USP-51抗菌效力测试(翻译).doc

392363a344d5261c8fd903d71f082f28 pdf 第 1 页 共 5 页 抗菌的效力测试 抗菌防腐剂是实际被添加到有菌的剂量配方里的物质 使他们不受微生物滋长或是被无意中引进到 生产过程中的微生物侵害 在无菌包装多剂量配方的容器里 抗菌防腐剂被添加用来抑制由重复添加单 剂量所引进的微生物的滋长 抗菌防腐剂不应被作为在良好生产操作中的替代方式使用 或仅是用来减少一个有菌产品的微生物 群数量 或是在生产时控制多剂量的微生物量 在剂量表里抗菌防腐剂与添加的要求必需符合规定 所有有用的抗菌药剂都是有毒物质 为了最大的保护使用者 防腐剂的含量应被有效地显示在产品 的最终包装上 并应会处在一个可能对人体有毒的水平线下 添加的抗菌防腐剂含量能够被保持在一个 最小的浓度 如果配方的活性成分具有一个固定的抗菌力 抗菌的效力 不管是产品里固有的或者是生 产中添加的抗菌防腐剂 都必须在所有注入包装的多剂量容器里或其它包含抗菌防腐剂的产品上显示 抗菌防腐剂必须被显示在多剂量和口头剂量型和给其它剂量型 如眼药 耳药 鼻药 冲洗的和透析液 看 Pharmaceutical Dosage Forms a1151 本章提供的测试用来显示抗菌保护的效力 添加的抗菌防腐剂必须显示在标签上 测试的效力和标 准适用于一个产品在原有的 未打开过的经由制造商销售的容器里 产品分类产品分类 为了测试的目的 配制产品分开为四个分类 看表 1 抗菌效力的标准对于这些产品是一个管理的作用 Table 1 Compendial Product Categories 表 1 配制药品分类 Category 类类 别别 Product Description 产产 品品 概概 述述 1针剂 其它非肠胃药剂 包括乳剂 无菌耳用剂 鼻用剂和眼用剂 含水的或其它介质的 2局部使用产品 含水的或其它介质 如未灭菌耳用剂产品 软膏 包括那些涂在黏膜上的 3口服产品 除了以水为基底或其它的介质的解酸剂 4含水解酸剂 测试生物体 使用以下微生物的培养基 白念珠菌 ATCC NO 10231 黑曲霉菌 ATCC NO 16404 大肠杆菌 ATCC NO 8739 绿脓杆菌 ATCC no 9027 和金黄色葡萄球菌 ATCC NO 6538 在测试中使用活的微 生物从原始的培养基移转次数不得超过五次 为了测试的目的 移转 的定义是从一个已确定的培养 392363a344d5261c8fd903d71f082f28 pdf 第 2 页 共 5 页 基移到一个新鲜的媒介里 所有的移转均应被计算在内的 一旦有机体被以种子库 seed lot 技术保存下 来时 每个在新鲜媒介里冰冻的 融化的和再生的循环周期被认为是一次转移 种子存储技术将会被使用到培养的长期存储中 从 ATCC 得到的培养基将会依照操作方向苏醒 如 果在液体培养基里生长 细胞会通过离心法的方式被聚集成块 悬浮在 1 20 容量的新鲜的液体培养基里 并添加一个同等容量的 20 V V 水里 的无菌的甘油 从表面到 10 的甘油液体培养基里可能得到在 琼胶培养基上的细胞生长 分配小部分的悬浮液到无菌的小瓶里 把小瓶子放在液化氮里或一个不超过 50 摄氏度的机械冷藏室里 当要求一个新鲜的种子存储瓶时 它可能被移除和使用来给一系列的有效的培养菌做接种 这些有效的培养基到时可以被定期地 每天 当测试细菌和酵母时 使用来启动接种培养基 媒介 测试中所有媒介的使用 必须做促生长测试 在有机体测试下使用上面指定的测试微生物 接种体的准备 准备测试 由最近再生的培养基的表面适当的接种特定的微生物 接种培养基的描述请参考表 2 表 2 里 的适合的培养基是黄豆 消化酪蛋白 soybean casein digest 或沙保罗氏葡萄糖琼脂培养基 参看 Microbial Enumeration Tests 61 和 Absence of Specified Microorganism 62 为了获得细菌和白色念珠菌 C albicans 培养基 使用干净的盐水溶液 Saline TS 注 9 克氯化钠溶 于 1000 mL 的水 清洗表面的生成物 把它收集在一个合适的容器里 并添加足够的盐水溶液以获得一 个每毫升大约 1 108 cfu 的微生物计数 为了获得黑曲霉菌 A niger 细胞 使用干净的盐水溶液含 0 05 的聚山梨醇酯 80 polysorbate 80 并添加足够的盐水溶液来获得一个大约 1 108cfu 每毫升的计数 或者 一个合适的液体的培养液 如 黄豆 消化酪蛋白液 soybean casein digest broth 或沙氏琼脂培 养液 sabouraud dextrose broth 可能生长出培养菌微生物并通过离心法得到细胞 然后以无菌的盐水溶液 清洗和重新悬浮以获得一个大约 1 108cfu 每毫升的微生物计数 注意 预计的接种浓度可能通过浊 度计测量来挑战微生物 如果悬浮液没有在两个小时内被使用 请冷冻它 测出每个悬浮液的每毫升的菌落数量 使用在 TABLE2 里的媒介和微生物的恢复培养期的情况来确 认估计每毫升的原始 cfu 这个值可以用在测试中做接种尺寸的比对 细菌和酵母菌的悬浮液在 24 小时 收获期里应被使用 但真菌的准备可在冷冻情况下储存 7 天 程序 392363a344d5261c8fd903d71f082f28 pdf 第 3 页 共 5 页 测试可以在五个干净的容器里操作 如果在每个容器里有足够容量的产品且产品容器能被无菌地装入 如 使用针和注射器穿过一个人造的橡胶瓶塞 或者在五个无菌的 加盖的 尺寸合适的 能移转产 品的充足容量的细菌容器里 