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文档简介

Dual Luciferase Reporter Assay 试剂准备试剂准备 Luciferase Assay Buffer II 10ml Luciferase Assay Substrate 1vial Stop 同时以转染同时以转染 phRL tk phRL tk 海肾荧光素酶海肾荧光素酶 作内对照作内对照 具体转染方法参照转染 Polifectamine Reaent 说明书进行 1 将质粒 DNA 3 2 g 与 phRL tk 0 8 g 按 1 4 混合后为 A 液 混匀 30s PolyFect QIAGEN 与无血清无抗生素的 DMEM 按 1 50 混匀后为 B 液 混匀 30s 2 A B 混匀 B 加入 A 15s 室温下孵育 5 10 min 3 吸出六孔板中的培养液 用无血清无抗生素的 DMEM 洗 3 遍 然后加入 AB 混 合液 每孔 0 8mL 4 6h 后 加入 2mL 完全 DMEM 5 24h 后 倒出旧培养液 换为完全 DMEM 6 100 g H2O2或 B a P 处理 lh 或 24h 200 M MMS 24h 溶解于 Me2SO Sigma H2O2不引起 OGG1 升高 7 采用 Promega 公司的双报告基因检测试剂盒检测荧光素酶活性 检测仪器为 化学发光仪 30IOC 化学发光测定仪 所有实验严格平行操作 8 以相对荧光素酶单位 相当于对照组的百分比 表示 结

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