总黄酮、多酚含量的测定

总黄酮含量的测定总黄酮含量的测定 一 仪器一 仪器 紫外 可见分光光度计 分析天平 低速离心机 超声波提取器 恒温水浴锅 粉碎机 pH 计 10mL 容量瓶 15 个 10mL 具塞试管 100mL 烧瓶 10mL 离 心管 10 个 试管架 2 个 二 药品二 药品 芦丁标准品 40mg 无水乙醇 1000mL 亚硝酸钠 500g 硝酸铝 500g NaOH 500g 三 实验步骤三 实验步骤 一 一 标准曲线绘制 1 芦丁标准品 40mg 置于称量瓶中 80 烘干至恒重 取烘干后的 20mg 芦丁标 准品用水定容至 100mL 得 200 g mL 芦丁标准贮备液 精确量取上述浓度芦 丁标准贮备溶液 0 0 2 0 4 0 8 1 2 1 6 2 0 mL 分别置于 10 mL 具塞试 管中 2 向具塞试管中分别加 60 乙醇 5 4 8 4 6 4 2 3 8 3 4 3 0 mL 3 然后加 5 亚硝酸钠 0 3 mL 摇匀 静置 6 min 4 再加 10 硝酸铝 0 3 mL 摇匀 静置 6 min 5 加 4 氢氧化钠 4 0 mL 用 60 的乙醇定容至刻度 摇匀 静置 12 min 6 于510 nm波长下测定吸光度 并以芦丁标准浓度值为横坐标 以吸光度为纵 坐标 绘制标准曲线 研究表明芦丁标准品含量在0 0 5mg 范围内与吸光度具 有良好的线性关系 二 二 样品处理及总黄酮的提取 以 60 乙醇提取为例 1 将样品在 80 烘干 24 h 粉碎后过 80 目筛置于干燥器中备用 2 称取 500 2 mg 样品于 25 mL 具塞三角瓶中 使样品位于三角瓶底部 重复 3 次 3 每瓶加 4 mL 60 乙醇 放超声波提取器提取 2 h 提取液转至 10 mL 具塞离 心管中 4 再向具塞三角瓶中加 4 mL 的 60 乙醇 放超声波提取器提取 1 h 提取液 转至相应 10 mL 具塞离心管中 6000 r min 离心 10 min 离心后取上清液于 相应的 10 mL 具塞试管中 60 乙醇定容至 10 mL 待测 三 三 样品提取液总黄酮含量的测定 准确吸取总黄酮提取液 稀释适当倍数 2 0 mL 于 10 mL 具塞试管中 加 入 60 乙醇 3 0 mL 然后按步骤一中 3 4 5 6 的方法测定吸光度 试剂空白为 参比 提取溶剂代替提取液 将吸光度代入标准曲线计算样液的总黄酮含量 总酚含量的测定总酚含量的测定 一 仪器一 仪器 紫外 可见分光光度计 分析天平 低速离心机 恒温水浴锅 粉碎机 pH 计 超声波提取器 回流装置 10 mL 具塞试管 25 mL 具塞三角瓶 250 mL 容量 瓶 二 药品二 药品 没食子酸标准品 100mg 无水碳酸钠 500g 福林酚试剂 100 mL 三 实验步骤三 实验步骤 一 一 标准曲线绘制 标准曲线绘制 精确称量没食子酸标准品25 mg 用水溶解后定容于250 mL容量瓶中 得 到0 1 mg mL的标准贮备溶液 分别移取没食子酸标准储备溶液 0 00 0 25 0 50 0 75 1 00 1 25 1 50 mL置于10 mL具塞试管中 分别加入 福林 酚试剂1 mL 摇匀后再分别加入质量分数12 Na2CO3溶液2 mL 用水定 容至10 mL 摇匀 平行三组 室温下避光反应1 h后 在765 nm波长下测定吸 光度 以没食子酸标准溶液的浓度为横坐标 以吸光度为纵坐标 制作标准曲 线 研究表明 没食子酸含量在20 120 g 范围内与吸光度具有良好的线性关 系 二 二 样品总酚的提取以及样品总酚含量的测定 样品总酚的提取以及样品总酚含量的测定 以 以 60 乙醇提取为例 乙醇提取为例 称取 0 5g 粉碎的样品于 25 mL 具塞三角瓶中 加入 10 mL 体积分数 60 的乙醇溶液 搅拌均匀 在超声波提取器中 75 提取 50 min 提取液以 3000 r min 离心 20 min 取上清液 量取提取液体积 采用福林 酚比色法测定样品 提取液的总多酚浓度 吸取 1 00 mL 总多酚提取液 稀释适当倍数 于 10 mL 具塞试管中 分别 加入福林 酚试剂 1 mL 及质量分数为 12 的碳酸钠溶液