时附有乳白或淡黄色的脂肪 此时应保留唾腺形态的完整 因为食道和肠管也是半透明的 如果唾腺不完整 就很难判断唾腺和肠道的取弃 四 实验步骤 2020 3 31 8 果蝇唾腺染色体制片 把唾腺剔出移到玻片的干净处 并清除其余器官和组织 如果唾腺上附有脂肪 应把乳白色或淡黄色的脂肪清除干净 保留半透明的唾腺 把多余的生理盐水用吸水纸吸干 加一滴1N盐酸 室温下水解2分钟 然后吸干 空气干燥一周 四 实验步骤 2020 3 31 9 植物根尖染色体制片 前处理 根尖用0 1 秋水仙素溶液处理4 12小时 固定 用水洗净处理过的根尖 经Carnoy固定液固定2 24小时 换入70 酒精保存 解离 取出根尖 用蒸馏水洗净 放入1NHCl中60 解离8 10min 再用蒸馏水洗净 低渗 倒去酶液 用蒸馏水慢慢冲洗2次 然后在蒸馏水中浸泡30min 后固定 取出材料于载片 滴加新鲜Carnoy固定液 固定10 30min涂片 用镊子将材料捣碎 边捣边加固定液 去掉大块残渣 空气干燥一周 四 实验步骤 2020 3 31 10 G带显色 1 将制好的染色体标本 置72 75 烤箱中烤片3h 2 放入预温至37 的0 025 胰酶溶液中 pH 7 2 7 4 消化1min左右 每次的作用时间并不完全相同 可先试一张片子 再根据显带效果调整胰酶作用时间 3 在Giemsa染液中染色10min 自来水冲洗干净 晾干后 即可阅片 4 镜检 在显微镜高倍目镜下检查显带标本 在染色体上若出现清晰的深浅相间的带型 即为可取标本 可供摄像分析 四 实验步骤 2020 3 31 11 四 实验步骤 1 制片 烤片同G显带技术 65 2小时 2 染色体标本在室温下用0 1NHCl水解15分钟后蒸馏水冲洗 3 2 Ba OH 2 65 处理10分钟后蒸馏水冲洗 4 2 SSC 65 处理1小时 5 冲洗冷却后用1 10Giemsa稀释液染色7分钟 6 冲洗后晾干 镜检 C带显色 2020 3 31 12 五 实验结果 G带显色 2020 3 31 13 五 实验结果 C带显色 2020