9-基础实验专题

一 使用显微镜观察多种细胞 一 显微镜操作 1 取镜与安放 1 右手握镜臂 左手托镜座 2 把显微镜放在实验台的前方稍偏左 2 对光 1 转动转换器 使低倍物镜对准通光孔 在镜筒的上方装上目镜 2 选一较大的光圈对准通光孔 左眼注视目镜 转动反光镜 使光线通过通光孔反射到镜筒内 通过目镜 可以看到白亮的视野 3 低倍镜观察 1 把所要观察的玻片标本放在载物台上 用 压片夹压住 标本要正对通光孔的中心 2 转动粗准焦螺旋 使镜筒缓缓下降 直到物镜接近玻片标本为止 此时实验者的眼睛应当看物镜镜 头与标本之间 以免物镜与标本相撞 3 左眼看目镜内 同时反向缓缓转动粗准焦螺旋 使镜筒上升 直到看到物像为止 再稍稍转动细准 焦螺旋 使看到的物像更加清晰 4 高倍镜观察 1 移动装片 在低倍镜下使需要放大观察的部分移动到视野中央 2 转动转动器 移走低倍物镜 换上高倍物镜 3 缓缓调节细准焦螺旋 使物像清晰 4 调节光圈和反光镜 使视野亮度适宜 观察时 要用 左 眼看目镜 右 眼也要睁着以便边观察边绘图 5 观察完毕 转动粗准焦螺旋先升高镜筒 再取下玻片标本 用纱布擦拭显微镜后还原 并放回原处 二 显微镜的使用操作关键 1 取镜 安放 对光 压片 观察 收放 2 观察任何标本都必须先用低倍镜 且标本应透明 3 高倍镜使用 先使用低倍镜确定目标 移动装片 使目标位于视野中央 转动转换器 换用高倍镜 视野较暗 可调反 光镜或光圈 使视野更加明亮 调焦 转动细准焦螺旋 直到物像清晰 4 成像特点 放大倒立的虚像 视野中物像移动的方向与装片实际移动的方向相反 5 放大倍数计算 物镜的放大倍数 目镜的放大倍数 放大倍数指的是物体的长或宽 6 低倍镜下成像特点 物像小 细胞数目多 视野亮 7 高倍镜下成像特点 物像大 细胞数目少 视野暗 8 物镜和目镜的判断方法 物镜有螺纹 目镜无螺纹 放大倍数的判断方法 目镜 镜头长放大倍数小 镜头短放大倍数大 物镜 镜头长放大倍数大 镜头短放大倍数小 物镜与装片之间的距离 距离近放大倍数大 距离远放大倍数小 视野亮度的调节 光线强时 用小光圈 平面镜 光线弱时 用大光圈 凹面镜 放大倍数的判断方法 目镜 镜头长放大倍数小 镜头短放大倍数大 物镜 镜头长放大倍数大 镜头短放大倍数小 二 有机物的检测方法 目镜 镜筒 转换器 粗准焦螺旋 细准焦螺旋 物镜 载物台 镜臂 遮光器 压片夹 反光镜 镜柱 通光孔 1 生物组织中还原糖的鉴定 1 实验原理 还原糖 如 葡萄糖 果糖 麦芽糖 与 斐林 试剂发生作用 生成 砖红色沉淀 2 所用试剂 斐林 试剂 甲液为 0 1g ml 的 NaOH 溶液 乙液 0 05g ml 的 CuSO4 溶液 注意 必需将甲液和乙液 等量混合均匀 现配现用 3 实验材料的选择 苹果或梨等 不能用甘蔗 甜菜 番茄等 4 方法步骤 取一支试管 向试管内注入 2mL 待测组织样液 研磨 过滤取滤液 向试管中注入 1ml 刚配制的 斐林试剂 将试管放入 50 65 温水的大烧杯中 水浴加热约 2 分钟 观察试管中溶液的颜色变化 2 淀粉的鉴定 试剂 碘液 颜色反应 蓝色 实验材料 马铃薯汁 3 脂肪 1 试剂 苏丹 染液 颜色反应 橘黄色 苏丹 染液 颜色反应 红色 2 实验材料的选择 花生种子或花生种子 匀浆 3 实验步骤 方法一 