新药申报资料(总)

综合药学实验报告综合药学实验报告 研究药物 盐酸普萘洛尔 研究成员 陈重均 朱俊峰 陈厚柳 王焕威 研究单位 浙江大学药学院本科教学实验中心 试验起止日期 2011 3 3 2011 6 10 目录目录 一 盐酸普萘洛尔药学研究资料综述 药学资料 7 二 盐酸普萘洛尔生产工艺的研究资料及文献资料 药学资料 8 三 盐酸普萘洛尔注射液处方及工艺的研究资料及文献资料 药学 资料 8 四 盐酸普萘洛尔质量研究工作的试验资料及文献资料 药学资料 10 五 盐酸普萘洛尔注射液质量研究工作的试验资料及文献资料 药 学资料 10 六 盐酸普萘洛尔检验报告书 药学资料 12 七 盐酸普萘洛尔注射液检验报告书 药学资料 12 八 盐酸普萘洛尔主要药效学试验资料及文献资料 药理毒理研究 资料 17 申请分类 新药申报临床试验 注册分类 第二部分 药学研究资料 编号 7 药 品 名 称 盐酸普萘洛尔 资料项目名称 药学研究资料综述 研究机构名称 加盖公章 浙江大学药学院本科教学实验中 心 研究机构地址 浙江省杭州市西湖区余杭塘路 388 号 研究机构邮编 研究机构电话 0571 研究机构主要研究者姓名 签字 姚彤炜 试验者姓名 王焕威 陈重均 朱俊峰 陈厚柳 试验起止日期 2011 3 3 2011 6 10 原始资料保存地点 浙江大学药学院实验中心 申请人机构联系人姓名 陈厚柳 申请人机构联系人电话 申请人机构联系人 E mail zju whw 申请人机构名称 公章 浙江大学药学院 药学研究资料综述 1 品种概况品种概况 药品名称 盐酸普萘洛尔注射液 注册分类 化学药品6类 产品功效 普萘洛尔为 肾上腺素受体阻断药 阻断心肌的 受体 减慢心率 抑 制心脏收缩力与房室传导 循环血流量减少 心肌氧耗量降低 临床上用于治疗多种 原因所致的心律失常 如房性及室性早搏 窦性及室上性心动过速 心房颤动等 但 室性心动过速宜慎用 1 1 产品研发状况简介 1 2 社会经济效益分析 2 主要研究成果总结主要研究成果总结 2 1 质量标准研究及起草说明 2 1 1 盐酸普萘洛尔质量研究与标准制订 2 1 2 盐酸普萘洛尔注射液的质量研究与标准制订 2 2 剂型选择依据 2 3 制备工艺及研究内容 2 3 1 制备工艺 2 3 2 制备工艺选择 3 参考文献参考文献 申请分类 新药申报临床试验 注册分类 第二部分 药学研究资料 编号 8 药 品 名 称 盐酸普萘洛尔 资料项目名称 生产工艺的研究资料及文献资料 研究机构名称 加盖公章 浙江大学药学院本科教学实验中 心 研究机构地址 浙江省杭州市西湖区余杭塘路 388 号 研究机构邮编 研究机构电话 0571 研究机构主要研究者姓名 签字 姚彤炜 试验者姓名 王焕威 陈重均 朱俊峰 陈厚柳 试验起止日期 2011 3 3 2011 6 10 原始资料保存地点 浙江大学药学院实验中心 申请人机构联系人姓名 陈重均 申请人机构联系人电话 申请人机构联系人 E mail zju whw 申请人机构名称 公章 浙江大学药学院 生产工艺的研究资料及文献资料 一 品种基本情况一 品种基本情况 通用名称 盐酸普萘洛尔 英文名称 propranolol hydrochloride 汉语拼音 yansuan punailuo er 化学名称 1 异丙氨基 3 1 萘氧基 丙醇盐酸盐 化学结构式 分子式 C16H21NO2 HCl 分子量 295 81 基本的理化性质 白色或类白色结晶性粉末 无臭 味微甜后苦 可溶于水或乙醇 微 溶于氯仿 二 合成工艺路线及选择依据二 合成工艺路线及选择依据 根据文献报道 目前普萘洛尔的合成路线有 8 条 但主要有只有以下 