葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法

葡萄葡萄糖氧化酶法测定血清 浆 葡萄糖糖氧化酶法测定血清 浆 葡萄糖 原理 葡萄糖氧化酶 glucose oxidase GOD 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖 酸 并释放过氧化氢 过氧化物酶 peroxidase POD 在色原性氧受体存在 时将过氧化氢分解为水和氧 并使色原性氧受体 4 氨基安替比林和酚去氢缩 合为红色醌类化合物 即 Trinder 反应 红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含 量成正比 试剂 1 0 1mol L 磷酸盐缓冲液 pH7 0 称取无水磷酸氢二钠 8 67g 及无水磷 酸二氢钾 5 3g 溶于蒸馏水 800ml 中 用 1mol L 氢氧化钠 或 1mol L 盐 酸 调 pH 至 7 0 用蒸馏水定容至 1L 2 酶试剂 称取过氧化物酶 1 200U 葡萄糖氧化酶 1 200U 4 氨基安替 比林 10mg 叠氮钠 100mg 溶于磷酸盐缓冲液 80ml 中 用 1 mol L NaOH 调 pH 至 7 0 用磷酸盐缓冲液定容至 100ml 置 4 保存 可稳定 3 个 月 3 酚溶液 称取重蒸馏酚 100mg 溶于蒸馏水 100ml 中 用棕色瓶贮存 4 酶酚混合试剂 酶试剂及酚溶液等量混合 4 可以存放 1 个月 5 12mmol L 苯甲酸溶液 溶解苯甲酸 1 4g 于蒸馏水约 800ml 中 加温助 溶 冷却后加蒸馏水定容至 l L 6 100mmol L 葡萄糖标准贮存液 称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1 802g 溶于 12mmol L 苯甲酸溶液约 70ml 中 以 12mmol L 苯甲酸溶液定容至 100ml 2h 以后方可使用 7 5mmol L 葡萄糖标准应用液 吸取葡萄糖标准贮存液 5 0ml 放于 100ml 容量瓶中 用 12mmol L 苯甲酸溶液稀释至刻度 混匀 操作步骤 1 自动分析法 按仪器说明书的要求进行测定 2 手工操作法取试管 3 支 按下表操作 葡萄糖氧化酶法测血糖操作步骤 加入物 ml 空白管标准管测定管 血清 0 02 葡萄糖标准应用液 0 02 蒸馏水 0 02 酶酚混合试剂 3 03 03 0 混匀 置 37 水浴中 保温 15min 在波长 505nm 处比色 以空白管调零 读取标准管及测定管吸光度 计算 参考范围 空腹血清葡萄糖为 3 89 6 11mmol L 临床意义 1 生理性高血糖可见摄入高糖食物后 或情绪紧张肾上腺分泌增加时 2 病理性高血糖 1 糖尿病 病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者 2 内分泌腺功能障碍 甲状腺功能亢进 肾上腺皮质功能及髓质功能亢进 引起的各种对抗胰岛素的激素分泌过多也会出现高血糖 注意升高血糖的激素 增多引起的高血糖 现已归入特异性糖尿病中 3 颅内压增高 颅内压增高刺激血糖中枢 如颅外伤 颅内出血 脑膜炎等 4 脱水引起的高血糖 如呕吐 腹泻和高热等也可使血糖轻度增高 3 生理性低血糖 见于饥饿和剧烈运动 4 病理性低血糖 特发性功能性低血糖最多见 依次是药源性 肝源性 胰 岛素瘤等 1 胰岛 细胞增生或胰岛 细胞瘤等 使胰岛素分泌过多 2 对抗胰岛素的激素分泌不足 如垂体前叶功能减退 肾上腺皮质功能减退 和甲状腺功能减退而使生长素 肾上腺皮质激素分泌减少 3 严重肝病患者 由于肝脏储存糖原及糖异生等功能低下 肝脏不能有效地 调节血糖 注意事项 1 葡萄糖氧化酶对 D 葡萄糖高度特异 溶液中的葡萄糖约 36 为 型 64 为 型 葡萄糖的完全氧化需要 型到 型的变旋反应 国外 某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶 可加速这一反应 但在终点 法中 延长孵育时间可达到完成自发变旋过程 新配制的葡萄糖标准液主要是 型 故须放置 2h 以上 最好过夜 待变旋平衡后方可应用 2 葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量 但不能直接测定尿液葡萄 糖含量 因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高 可干扰过氧化物酶反应 造成 结果假性偏低 3 测定标本以草酸钾 氟化钠为抗凝剂的血浆较好 取草酸钾 6g 氟化钠 4g 加水溶解至 100ml 吸取 0 1ml 到试管内 在 80 以下烤干使用 可 使 2 3ml 血液在 3 4 天内不凝固并抑制糖分解 4 本法用血量甚微 操作中应直接加标本至试剂中 再吸试剂反复冲洗吸管 以保证结果可靠 5 严重黄疸 溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液 然后再进行测定 评价 线性范围至少可达 22 24mmol L 回收率 94 105 批内 CV 为 0 7 2 0 批间 CV 为 2 左右 日间 CV 为 2 3 葡萄糖氧 化酶法与己糖激酶法比较 73 份标本葡萄糖氧化酶法均值为 8 31mmol L 已糖激酶法均值 8 21mmol L 相关系数为 0 9986 回归方程 y 1 0026x 2 29 本法测定葡萄糖非常特异 从原理反应式中可知第一步是特异反应 第二步特 异性较差 误差往往发生在反应的第二步 一些还原性物质如尿酸 维生素 C 胆红素和谷胱甘肽等 可与色原性物质竞争过氧化氢 从而消耗反应过程中 所产生的过氧化氢 产生竞争性抑制 使测定结果偏低 然而 在本法的测定 条件下 溶血标本血红蛋白的浓度达 10g L 黄疸标本胆红素浓度达 342 mol L 维生素 C 小于 30mg L 均不影响测定结果 氟化钠浓度达 2g L 不干扰测定结果 标本中含尿素浓度达 46 7mmol L 尿酸浓度达 2 95mmol L 肌酐浓度达 4 42mmol L 半胱氨酸浓度达 3 30mmol L 甘油三酯浓度达 5 6mmol