向待测组织液中滴加 3 滴苏丹 或苏丹 染液 观察样液染色情况 方法二 制作花生子叶切片 染色 洗去浮色 50 酒精 制片 显微镜观察 4 蛋白质 多肽 的鉴定 1 试剂 双缩脲试剂 颜色反应 紫色 鉴定的是 肽 键 注意 先加双缩脲试剂 A 0 1g ml 的 NaOH 溶液 1ml 后加双缩脲试剂乙 0 01g ml 的 CuSO4 溶液 4 滴 摇匀 2 材料 豆浆 鸡蛋白 5 DNA 的粗提取与鉴定 实验原理 1 DNA 在氯化钠溶液中的溶解度 是随着氯化钠的浓度变化而改 变的 当氯化钠的物质的量浓度为 0 14mol L 时 DNA 的溶解度最低 DNA 不溶于 酒精溶液 而细胞中的某些蛋白质能溶于酒精 利用 这一原理可以将 DNA 和蛋白质进一步分离 提取出含杂质较少的 DNA DNA 对酶 高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶能水解 蛋白质 但是对 DNA 没有影响 大多数 蛋白质 不能忍受 60 80 的高温 而 DNA 在 80 度以上才会变性 洗涤剂能够瓦解细胞膜 但是对 DNA 没有影响 2 DNA 遇二苯胺 沸水浴条件下变成蓝色 实验材料 鸡血 菜花 或蒜黄 菠菜 注意 1 实验材料的准备 用鸡血细胞液 而不用鸡全血 是因为血浆中不含 DNA 使用鸡血细胞也提 高了材料中的细胞数量 进而提高了 DNA 含量 从而可保证实验能提取到较多数量的 DNA 2 盛放鸡血细胞液的容器 最好是塑料容器 因本来就很少的 DNA 易被玻璃容器吸附 3 获取较纯净的 DNA 的关键步骤 1 充分搅拌鸡血细胞液 是鸡血细胞加速破裂 释放出 DNA 2 沉淀 DNA 是必须用冷酒精 对 DNA 的凝集效果较佳 3 正确搅拌含有悬浮物的溶液 以便获得较完整的 DNA 分子 6 观察 DNA 和 RNA 在细胞中的分布 1 试剂 甲基绿和吡罗红混合染色剂 2 实验原理 甲基绿和吡罗红两种试剂对 DNA 和 RNA 的亲和力不同 甲基绿使 DNA 呈现绿色 吡罗红使 RNA 呈现红色 3 实验材料 口腔上皮细胞 4 注意事项 0 9 NaCl 溶液作用 维持细胞 正常形态 盐酸作用 改变细胞膜的 通透性 加速染色剂进入细胞 同时使染色体中的 DNA 与蛋白质 分离 有利于 DNA 与染色剂的结合 5 实验结果 细胞核染成 绿 色 细胞质染成 红 色 6 实验结论 真核细胞的 DNA 主要分布在 细胞核 中 RAN 主要分布在 细胞质 中 三 用显微镜观察线粒体和叶绿体 实验原理 1 叶绿体的观察 植物绿色部位的细胞中含有叶绿体 如果将叶片的横切片制成临时装片 就可以在 显微镜下观察到叶绿体 某些植物幼嫩的叶也可直接用于观察叶绿体 2 线粒体的观察 健那绿将活细胞中的线粒体染成蓝绿色 线粒体是细胞进行有氧呼吸的主要场所 内含细胞色素氧化酶系 健那绿是一种碱性染料 可以专一性地 对线粒体进行染色 与线粒体内的细胞色素氧化酶系发生作用时 染料始终保持氧化状态 呈蓝绿色 而线 粒体周围的细胞质中的染料被还原为无色的状态 通过染色可以在高倍显微镜下观察到呈现蓝绿色的线 粒体 注意 叶绿体在显微镜下观察 绿色球形或椭球形 用健那绿染液染色后的口腔上皮细胞中线粒体成蓝绿色 细胞质接近无色 藓类叶为单层细胞 菠菜叶下 