Roche LightCycler 480 中文操作说明

LightCycler 480 中文操作说明中文操作说明 罗氏医学仪器公司罗氏医学仪器公司 应用科学部门应用科学部门 February 2008 LightCycler 480 中文操作說明中文操作說明 2 目录目录 一一 启动机器与软件启动机器与软件3 二二 软件设定软件设定 开启新实验开启新实验5 三三 样品编辑样品编辑9 四四 结果分析结果分析12 五五 报告报告18 六六 数据转移至其它计算机数据转移至其它计算机 数据输出与输入数据输出与输入 19 七七 使用者管理使用者管理19 LightCycler 480 中文操作說明中文操作說明 3 一 一 启动机器与软件启动机器与软件 启动机器启动机器 1 机器主开关位于机器右后方 2 机器正面两个警示灯代表机器状态 待警示灯 右 由闪烁橘色灯转 变成稳定橘色灯 警示灯 左 由橘色转变成绿色 约三分半钟 表 示机器已经启动完成 左警示灯左警示灯右警示灯右警示灯机器状态机器状态 橘橘 闪烁 橘橘 闪烁 正在初始化 绿绿橘橘 机器启动完成 96 384 孔盘还未放入 绿绿橘橘 闪烁 96 384 孔盘正在放入中 绿绿绿绿 机器启动完成 96 384 孔盘已经放入 绿绿 闪烁 绿绿 闪烁 实验进行中 LightCycler 480 中文操作說明中文操作說明 4 3 按压机器正面上唯一的按钮 放入已经封膜完成之 96 或 384 孔盘 放置完成后 左右两警示灯都呈现绿色 启动软件启动软件 1 开启计算机 并以正确的使用者名称与密码登入 Windows User name OPERATOR Password LC480 2 开启 LightCycler 480 软件 并输入正确的使用者与密码 LightCycler 480 中文操作說明中文操作說明 5 二 软件设定二 软件设定 开启新实验开启新实验 设定新实验设定新实验 1 软件开启后 会进入主画面 点选 New Experiment 2 出现实验设定窗口 任何时候需要回主画面的话 点选画面右边的 按钮 LightCycler 480 中文操作說明中文操作說明 6 设定实验设定实验 若要套用设定好的实验步骤 Template 请跳至 6 1 在实验设定画面上方 先选择适当的 Detection Format 选项包含 另外可再点选 Customize 勾选所需的滤片组合 2 输入反应体积 96 well plate 范围为 10 100 ul 而 384 well plate 范围 为 5 20 ul LightCycler 480 中文操作說明中文操作說明 7 3 设定实验步骤 Program 设定 program 包含有 Pre incubation Amplification PCR Melting curve optional 与 Cooling 利用 与 增加或 删除步骤 设定循环数目 Cycle 与分析模式 通常 Amplification PCR program 设定成 Quantification 而 Melting Curve program 设 定成 Melting Curve 4 设定详细温度变化 依照不同实验方法与设计而有所不同 点选各个 program 即可设定详细温度变化步骤 请根据产品说明 书来设定 利用 与 增加或删除步骤 需要设定的参 数包含 Target 目标温度 Acquisition Mode 荧光侦测模式 Hold hh mm ss 停留时间 Ramp Rate s 为升降温速度 范 围如下 Ramp Rate s Heating upCooling down 96 well Block 1 0 4 4 s1 0 2 2 s 384 well Block 1 0 4 8 s1 0 2 5 s 若设定温度低于 50 请把 Ramp Rate 调整成 1 5 s 96 well 或 2 0 s 384 well LightCycler 480 中文操作說明中文操作說明 8 5 将实验步骤储存成 Template 以便下次进行套用 点选左下角 Save As Template 即可把此步骤储存起来 6 若要进行套用时 请直接点选窗口左下角 Apply Template 选择欲套用之实验步骤 即可 7 设定完成后点选 Start Run 开始进行实验 8 跳出档案储存窗口 请输入欲储存之文件名称 实验进行中会进入另一个 Data 窗口 窗口下方按键功能如下 End Program 结束此 Program 进入下一个 Program 10 Cycles 实时增加循环数目 Abort Run 马上结束此实验 请注意 若按此键 则此次实验的结 果将不储存 LightCycler 480 中文操作說明中文操作說明 9 三 样品编辑三 样品编辑 将样品分群将样品分群 1 点选窗口左边的 Subset Editor 2 点选 New 新增新的群组 并将其命名 3 利用鼠标选取此群组之样品位置 点选窗口右下角 Apply 此时 被选取的样品位置会呈现实心的蓝色 如下图 4 以此方式依序将所有样品群组编辑完毕 样品必须分群才能够独立分析 但是样品是否分群并不影响样品 的 Cp 值 LightCycler 480 中文操作說明中文操作說明 10 编辑样品名称编辑样品名称 1 点选窗口左边的 Sample Editor 2 输入每个位置之样品名称 Name 与重复 Repl Of 3 若要更快速输入 可直接在左边的图上点选欲编辑之样品 若 A1 A2 与 A3 为三重复 在 A2 与 A3 Repl Of 