给每一个准备好的标准的接种体的容器做接种注射 并混合 接种悬浮液的使用量在产品量的 0 5 到 1 0 之间 被添加到产品的测试细菌浓度 类型 1 2 3 到最终的测试准备浓度在接种之后是每毫升 1 105and 1 106cfu 之间 对于类型 4 产品 解酸剂 测试准备的最终浓度在接种后是每毫升产品 1 103 到 1 104cfu 之间 在每次测试准备的活的微生物的原始浓度是预计是基于每个标准接种体的微生物浓度 通过皿测法来预 计的 在 22 5 2 5 的温度下将容器接种 如表 3 在适当的时间间隔里把每个容器做样品标示 记录下在每个 间隔时间里出现的任何变化 参看 Microbial Limit Tests 61 下的程序 以平皿计数方式 plate count 在适 当的时间间隔里计算出现的 cfu 数 使用特定的抗菌剂做为钝化剂 中和剂 或是适当的稀释量来做平皿 计数 在表 2 中规定出培养基与不同菌种的各种接种状况与验收时间 在开始测试时使用每毫升多少 CFU 来计算浓度 在适当的间隔测试对每个微生物计算每毫升 CFU 浓度的 log10 值的变化 并表述以 log 为单位的减少变化量 Table 2 Culture Conditions for Inoculum Preparation 接种体准备的培养基 Organism 微生物 Suitable Medium 适合的培养基 Incubation Temperature 接种温度 Inoculum Incubation Time 接种时间 Microbial Recovery Incubation Time 验收时间 Escherichia coli 大肠杆菌 ATCC No 8739 Soybean Casein Digest Broth 黄豆 消化酪蛋白液 Soybean Casein Digest Agar 黄豆 消化酪蛋白基 32 5 2 5 18 to 24hours 18 至 24 小时 3 to 5days 3 至 5 天 Pseudomonas aeruginosa 绿脓杆菌 ATCC No 9027 Soybean Casein Digest Broth 黄豆 消化酪蛋白液 Soybean Casein Digest Agar 黄豆 消化酪蛋白基 32 5 2 5 18 to 24hours 18 至 24 小时 3 to 5days 3 至 5 天 Staphylococcus aureus 金黄色葡萄球菌 Soybean Casein Digest Broth 黄豆 消化酪蛋白液 32 5 2 5 18 to 24hours 18 至 24 小时 3 to 5days 3 至 5 天 392363a344d5261c8fd903d71f082f28 pdf 第 4 页 共 5 页 Organism 微生物 Suitable Medium 适合的培养基 Incubation Temperature 接种温度 Inoculum Incubation Time 接种时间 Microbial Recovery Incubation Time 验收时间 ATCC No 6538 Soybean Casein Digest Agar 黄豆 消化酪蛋白基 Candida albicans 白念珠菌 ATCC No 10231 Sabouraud Dextrose Agar 沙氏琼脂培养基 Sabouraud Dextrose Broth 沙氏琼脂培养液 22 5 2 5 44 to 52hours 44 到 52 小时 3 to 5days 3 至 5 天 Aspergillus niger 黑曲霉菌 ATCC No 16404 Sabouraud Dextrose Agar 沙氏琼脂培养基 Sabouraud Dextrose Broth 沙氏琼脂培养液 22 5 2 5 6 to 10days 6 至 10 天 3 to 7days 3 至 7 天 抗菌效力标准 抗菌效力的要求如 Table 3 下规定的标准 参看 significant figures and tolerances under general notices 增加值不高于现行测量值的 0 5 log10 单位的可视为没有增加 测试微生物的标准 For Category 1 Products 对第一类产品 Bacteria 细菌7 天里的原始计数量不少于 1 0 log 的减少量 在 14 天里原始计数量不少于 3 0 log 的减少量 在 14 天 28 天里计数量不增加 Yeast and Molds 酵母和霉菌 原始计数量在 7 天 14 天 28 天里没有增加 For Category 2 Products 对第二类产品 Bacteria 细菌 Not less than 2 0log reduction from the initial count at 14days and no increase from the 14days count at 28days Yeast and Molds 酵母和霉菌 No increase from the initial calculated count at 14and 28days For Category 3 Products 对第三类产品 Bacteria 细菌 Not less than 1 0log reduction from the initial count at 14days and no increase from the 14days count at 28days Yeast and Molds 酵母和霉菌 No inc