表皮略带一些叶肉也可 叶绿体呈椭圆形 可随细胞质的流动而流动 叶绿体在弱光下以最大面积 长 轴 转向光源 在强光下以最小面积 短轴 转向光源 植物线粒体相对较少 叶绿体颜色易掩盖线粒 体被染成的蓝绿色 所以一般不用植物细胞观察线粒体 四 体验制备细胞膜的方法观察植物细胞的质壁分离和复原 一 体验制备细胞膜的方法 实验原理 动物细胞没有细胞壁 人和其他哺乳动物的成熟的红细胞中没有细胞核和众多的细胞器 因 此制备细胞膜更容易 动物细胞 如红细胞吸水胀破或失水收缩 细胞膜 相当于半透膜 当外界溶液的浓度 小于 细胞质浓度 细胞吸水 当外界溶液的浓度 大于 细胞质浓度 细胞失水 方法步骤 1 准备一定量的新鲜的哺乳动物血液 如羊血或猪血 在冰箱中静置一昼夜 用滴管将上清液吸去 再吸取 1 mL 的沉淀物 放入离心管中 加入生理盐水 2 mL 在 2 000 r min 条件下离心 5 min 去除上清 液 在沉淀中再加入生理盐水 2 mL 再离心一次 去除上清液 留沉淀备用 以上操作的目的是洗去血浆成分 避免血浆对血细胞的缓冲作用 从而使红细胞的溶血现象更加明显 2 取一个 5 mL 的小烧杯 加入生理盐水 2 3 mL 3 用滴管在沉淀的下层吸取一小滴血细胞 滴入小烧杯的生理盐水中 以达到稀释红细胞的目的 以 免观察时 由于细胞密度太大 影响观察效果 4 取另一个滴管 在小烧杯中轻轻搅拌 然后吸取少量的血细胞稀释液 在载玻片的中央滴很小的一 滴 加盖玻片 5 先在低倍镜下观察红细胞的正常形态 可见其边缘完整发亮 6 在盖玻片的一侧加一滴蒸馏水或清水 在另一侧非常小心地用吸水纸慢慢地吸引 防止把红细胞全 部吸入吸水纸中而影响观察 边加水边观察 注意红细胞的形态变化 红细胞会随着水流向一侧漂移 观察时注意移动玻片 红细胞体积逐渐变大 变得非常鼓胀 在视野中可以找到少数胀破的红细胞 它 们已失去完整发亮的边缘 变成弥散状 二 观察植物细胞的质壁分离与复原 原理 当细胞液的浓度 小于 外界溶液浓度时 细胞液中的水分就透过 原生质层 进入到外界溶液中 使细 胞壁和 原生质层 都出现一定程度的收缩 由于 原生质层 的伸缩性比 细胞壁 大 当细胞不断失水时 原生质层就会与细胞壁 逐渐分离开来 即发生质壁分离 细胞失水 当细胞液的浓度 大于 外界溶液浓度时 外界溶液中的水分就进入到细胞液中 整个 原生质层 就会 慢慢恢复原状 使植物细胞发生质壁分离复原 细胞吸水 注意 原生质层 细胞 膜 液泡膜和两层膜之间的 细胞质 相当于半透膜 实验过程中关键是观察细胞中紫色的中央液泡的大小以及原生质层的位置 细胞发生质壁分离后 细胞壁与细胞膜之间的空隙充满的是 0 3mg mL 蔗糖溶液 动物细胞能发生渗透 作用但不会发生质壁分离 细胞放在 0 3 KNO3 溶液中现象 先质壁分离 后复原 应用 a 可检测细胞的死活 b 检测细胞液浓度 五 观察植物细胞的有丝分裂 一 实验原理 1 植物根尖 茎尖等分生区细胞能进行有丝分裂 2 在有丝分裂过程中 染色体发生规律性动态变化 3 染色体可被碱性染料着色 便于观察 4 根据显微镜下观察到的染色体特点可识别有丝分裂不同时期 二 方法步骤 培养根尖 洋葱底部接触广口瓶内清水 放 温暖 处 3 4 天 5 cm 时用于实验 装片制作 1 取材 取根尖 2 3 mm 2 解离 放进 