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一 RNA 条带分析 要知道 RNA 电泳的理想带型是 1 完整的 RNA 琼脂糖电泳会有三条带 某些试剂盒可能会有两条带 没有最 下面的 5S 条带 2 上面两条带应该最亮 分别代表 28S 和 18S rRNA 且第一条带 28S 亮 度应为第二条 18S 亮度的约 2 倍 最下面一条带最淡 为 5S 条带 3 如果你发现最下面一条带很亮而上两条带很淡甚至没有 那就说明你的 RNA 发生了严重的降解 只能重新提取了 4 但如果仅仅是为了检测 RNA 的质量 没有必要进行如此麻烦的实验 用普 通的琼脂糖胶就可以了 5 一般的 如果 28S 和 18S 条带明亮 清晰 条带锐利 指条带的边缘清晰 6 电泳的目的在于检测 28S 和 18S 条带的完整性和他们的比值 或者是 mRNA smear 的完整性 我们认为 RNA 的质量是好 二 检测 RNA 溶液的吸光度 核酸分子中含有碱基使核酸在 260nm 下有最大吸收 紫外吸收是嘌呤环和嘧啶 环的共轭双键系统所具有的性质 含有嘌呤和嘧啶的物质 不论是核苷 核苷 酸 或核酸都有吸收紫外光的特性 1 280 320 230 260nm 下的吸光度分别代表了核酸 背景 溶液浑浊度 盐浓度和蛋白等有机物的值 2 一般的 我们只看 OD260 OD280 Ratio R a 当 R 1 82 时 说明 RNA 中蛋白或者其他有机物的污染是可以容忍的 不 过要注意 当用 Tris 作为缓冲液检测吸光度时 R 值可能会大于 2 一般应该 是 2 2 的 b 当 R2 2 时 说明 RNA 已经水解成单核酸了 三 生物体内一般含三种主要的 RNA 核糖体 RNA rRNA 信使 RNA mRNA 转运 RNA tRNA 其中 rRNA 含量最多 提取组织总 RNA 所 得最多的就是 rRNA 真核生物中含有 5S 5 8S 18S 28S 原核生物中有 5S 16S 23S 而植物组织中一般较多的为 5S 18S 28S 5S 18S 28S 分别具有 120 1900 和 4700 个核苷酸 四 RNA 含量测定 蛋白质由于含芳香族氨基酸 因此也能吸收紫外光 通常蛋白质在 280nm 波长 有特异吸收 因此核酸在 A260 及 A260 A280 测定的比值 A260 A280 可 以反映样品中核酸的含量及纯度 RNA 在 A260 A280 的比值在 2 0 以上 DNA 在 A260 A280 的比值为 1 8 左右 当样品中蛋白质含量较高时比值即下降 DNA 浓度 g l A260 50 g ml 稀释倍数 RNA 浓度 g l A260 40 g ml 稀释倍
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