验证方案-异烟肼含量

分析方法验证方案分析方法验证方案 分析方法名称 异烟肼含量测定分析方法 验证文件编号 分析方法号 中国药典 2010 年版二部页数 1 7 验证原因验证原因 验证类型验证类型 新项目验证 再验证 其它 预验证 回顾性验证 转移验证 方法描述方法描述 本分析方法为中国药典 2010 版二部方法 为确保其检测结果准确 对该分析方法的专属性 精密度 系统精密度 方法精密度 中间精密度 线性和范围 准确度 耐用性进行评价 验证依据验证依据 中国药典 2010 年版分析方法 295 页 验证时间验证时间 2010 年 07 月 09 日 2010 年 07 月 10 日 验证项目组成员及职责验证项目组成员及职责 部门成员职责 QC仪器设备的确认 QC分析方法编写 QC分析测试 QC数据评估 质量部审核批准 分析方法验证方案分析方法验证方案 分析方法名称 异烟肼含量测定分析方法 验证文件编号 分析方法号 中国药典 2010 年版二部页数 2 7 验证内容验证内容 序列号确认测试项目可接受标准 01 01 1 01 2 仪器设备的确认 高效液相色谱仪的确认 天平的确认 符合仪器设备的确认要求 符合仪器设备的确认要求 02 02 1 具体测试内容 系统精密度 配置 1 份异烟肼工作标准溶液 连续进针 6 次 记录异烟肼 峰面积 保留时间 异烟肼峰面积 RSD 2 0 保 留时间 RSD 2 0 异烟肼理 论塔板数大于 4000 拖尾因 子在 0 9 1 4 之间 02 2方法精密度 平行配制同一批样品的 6 份样品溶液 每份溶液进样 2 针 计算样品含量及其相对标准偏差 样品含量的 RSD 2 0 02 3线性和范围 以异烟肼工作标准品溶液的浓度为 100 配制 20 60 100 140 180 浓度的工作标准品溶液 每个浓度的标准品溶液进样 1 次 计算出回归方程和相关系 数 R R 0 999 02 4准确度 以异烟肼工作标准品溶液的浓度为 100 取同一批样品 配 制浓度为 80 100 和 120 的样品溶液各 3 份 每份进样 2 针 计算其回收率 该定量方法的回收率应为 98 0 102 0 02 5耐用性 配制异烟酸和异烟肼混合溶液 按下列条件改变方法 稳定 后按顺序进样 计算异烟肼的理论塔板数 混合溶液中异烟 酸和异烟肼的相对保留时间 RRT a 改变流速为 0 9ml min 和 1 1ml min b 改变柱温为 23 和 27 c 改变流动相缓冲液与甲醇配比为 83 17 和 87 13 d 同一填料不同色谱柱 理论塔板数大于 4000 拖尾 因子在 0 9 1 4 之间 分离 度 R 1 5 相对保留时间 RRT 偏差绝对值不大于 20 03 03 1 03 2 03 3 03 4 程序及文件 液相色谱仪校正规程 液相色谱仪操作规程 分析天平校正规程 分析天平操作规程 符合要求 符合要求 符合要求 符合要求 分析方法验证方案分析方法验证方案 分析方法名称 异烟肼含量测定分析方法 验证文件编号 分析方法号 中国药典 2010 年版二部页数 3 7 验证前准备验证前准备 a 人员培训 培训人姓名培训时间培训内容 b 仪器设备 标准品和试剂 仪器设备 仪器名称型号编号校验有效期 高效液相色谱仪 MODEL200 标准品和试剂 名称级别厂家批号 c 样品 名称厂家批号 分析方法验证方案分析方法验证方案 分析方法名称 异烟肼含量测定分析方法 验证文件编号 分析方法号 中国药典 2010 年版二部页数 4 7 验证过程验证过程 色谱条件 色谱条件 色谱柱 agilent ODS 2 长度 250cm 内径 4 6mm 填料 C18 填料粒度 5 m 检测波长 262nm 带宽 30 柱温 25 进样量 20 l 流速 1 0ml min 流动相 A 0 02mol l 磷酸氢二钠溶液 用磷酸调 pH 至 6 0 流动相 B 甲醇 A B 85 15 停止时间 12min 1 系统精密度 1 1 溶液配制 系统精密度溶液 取异烟肼 10mg 置 100ml 容量瓶中 精密称量 用水溶解并稀释至刻度 1 2 验证过程及结果 系统精密度溶液连续进样 6 次 记录其异烟肼峰面积 保留时间 可接受标准 异烟肼峰面积 RSD 2 0 保留时间 RSD 2 0 序号保留时间 min 峰面积 1 2 3 4 5 6 RSD 结论 2 重现性试验 方法精密度 2 1 溶液配制 