盐酸 和 酒精 的混合液中 3 5 min 3 漂洗 放入盛有 清水 的玻璃皿中 约 10 min 4 染色 根尖放进 龙胆紫溶液 或 醋酸洋红 的玻璃皿中 3 5 min 5 制片 根尖放在载玻片上 加一滴 清水 用镊子把根尖弄碎 盖上盖玻片 再加上一片载玻片 用 拇指 轻轻地压载玻片 观察 1 低倍镜观察 找到分生区 其特点是呈正方形 排列紧密 2 高倍镜观察 首先找出细胞分裂中 期细胞 再找出 前期 后期和末期 细胞 观察各个时期细胞 内染色体形态和分布的特点 最后观察分裂间期的细胞 绘画 实验小结 1 观察部位 根尖分生区细胞 2 染液 龙胆紫或醋酸洋红 3 制作流程 解离 漂洗 染色 制片 解离 盐酸 15 和酒精 95 1 1 混合液 或质量分数为 10 的盐酸 目的 使组织中的细胞相互分 离 细胞已死亡 漂洗 清水 目的 洗去药液 防止解离过度 并有利于染色 染色 龙胆紫溶液 或醋酸洋红液 目的 使染色体着色 利于观察 制片 根尖弄碎 盖上盖玻片 再加一片载玻片 拇指轻轻地按压载玻片 目的 使细胞分散开来 有利于观察 4 观察 低倍镜下找到根尖分生区细胞 换高倍镜下观察 根据染色体形态和分布的特点判断时期 处于分裂间期的细胞数目最多 间期时间最 长 六 叶绿体色素的提取和分离 1 实验原理 提取 叶绿体中的色素能溶解在有机溶剂无水乙醇中 所以可以用无水乙醇提取叶绿体中的色素 分离 叶绿体中的色素在层析液中的溶解度不同 溶解度高的随层析液在滤纸上扩散的快 溶解度低 的随层析液在滤纸上扩散的慢 2 实验程序 1 称取 5g 绿色叶片并剪碎 提取色素 研钵 研磨 玻璃漏斗过滤 滤液收集到 试管内并及时用棉塞将试管口塞严 2 加入少量 SiO2 CaCO3 和 10ml 无水乙醇 1 将干燥的滤纸剪成 6cm 长 1cm 宽的纸条 剪去一端两角 使层析液同时到达滤液细线 制滤纸条 2 在距剪角一端 1cm 处用铅笔画一条细的横线 1 用毛细管吸少量的滤液沿铅笔线处小心均匀地划一条滤液细线 滤液划线 2 干燥后重复画 2 3 次 1 向烧杯中倒入 3ml 层析液 以层析液不没及滤液细线为准 分离绿叶 中的色素 2 将滤纸条 有滤液细线的一端朝下 轻轻插入层析液中 3 用培养皿盖盖上烧杯 观察结果 滤纸条上出现四条宽度 颜色不同的彩带 如下图 3 光和色素的吸收光谱 叶绿素主要吸收蓝紫光和红光 类胡萝卜素主要吸收蓝紫光 4 实验关键 1 选材时应注意选择鲜嫩 色浓绿 无浆汁的叶片 如菠菜叶等 2 画滤液细线时 应以细 直 颜色浓绿为标准 重复画线时须等上次画线干燥后再进行 重复 2 3 次 3 层析时不要让滤液细线触及层析液 5 注意事项 因有机溶剂易挥发且有一定毒性 所以研磨要快 收集的滤液要用棉塞塞住 层析时要加盖 尽量减少 有机溶剂的挥发 在研磨时要加少许二氧化硅 目的是为了研磨充分 有利于色素的提取 加少许碳酸钙的目的是为了防止研磨过程中 叶绿体中的色素受到破坏 分离色素时 一定不要让滤纸条上的滤液细线接触到层析液 这是因为色素易溶解在层析液中 导致色 素带不清晰 影响实验效果 七 探究酵母菌的呼吸方式 酵母菌是一种单细胞真菌 在有氧和无氧条件下都能胜春 属于兼性厌氧菌 因此便于用来研究细胞呼 吸的不同方式 1 新陈代谢类型 异养兼性厌氧型 异化作用的类型 兼性厌氧型 