字段上都填上 A1 即为三重复 在编辑过程中 可利用 Ctrl C 复制文字 Ctrl V 贴上文字 LightCycler 480 中文操作說明中文操作說明 11 4 根据实验分析模式 编辑 Abs Quant 绝对定量 Rel Quant 相对定 量 或 Genotyping 分页 设定 Sample Type 绝对定量 Abs Quant Unknown 未知浓度样品 Standard 已知浓度标准品 相对定量 Rel Quant Target 目标基因 Reference 参考基因 Calibrator Control 样品 Standard 已知浓度的样品 Unknown 未知浓度样品 其它分析模式之分页在此不赘述 请自行参考 LightCycler 480 Instrument Operator s Manual 5 若设定成 Standard 之样品请输入浓度 6 若想要将此样品编辑储存成 Template 可点选窗口左下角 Save As Template 即可 下次实验时可点选 Apply Template 进行套用 LightCycler 480 中文操作說明中文操作說明 13 LightCycler 480 中文操作說明中文操作說明 14 四 结果分析四 结果分析 点选左边的点选左边的 Analysis 选取分析模式 并选择所需分析之 选取分析模式 并选择所需分析之 群组 如下图 群组 如下图 分析模式分析模式说明说明 Abs Quant 2nd Derivative Max绝对定量绝对定量 自动法自动法 Abs Quant Fit Points绝对定量绝对定量 手动法手动法 Color Compensation色差校正色差校正 多色实验校正用多色实验校正用 Gene Scanning 基因扫描基因扫描 适用于适用于 High Resolution Melting Curve HRM 分析分析 Genotyping 基因分型基因分型 适用于适用于 HybProbe 之基之基 因分型实验因分型实验 Relative Quantification相对定量相对定量 Tm CallingTm 分析分析 1 2 3 LightCycler 480 中文操作說明中文操作說明 15 绝对定量绝对定量 Absolute Quantification 1 点选下方的 Calculate 即可得到样品之 Cp 与标准曲线 2 数值之数据输出 在数值分析表上按鼠标右键 点选 Export 即可 输出成 txt 档案格式 可直接以 Microsoft Excel 软件开启 3 图形输出 在图形上按鼠标右键 点选 Export 即可输出成各种图 形档案格式 4 标准曲线储存 点选窗口下方 Std Curve 之 Save as external 输入适合档名后即可储存在数据 库中 各個樣品之 Cp 值與濃度 重複樣品平均後之 Cp 值與濃度 並自動計算標準差 LightCycler 480 中文操作說明中文操作說明 16 相对定量相对定量 Relative Quantification 1 在选择相对定量分析后 出现下面窗口 Reference Sample Location 若 Reference Housekeeping gene 之样品 在同一盘上请选择 In Run 否则请选择 External 可输入另一次 实验的数据一起分析 建议将 Auto Pair 打勾让计算机自动将样品配对 2 进入 Target 与 Reference 分页 右下角显示 Eff 2 表示将 目标基因与参考基因的 PCR 效率以 2 0 来计算 3 若需要校正目标基因与参考基因之 PCR 效率 则需要输入标准曲线 在 Target 与 Reference 分页之右下角 输入 import 标准曲 线 LightCycler 480 中文操作說明中文操作說明 17 Use in run 输入 import 同一盘上之标准曲线 Use external 输入 import 之前已储存于数据库中之标准曲线 4 点选 Pairing 分页 检查计算机自动配对结果是否正确 其中 红色表示 Unknown 样品 绿色表示 Calibrator 样品 若欲外加配对 则可直接以鼠标点选样品后按 Add 即可增加配对 5 点选 Results 分页 点选 Calculate 即可得到计算结果 6 数值和图形输出与绝对定量相同 请参考绝对定量 LightCycler 480 中文操作說明中文操作說明 18 基因分型基因分型 Genotyping 1 进入基因分型的窗口中 2 窗口右下角可设定分类方式 Auto Group 自动分组 In run 标准品包含在本次实验中 External 标准品在之前已储存之实验中 3 点选 Calculate 即可得到分型结果 LightCycler 480 中文操作說明中文操作說明 19 Tm 分析分析 Tm Calling 1 进入 Tm 分析窗口 2 确认波峰数目 3 选择检测模式 4 点选 Calculate 即可得到每个样品之 Tm 值 LightCycler 480 中文操作說明中文操作說明 20 五 报告五 报告 Report 1 将分析后结果储存后即可点选报告键 数据储存 报告 2 勾选想要呈现的报告内容 3 点选 Generate 即可产生报告 4 点选 PDF 即可将此报告储存成 pdf 档案格式 LightCycler 480 中文操作說明中文操作說明 2 六 数据转移至其它计算机六 数据转移至其它计算机 数据输出与输入数据输出与输入 数据输出数据输出 1 点