1涂片找抗酸杆菌操作规程01

1 编号 QDFYJY WS001 1 0 2012 青海大学附属医院 检验科 章节 微生物实验室操作规程微生物实验室操作规程 标题 涂片找抗酸杆菌操作规程涂片找抗酸杆菌操作规程 作业指导书作业指导书 页 码 第 1 页 共 3 页 涂片找抗酸杆菌操作规程涂片找抗酸杆菌操作规程 1 检验目的 检验目的 检验样本中是否含有抗酸杆菌 为临床提供诊断依据 2 原理 原理 结核菌 麻疯杆菌 耻垢菌等抗酸性菌 因其菌体表面有一层类脂或脂质之皮膜而不易 着色 但一经着色后 酸性酒精的作用亦是不容易把它脱色 利用这特性并以增强的染色 液予染色 然后再以酸性酒精加以处理 使其脱色后再对比染色 此时抗酸性菌仍是固定 着最初色素的颜色 红色 也就易于鉴别 3 标本要求 标本要求 1 标本类型 病人的痰 穿刺关节液 腹水 胸积液 组织 脑脊液 分泌物 尿液 等 2 标本采集 挑取痰标本中 脓样或可疑部分 于玻片正面均匀涂抹成卵圆形痰膜 自然干燥 染色前加热固定 4 容器和添加剂类型 容器和添加剂类型 痰盒 尿杯 试管等 5 试剂 试剂 1 试剂名称 染色液 2 产品型号 结核菌染色液 又名 抗酸染色液 TBStain 冷染法 3 试剂生产厂家 珠海贝索生物技术有限公司 4 包装规格 4X250ML 5 试剂组成 主要成份 试剂 1 石碳酸复红液 1 250ml 碱性品红 笨酚 试剂 2 酸性酒精溶液 2 250ml 乙醇 盐酸 试剂 3 亚甲基蓝溶液 1 250ml 亚甲蓝 2 第 2 页 共 3 页 6 仪器设备 仪器设备 OLYMPUS CX31 奥林巴斯双目显微镜 7 操作步骤 操作步骤 1 涂片自然干燥后 经火焰固定 加石碳酸复红溶液盖满玻片 染色 5 分钟或更久 不需加温 2 水洗 之后尽可能将水沥干 加酸性酒精溶液盖满玻片 脱色 1 2 分钟 3 水洗 假如标本面还可以看到残存红色时 再加酸性酒精溶液脱掉红色为止 4 加亚甲基蓝溶液 染色 30 秒 5 水洗干燥后 镜检 8 质量控制 质量控制 参加我科质量管理组的质量控制活动 9 干扰和交叉反应 干扰和交叉反应 麻风菌可能对检验结果产生影响 10 生物参考区间 生物参考区间 涂片未见抗酸杆菌 11 患者检验结果的可报告区间 患者检验结果的可报告区间 涂片未见抗酸杆菌 涂片见细长 红色抗酸杆菌 12 结果判断 结果判断 抗酸性菌 结核菌 呈红色 其它细菌及细胞呈蓝色 结核菌通常为长 1 3 3 5u 宽 0 3 0 5u 多少有点弯曲之杆菌 没有鞭毛和芽孢 属难染性菌 但抗酸性染色可使其显著 被染 菌体有的成点状连着或成群也有 菌少的时候每 2 3 个菌呈 V Y T 字状的特有 集结 13 临床意义 临床意义 结核分枝杆菌不产生内毒素和外毒素 其毒力主要是在机体中细胞内 外生长与大量繁 殖的能力 细菌成分与其代谢产物引起免疫反应 型 导致一系列组织学上的意义 3 第 3 页 共 3 页 14 注意事项 注意事项 1 脱色液用完后 可自制 3 盐酸酒精溶液作为脱色液 2 每次试剂用完后 请迅速盖好 以免挥发 3 抗酸染色直接用于痰标本时 可以适当增加标本涂片的厚度 以提高检出率 染 厚涂片时 须掌握复染时间 如果背景过深 会影响镜检 4 有时同一抗酸菌体上 红色的深浅亦有不同 观察时应予注意 5 试剂盒储存时 尽量避免高 低温环境及阳光直射 6 病理组织片的抗酸染色 建议使用热染法 但需要注意的是 Carbolfuchsin 的染色 时间不能低于 5 分钟 如此即可得到较好的染色效果 7 冬季室温过低时 染色时间要适当延长 8 本品应有专业人员使用 9 使用前应详细阅读使用说明书 在有效期