2 二氧化碳的检测 方法一 二氧化碳可是澄清的石灰水变混浊 根据混浊的程度判断二氧化碳产生的多少 方法二 二氧化碳可使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄 因此将气体通入溴麝香草酚蓝水溶液 根 据溴麝香草酚蓝水溶液变成黄色的时间长短判断二氧化碳的多少 3 酒精的检测 橙色的重铬酸钾 在酸性条件下 与酒精发生化学反应 变成 灰绿色 4 控制有氧和无氧的条件 甲 通空气 用橡皮球打空气 乙 不通空气 密封放置一段时间 再通石灰水 进入 A 锥形瓶中的空气要经过质量分数 10 的 NaOH 处理 原因是 NaOH 吸收 CO2 清除空气中的 CO2 5 实验结果及其分析 甲 乙装置石灰水都变混浊 装置甲混浊快且程度高 说明酵母菌在有氧和无氧条件下产生二氧化碳 但有氧比无氧放出的二氧化碳多且快 乙中酵母菌培养液的滤液使橙色的酸性重铬酸钾的溶液变成灰绿色 甲无变化 说明酵母菌在无氧呼吸 作用下产生酒精 6 实验结论 酵母菌在有氧和无氧条件下都能进行细胞呼吸 在有氧条件下 酵母菌通过细胞呼吸产生大量的二 氧化碳 在无氧呼吸作用下 酵母菌通过细胞呼吸产生酒精 还产生少量二氧化碳 八 酶 一 高效性 实验 比较过氧化氢酶和 Fe3 的催化效率 主要与无机催化剂相比 实实验验组组加加入入过过氧氧化化 氢氢酶酶溶溶 液液 4 4 实实验验组组常常温温 加加入入 F Fe eC Cl l3 3溶溶 液液 3 3 实实验验组组高高温温 9 90 0 水水 浴浴 2 2 对对照照组组常常温温1 1 现现象象组组别别图图示示处处理理情情况况编编号号 2ml2ml过过氧氧化化氢氢溶溶液液过过氧氧化化氢氢溶溶液液 实实验验步步骤骤 过过氧氧化化氢氢的的分分解解速速率率 十十分分缓缓慢慢 难难以以观观察察 到到气气泡泡的的产产生生 过过氧氧化化氢氢分分解解速速率率加加 快快 有有大大量量小小气气泡泡产产生生 与与2 2号号试试管管相相比比 有有 更更多多的的气气泡泡产产生生 3 3号号试试管管相相比比 气气泡泡 大大并并且且产产生生的的速速率率快快 常温常温 二 专一性 每一种酶只能催化一种或一类化学反应 探索唾液淀粉酶对淀粉和蔗糖水解的作用 设计思路一 换反应物不换酶 设计思路二 换酶不换反应物 三 作用条件较温和 1 探究温度对淀粉酶活性的影响 实验原理 酶的活性受温度和 pH 等条件的影响 适宜的温度和 pH 有利于酶发挥活性 方法步骤 1 取 2 支洁净的试管 编上 1 号和 2 号 并分别加入 2 mL 的质量分数为 3 的淀粉溶液 见下表 2 另取 2 支洁净的试管 编上 1 号和 2 号 并分别加入 2 mL 的质量分数为 2 的淀粉酶溶液 3 将 1 号和 1 号试管放入 60 的水浴中保温 5 min 2 号和 2 号试管放入 100 的水浴中保温 5 min 4 将 1 号试管中的淀粉酶溶液倒入 1 号试管中 轻轻振荡混合液 并将 1 号试管继续放在 60 的水 浴中加热 10 min 将 2 号试管中的淀粉酶溶液倒入 2 号试管中 轻轻振荡混合液 并将 2 号试管继续放 在 100 的水浴中加热 10 min 5 待 1 号和 2 号试管冷却至常温后 在 1 号和 2 号试管中分别滴入 2 滴碘液 并轻轻振荡 观察颜色 