2 1 1 对照溶液 取异烟肼工作标准品 10mg 精密称量 置 100ml 容量瓶中 用水溶解并稀释至刻 度 2 1 2 方法精密度溶液 取异烟肼样品 10mg 置 100ml 容量瓶中 精密称定 用水溶解并稀释至刻度 用此方法配置同一批号的样品溶液 6 份 2 2 验证程序及结果 工作标准品溶液进 2 针 样品溶液各进 2 针 记录异烟肼峰面积 计算样品含量 可接受标准 异烟肼含量的 RSD 2 0 分析方法验证方案分析方法验证方案 分析方法名称 异烟肼含量测定分析方法 验证文件编号 分析方法号 中国药典 2010 年版二部页数 5 7 样品批号 峰面积称样量 mg 12 平均值 含量 RSD 结论 3 线性和范围 3 1 溶液配制 3 1 1 a 供试品溶液 取异烟肼 50mg 置 100ml 容量瓶中 精密称量 用水溶解并稀释至刻度 混 匀 即得 3 1 2 线性点溶液 精密移取 a 供试品溶液 5ml 2ml 1ml 分别置 10ml 容量瓶中 用水稀释至刻 度 得到浓度约为 50ug ml d 供试品溶液 100ug ml c 供试品溶液 250ug ml b 供试品 溶液 500ug ml a 供试品溶液 的线性点溶液 再精密移取 1ml b 供试品溶液 1ml 置 100ml 容量瓶中 用水稀释至刻度 得到浓度约为 2 5ug ml e 供试品溶液 3 2 验证程序及结果 按色谱条件分别对线性点溶液进行分析 每个溶液进样 1 次 以浓度为 X 轴 主峰峰面积平均值为 Y 轴 画出线性图 求出回归方程 计算线性相关系数R 可接受标准 R 0 999 项目 X1 X2 X3 X4 X5 线性点溶液浓度 ug ml 异烟肼峰面积 线性范围 ug ml 线性回归方程 相关系数R 结论 4 准确度 4 1 溶液配制 4 1 1 对照溶液 取异烟肼 10mg 置 100ml 容量瓶中 精密称量 用水溶解并稀释至刻度 混匀 即得 4 1 2 准确度溶液 以对照溶液浓度为 100 配置 80 100 和 120 浓度的准确度溶液 即分别 取同一批异烟肼样品 8mg 10mg 12mg 至 100ml 容量瓶中 精密称量 用水溶解并稀释至刻 度 每个浓度的准确度溶液配制 3 份 4 2 验证程序及结果 分析方法验证方案分析方法验证方案 分析方法名称 异烟肼含量测定分析方法 验证文件编号 分析方法号 中国药典 2010 年版二部页数 6 7 按照色谱条件分别对对照溶液和准确度溶液进行分析 每个溶液各进 2 针 按外标法计算准确度溶液 中异烟肼含量 计算其回收率 可接受标准 该定量方法的回收率应为 98 0 102 0 回收率 RSD 2 0 样品批号 峰面积 相应含量 称样量 mg 12 平均值 实测量 mg 回收率 80 100 120 结论 5 耐用性 5 1 溶液配制 5 1 1 混合溶液 精密称取 10mg 异烟酸和 10mg 异烟肼样品置 100ml 容量瓶中 用水溶解并稀释至 刻度 混匀 即得 5 2 验证过程及结果 按下列条件改变方法 原条件溶液和改变色谱条件的顺序进样 计算异烟肼的理论塔板数 拖尾因子 计算相对保留时间 RRT 偏差绝对值 a 改变柱温为 23 和 27 b 改变流速为 0 9ml min 和 1 1ml min c 改变 0 02mol l 磷酸氢二钠溶液 磷酸调 pH 至 6 0 与甲醇配比为 87 13 和 83 17 d 选用同一填料的两个不同色谱柱比较 可接受标准 理论塔板数大于 4000 拖尾因子在 0 9 1 4 之间 分离度 R 1 5 相对保留时间 RRT 偏差绝对值不大于 20 条件异烟肼理论塔板数异烟肼拖尾因子 原条件 0 9ml min a 1 1ml min 23 b 27 87 13 c 83 17 色谱柱 1 d 色谱柱 2 分析方法验证方案分析方法验证方案 分析方法名称 异烟肼含量测定分析方法 验证文件编号 分析方法号 中国药典 2010 年版二部页数 7 7 异烟酸 条件 RRT 偏差绝对值 原条件 23 a 27 0 9ml min b 1 1ml min 87 13 c 83 17 色谱柱 1 d 色谱柱 2 结论 验证结论验证结论 验证结果见表 验证项目可接受标准验证结果判定 系统精密度 异烟肼的峰面积及保留时间 的 RSD 均不大于 2 0 异 烟肼理论塔板数大于 4000 方法精密度RSD 不大于 2 0 线