SOP标准操作程序-CREA

SOP 标准操作程序标准操作程序 CREA 肌酐肌酐 货号 OSR6178 实验原理实验原理 肌酐测量用于诊断和治疗肾脏疾病 血清肌酐测定被证明在评价肾小球功能和监测肾 透析方面是有用的 但是 血清水平对于早期肾损坏并不敏感 在治疗肾衰竭的过程中 它对血液透析的反应比尿素氮 BUN 慢得多 血清肌酐和 BUN 都用来区分肾前性氮质 血症和肾后性 梗阻性的 氮质血症 血清 BUN 的增加并不伴随血清肌酐的增加对于识 别肾前性氮质血症是非常重要的 对于肾后性氮质血症 血清 BUN 和肌酐都增加 但是 增加并不是成比例地大于 BUN 血清肌酐水平随人的年龄 体重和性别而变化 有时它在肌肉块少 恶病质的病人 截肢者和老年人中的水平较低 血清肌酐水平正常并不排除肾功能受损 方法方法 奥林巴斯 AU640 肌酐的测定是 Jaffe 方法的改良动力学法 2 在这种方法中 肌酐在碱 性条件下和苦味酸发生反应 形成一种红 橙色化合物 但是 这个反应并不是肌酐所特有 的 因为其它的物质 如葡萄糖 丙酮酸盐 抗坏血酸和乙酰乙酸盐与苦味酸也会发生反 应 生成相似的颜色 3 Fabiny 和 Ertingshausen4发现 碱性肌酐苦味酸达到最大颜色变化 与假性肌酐有不同的速率 Cook5利用碱性苦味酸阳性物质不同的反应速率得到比 Jaffe 反 应更有针对性的结果 在 520 800nm 吸光度变化率与标本中肌酐浓度成正比 肌酐 苦味酸 红 橙色化合物 标本 标本 病人准备病人准备 无特殊要求 类型 类型 标本最好是无溶血的血清或肝素化的血浆 血清应从红血球中尽快分离出来 标本稳定性 标本稳定性 血清肌酐在 2 8 下稳定 7 天 在冰冻条件下 20 可长时间保存 仪器与材料仪器与材料 仪器仪器 奥林巴斯 AU640 生化分析仪 材料材料 奥林巴斯 AU640 肌酐 参与反应成份的最终浓度 氢氧化钠 120 mmol L 苦味酸 2 9 mmol L 其中含有保护剂 注意注意 1 此试剂为体外诊断用 不要吞服 2 R1 有腐蚀性 可燃烧 不要入口 避免和眼睛 皮肤或衣服接触 如果接触到 立即用大量的水冲洗受损害的部位 15 分钟 并寻找医疗保护 3 R2 有毒 不要入口 如果外部接触到 立即用大量的水冲洗受损害的部位 15 分 钟 接触到眼睛或吞服 立即寻找医疗保护 4 R2 含有苦味酸 快速加热或撞击会导致干燥苦味酸的爆炸 用水稀释溅出来的液 体并擦拭干净 试验用试管的直径在 12 16mm 定标液 奥林巴斯定标液 Cat No DR0040 用于血清 NERL 水性 100mg dL 标准 5045 用于尿 试剂准备试剂准备 奥林巴斯 AU640 的肌酐是即开即用的 无需特殊准备 执行参数执行参数 性能参数 以下数据是根据奥林巴斯 AU640 肌酐试剂已经建立的程序 精密度精密度 精密度的评估是根据 NCCLS 推荐的典型方法 10 AU640 批内精密度小于 3 总 精密度小于 5 用于分析的质控血清和数据处理符合以上的 NCCLS 的规则 血清 血清 N 100批 内精 密 度总 精密 度 平均值 mg dL SDCV SDCV 0 800 00 00 00 0 5 60 050 80 091 5 6 040 040 70 071 1 尿 尿 N 100批 内精 密 度总 精密 度 平均值 mg dL SDCV SDCV 96 50 60 61 01 0 195 91 10 52 51 3 方法学比较方法学比较 血清 血清 奥林巴斯 AU640 肌酐 方法 1 与其它奥林巴斯分析仪器 方法 2 共同做 176 个病人标本 相关系数达到 0 9998 回归方程如下 肌酐方法 1 肌酐方法 2 1 027 0 01 病人结果数值分布 0 2 25 4 mg dL 尿 尿 奥林巴斯 AU640 肌酐 方法 1 与其它奥林巴斯分析仪器 方法 2 共同做 176 个 病人标本 相关系数达到 0 9998 回归方程如下 肌酐方法 1 肌酐方法 2 1 000 0 9 病人结果数值分布 11 281 mg dL 敏感度敏感度 在奥林巴斯 AU640 生化分析仪上每分钟变化 8 毫吸光度为 1 mg dL 试剂的贮存试剂的贮存 1 当保存于 2 8 不开盖情况下至标签的失效期 2 开盖后放于仪器的冰箱中可以稳定 14 天 变质指示变质指示 任何试剂有浊度或 R1 有沉淀时 表明试剂已变质 不能继续使用 校准校准 标准液的准备标准液的准备 奥林巴斯定标液 Cat No DR0040 奥林巴斯定标液是即开即用的 无需 特殊准备 校准程序校准程序 每 7 天需要定标一次 肌酐定标程序用奥林巴斯定标物 可追踪到全国科学技 术学会 NIST 标准参考材料 SRM 