的变化 试管号 试管内容物条件检验现象 12 mL 淀粉溶液 2 mL 淀粉酶溶液60 碘液 或斐林试剂 加入碘液不变蓝 22 mL 淀粉溶液 2 mL 淀粉酶溶液100 碘液 或斐林试剂 加入碘液变蓝 说明 1 本实验和后面的第 2 个实验都应该将底物和酶分开保温 然后才混合在一起 2 在实验室中常用的淀粉酶为 淀粉酶 淀粉酶的适宜温度为 55 75 因此 本实验采用的 温度为 60 和 100 淀粉麦芽糖 葡萄糖 蔗糖葡萄糖 果糖 斐斐林林试试剂剂 砖砖红红色色沉沉淀淀砖砖红红色色沉沉淀淀 非还 原糖 淀粉酶 淀粉酶 还原糖 实验原理 轻轻振荡混合 60 保温5min 蔗蔗糖糖溶溶液液蔗蔗糖糖溶溶液液 淀淀粉粉酶酶淀淀粉粉酶酶 60OC 5min 淀淀粉粉溶溶液液淀淀粉粉溶溶液液 淀淀粉粉酶酶淀淀粉粉酶酶 水水浴浴加加热热 斐斐林林试试剂剂斐斐林林试试剂剂 斐斐林林试试剂剂斐斐林林试试剂剂 取取出出试试管管 各各加加入入2 2mmL L 斐斐林林试试剂剂 振振荡荡混混匀匀 2 2m mL L2 2m mL L2 2m mL L2 2m mL L注注入入注注入入 淀淀粉粉酶酶溶溶液液淀淀粉粉酶酶溶溶液液 3 3 3 3 2 2m mL L2 2m mL L 注注入入蔗蔗糖糖溶溶液液注注入入蔗蔗糖糖溶溶液液 2 2 2 2 2 2m mL L2 2m mL L注注入入淀淀粉粉溶溶液液注注入入淀淀粉粉溶溶液液 1 1 1 1 试管试管2 2试管试管1 1项目项目序号序号 实实验验 步步骤骤 3 在 2 号试管中滴加碘液前应将试管及其内容物冷却至常温 否则碘液会挥发 导致溶液不变色 2 探究 pH 对过氧化氢酶活性的影响 方法步骤 1 取 3 支洁净的试管 分别编上 1 2 3 号 2 在 3 支试管中分别加入 2 mL 的过氧化氢溶液 见下表 3 再另取 3 支试管 分别加入 1 mL 清水 1 mL 盐酸和 1 mL NaOH 溶液 并在试管上分别写上 1 2 和 3 4 在 1 号 2 号和 3 号试管中分别滴入 2 滴新鲜的肝脏研磨液 并轻轻振荡 静置 1 min 5 将 1 号 2 号和 3 号试管中液体分别倒入 1 号 2 号和 3 号试管中 并轻轻振荡 使试管内的 液体混合均匀 6 观察 1 号 2 号和 3 号三支试管内的变化 记录哪支试管产生的气泡多 加入的实验材料或试剂 试管号 过氧化氢溶液清水盐酸NaOH 溶液新鲜的肝脏研磨液 现象 12 mL1 mL 2 滴有大量的气泡产生 22 mL 1 mL 2 滴无气泡产生 32 mL 1 mL2 滴有少量的气泡产生 1 在 最适 温度 最适 PH 值条件下 酶的活性最高 描述酶活性与温度的关系 低于 最适 温度时 随温度的 升高 酶的活性逐渐 升高 达到 最适 温度时 酶的活性最高 超过 最适 温度时 酶的活性逐渐 降低 当温度达到一定限度时 酶会失 活 2 温度过高 强酸 强碱破坏酶的 空间结构 使酶永久失活而变性 且不可逆 低温如 0 左右时 酶的活性很低 但酶的 空间结构 稳定 在适宜的温度下酶的活性可以升高 九 微生物的培养与应用 一 微生物的分离和培养 1 培养基 1 成分 一般是碳源 氮源 水和无机盐 如牛肉膏 蛋白胨培养基 牛肉膏主要提供碳源 其次有无机盐和维生素 蛋白胨主要提供氮源 其次有维生素 2 种类 选择培养基 培养基中加入某种物质 允许特定种类微生物生 长 抑制或阻止其他种 类微生物生长 分离出特定的微 生物 以尿素作唯一氮源可以分离分 解尿素的细菌 鉴别培养基 根据微生物的特点 加 入某种指示剂或化学药 品 鉴别不同种类的 微生物 刚果红可以鉴别纤维素分解菌 伊红 美蓝鉴别大肠杆菌 菌 落呈黑色 深紫色 并带有金 属光泽 3 制备过程 计算 称量 溶化 灭菌 倒平板 注意倒平板的操作技术 冷却 50 度左右倒 酒精灯火焰旁 冷凝后倒置 2 无菌技术 1 消毒 较温和的物理或化学方法杀死体表或内部一部分有害微生物 不包括芽孢和孢子 方法 煮沸消毒法 巴氏消毒法 如鲜奶 化学药物消毒法 70 酒精擦手 紫外线消毒法 操作空间 2 灭菌 强烈的理化因素杀死体内外所有微生物 包括芽孢和孢子 方法 灼烧灭菌 接种环 试管口 涂布器等用具 干热灭菌 耐高温 需干燥的物品如玻璃器皿 高压蒸汽灭菌 适用广泛如培养基 无菌水 3 微生物接种的方法 两种 平板划线法 操作简单 但是单菌落不易分离 稀释涂布平板法 操作复杂 包括系列稀释操作和涂布平板操作两步 注意 1 平板划线操作的三次灭菌 第一次灼烧第二次灼烧第三次灼烧 目的 避免接种环上可能存 在的微生物污染培养 物 杀死上次划线结束时接种环上 残留的菌种 使每次划线的菌 种均来自上次划线的末端 杀死接种环上残留的菌种 避免细菌污染环境和感染操 作者 2 微生物分离的原理 平板划线法原理 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作 将聚集的菌种逐渐稀释分散到培 养基的表面 在数次划线后的培养 可以分离得到由一个细胞繁殖而来肉眼可见的子细胞群体 即形成 单个菌落 稀释涂布平板法原理 将菌液进行一系列的的浓度稀释后 10 倍系列稀释 将不同稀释度的菌液涂布到 固体培养基的表面 当稀释度足够高时 聚集在一起的微生物将被分离成单个细胞 从而在培养基上形 成单个菌落 二 测定某种微生物数量 统计菌落数目的方法 两种 1 显微镜直接计数法 原理 利用特定的细菌计数板活血细胞计数板 在显微镜下计算一定容积的样 品中微生物数量 缺点 不能区分死菌和活菌 2 活菌计数法 原理 样品稀释度足够高时 培养基表面生长的一个菌落 来源于样品稀 释液中的的一个活菌 通过统计菌落数 推测样品中大概含有多少活菌 接种方法 稀释涂布平板法 计数 一般选择菌落数在 30 300 的平板进行计数 计算公式 每克样品中的菌落数 C V M 字母含义 C 某稀释度下平板上生长的平均菌落数 V 涂布平板时所用稀释液的体积 M 稀释倍数 注意 统计的菌落数往往比活菌的实际数目低 三 简述微生物的利用 1 分解尿素的细菌鉴定原理 现象 在尿素作为唯一氮源的培养基种加入酚红指示剂 指示剂变红 原因 利用尿素的微生物合成的脲酶将尿素分解成氨 氨会使培养基碱性增强 pH 升高 于是培养基中 的酚红由黄色变为红色 2 分解纤维素的微生物的分离原理 利用纤维素为主要碳源的选择培养基分离出分解纤维素的微生物 现象 刚果红染色法 通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌 原因 分解纤维素的微生物中有纤维素酶 四 利用微生物发酵来生产特定的产物 酵母菌醋酸菌毛霉乳酸菌 