914a 当有以下情况时需要重新定标 1 换试剂批号或出现质控漂移时 2 当打开使用一瓶新的试剂时 3 当仪器做完保养后 4 重要零件更换时 质控质控 在每一批标本中都应把奥林巴斯水平 I 与 II 质控血清 DR0061 62 作为未知标本 进行分析 在所有的尿测定中 尿质控应用于所有的尿测定中 如 Bio Rad 尿化学质控 操作程序 逐步地 操作程序 逐步地 AU640 开机开机 1 确认两瓶清洗剂有足够的量 2 打开蒸馏水供应系统的阀门 3 如果没有设定自动开机 请按分析仪器上的 POWER ON 键 4 确认打印机为开机并处于联机状态 5 在 Start Condition 屏幕 输入所需信息 并按 F2 退出 6 如果要求输入密码 请输入密码 7 确认仪器上的在线试剂的位置是否正确 数量 体积 是否充足 不足请添加并在系统 状态中的试剂状态检查试剂 8 在急诊台 Wash1 的位置的试管中加满一支 1N HCL 的样品针清洗液 9 ISE 电极 需要以下步骤定标 a 在急诊台相应位置放血清 尿高和低值标准液 b 在系统状态菜单选择 ISE 状态菜单 c 选择 F5 选定合适的定标条目 d 定标完成后 确认斜率和因数是否在范围内 开始分析开始分析 1 把定标 质控 和标本架放在架子传送带上 2 用鼠标点击屏幕最上方的 START ANALYZER 图标 3 点击 F2 退出键 退回到主屏幕 分析参数分析参数 血清 血清 样品体积 20 微升 稀释水 0 微升 试剂 1 体积 120 微升 稀释水 90 微升 试剂 2 体积 120 微升 稀释水 0 微升 波长 520 800 方法 Fixed 读点 13 24 温度 37 尿尿 样品体积 5 微升 稀释水 0 微升 试剂 1 体积 120 微升 稀释水 0 微升 试剂 2 体积 60 微升 稀释水 0 微升 波长 520 800 方法 Fixed 读点 13 27 温度 37 完整的实验参数与操作程序可以在 AU640 用户手册中查到 计算 计算 无需手工计算 在 37 每个标本的结果自动以 mg dL 打印 报告结果报告结果 参考范围参考范围 参考值 参考值 血清 男性 0 7 1 3mg dL 女性 0 6 1 2mg dL 尿 男性 14 26mg Kg 24hr 女性 11 20mg Kg 24hr 参考值因性别 年龄 饮食和地域的不同而有所差别 根据好的实验室经验 每个实验室 应建立自己的参考值 血清结果来自德克萨斯州北部 300 个献血者 不正常结果的处理程序不正常结果的处理程序 根据仪器参数的正常值会打印异常标志 报告格式 报告格式 自动地打印 37 mg dL 的报告 如果以 SI 单位 mmol dL 报告结果 要乘以 88 4 操作过程注意事项操作过程注意事项 操作过程的限制性操作过程的限制性 OlympusAU640 血清测定的肌酐的线性范围是 0 2 25 0 mg dL 尿 测定的线性范围是 1 300 mg dL 样品浓度超过线性上限应稀释重做 在 AU640 中应用 自动重做功能 标本稀释重做后会自动乘以稀释倍数 超范围的标本也可以在四份生理盐水中加一份血清进行手工稀释 轻轻地混匀 在 AU640 上当常规标本 结果乘以 5 干扰物质干扰物质 研究结果表明肌酐受以下物质干扰 7 乳糜 乳糜达到 1000mg dL 时影响小于 3 溶血 血红蛋白达到 500mg dL 时影响小于 3 胆红素 胆红素达到 40mg dL 时影响小于 3 蛋白质 蛋白质达到 1 2 到 12g dL 时影响小于 3 Olympus 的研究结果是根据现时发表的文献 Olympus 美国公司正在进行准确性的研究 对于其它物质的干扰 请参看 Young8和 Friedman11等人发表的文献 参考文献 参考文献 1 Tietz N W ed Textbook of Clinical Chemistry W B Saunders 1986 2 Jaffe M Z Physiol Chem 10 391 1886 3 Soldin S J et al Clin Biochem 11 82 1987 4 Fabiny D L and ertingshausen G Clin Chem 17 696 1971 5 Cook J G H Clin Chem Acta 32 485 1971 6 Tietz N W Ed Fundamentals of Clinical Chemistry 3rd Edition W B Saunders 1987 7 NCCLS Interference Testing in Clincial Chemistry EP7 P 1986 8 Young D S Eff