生物学分类真核生物原核生物真核生物原核生物 代谢类型异养兼性厌氧异养需氧异养需氧异养厌氧 生产应用酿酒酿醋制作腐乳制作泡菜 发酵条件 前期需氧 后期不需 氧 一直需氧一直需氧无氧 十 生物学重大发现的启迪 必修一 1 细胞学说的建立者主要是两位德国科学家施莱登和施旺 通过对动植物细胞的研究而揭示细胞统一性 和生物体结构统一性 方法 观察法 2 分离各种细胞器的方法 差速离心法 3 生物膜结构的探索历程 1 通过用 500 多种化学物对细胞的通透性进行实验 发现 凡是可以溶于脂质的物质 比不能溶于脂 质的物质更容易通过细胞膜进入细胞 结论 膜是由脂质组成的 2 化学分析表明 质膜的主要成分是磷脂和蛋白质 3 用丙酮从人的红细胞中提取脂质 在空气 水界面上铺展成单分子层 测得单分子层的面积恰为 红细胞表面积的 2 倍 结论 细胞膜中的脂质分子必然排列为连续的两层 4 电镜下观察到了细胞膜清晰的暗 亮一暗的三层结构 5 将质膜冰冻 然后将其撕裂 用电子显微镜的观察到撕裂面上有许多颗粒 这些颗粒就是镶嵌在脂 双层中的蛋白质分子 6 科学家用发绿色荧光的染料标记小鼠细胞表面的蛋白质分子 用发红色荧光的染料标记人的细胞表 面的蛋白质分子 将小鼠细胞和人细胞融合 这两种细胞刚融合时 融合细胞的一半发绿色荧光 另一 半发红色荧光 在 37 下经过 40 min 两种颜色的荧光均匀分布 这一实验表明细胞膜具有 流动性 7 在新的观察和实验证据的基础上 提出流动镶嵌模型 启迪 膜结构和成分的研究最初都是先根据实验现象和有关知识 提出假说 根据假说设计实验方法来 证明假说 而不是通过实验观察直接证实的 3 1880 年 美国科学家恩格尔曼把载有水绵和好氧细菌的临时装片放在没有空气的黑暗环境中 然后用 极细的光束照射水绵 他发现细菌只向叶绿体被光束照射到的部位集中 如果临时装片暴露在光下 细 菌则分布在叶绿体所有受光的部位 实验结论是 氧气是叶绿体释放的 叶绿体是绿色植物进行光合作 用的场所 方法 实验法 4 1864 年 德国植物学家萨克斯做了一个实验 他把绿叶先在暗处放置几小时 目的是消耗掉叶片中的 营养物质 然后 他让叶片一般曝光 另一半遮光 过一段时间后 他用碘蒸气处理这片叶 发现曝光 的一半呈深蓝色 遮光的一半则没有颜色变化 这一实验成功地证明了 光合作用的产物除氧气外还有 淀粉 5 美国科学家鲁宾和卡门实验证明了 光合作用释放的氧气来自于 水 方法 同位素标记法 第一组 向植物提供 H2O 和 C18O2 第二组向同种植物提供 H218O 和 CO2 同位素示踪法的应用还有 分泌蛋白的合成 光合作用氧气的产生 DNA 是遗传物质的直接证据 研究 DNA 的复制 目的基因的 检测和表达第一和第二步 DNA 分子杂交和 DNA RNA 分子杂交 等 必修二 1 孟德尔的遗传规律 基因的分离定律和基因的自由组合定律 假说 演绎法 2 萨顿基因位于染色体上的假说 方法 类比推理 将看不见的基因与看得见的染色体的行为进行类 比 提出应该注意的是 类比推理得出的结论并不具有逻辑的必然性 其正确与否 还需要观察和实验 的检验 3 摩尔根实验证明了基因在染色体 方法 假说 演绎法 把一个特定基因和一条特定的染色体 X 染色体联系起来 4 DNA 是主要的遗传物质 1 格里菲斯 肺炎双球菌的体内转化实验