4 条 后几种路线的 原料均为较难获得的的化合物 因而不做考虑 1 合成路线一 OH O Cl HO N H O O O H2N CH3 CH3 12 3 5 5 HCl 4 合成路线二 O O 3 NH3 O OH NH2 CH3OHC O OH NCH3 H C H2 Pd C 奈 奈 奈 奈 7 8 9 合成路线三 CH CH3 CH3 H2N MgBr2 CH CH3 CH3 NHBrMg O O 3 4 10 奈 奈 奈 奈 合成路线四 CH CH3 CH3 H2N 4 CH3COOH CH CH3 CH3 NHH3COC 1112 O O 3 奈 奈 奈 奈 路线的确定 选择路线时我们优先选择药化实验室中已有的或容易合成的试剂为原料 一 些操作后处理和反应时间等相关因素也采取简便易行的 从反应式里我们可以看到 3 这个 化合物 环氧丙基醚 都是必不可少的 因而反应路线一 三 四在原理上基本是相同的 而从 3 合成普奈洛尔 采用路线一据文献报道即可达到 80 以上产率 相较后两种少一步 操作 因而采用路线一位反应路线 三三 反应路线反应路线 3 1 工艺反应路线 OH O Cl HO N H O O O H2N CH3 CH3 12 3 5 5 HCl 4 四 工艺操作过程四 工艺操作过程 4 1 合成路线一的反应 4 1 1 工艺配比 名称规格投料量 a 萘酚 g25 017g 氢氧化钠 g20g 乙醇 ml 适量 环氧氯丙烷 ml68ml 三乙胺 ml1ml 异丙胺 ml42ml 4 2 2 操作过程 全流程实验方法 1 取 l 一萘酚 25 019g 环氧氯丙烷 68ml 质量比 1 5 作为起始原料 加催化剂三乙胺 20 滴投入到装有回流冷凝管 250mL 圆底烧瓶中 加热 水浴控温 85 保持温度反应 6h 薄层跟踪至 1 萘酚反应完毕 降温到 40 加入 100 克 20 NaOH 溶液 振荡混匀 保持体系温度为 50 反应 20min 左右 充分静置分层 放掉碱层 有机层加入 50mL 去 离子水充分搅拌 慢慢加入稀盐酸 浓盐酸 水 1 5 约 0 5mL 充分中和到 pH 为 7 静置 分层 收集有机层 用 50mL 的去离子水再洗涤一次 静置分层 收集有机层 用旋转蒸发 仪将有机层减压蒸馏 彻底回收未反应的氧氯丙烷 体系温度不要超过 80 得到第一步 反应产物 称得重量 32 81mg 然后计算产物收率为 94 4 2 将上步反应所得的 32 81g 中间体全部用于下一步反应 再加入异丙胺 42ml 控制温 度 40 45 50 体系密封 按梯度温度分别反应 4 2 2h 薄层层析跟踪至反应完毕 慢慢升温 用旋转蒸发仪减压蒸馏回收未反应的异丙胺 彻底回收异丙胺 加入 10ml 甲苯 充分搅拌至凝固 冷却过夜 加入酒精洗涤抽滤得白色固体 干燥后称重得 20 84g 则该 步实际收率为 43 0 3 将所得的白色色固体 5 005g 用于第三步反应 酒精投入到装有回流冷凝管的 150mL 的 圆底烧瓶中 加入颗粒状活性炭 体系密封 加热回流 趁热过滤 滤液慢慢滴加浓盐酸 至 pH 为 2 冷却结晶 过滤 晶体用适量的酒精洗涤 得到白色的晶体 干燥得成品 称 量重量 6 000g g 计算产物收率 99 7 已满足纯度要求因而不再做重结晶 五 实验结果与讨论五 实验结果与讨论 5 1 收率 m 总 57 219g m 表面皿 36 378g m 产物 20 841g 产率 实际获得质量 理论产量 20 841g 51 437g 40 6 5 2 结构确认所需的资料 HPLC 纯度等 5 2 1 TLC 检查 现象及结果 第一步合成点板结果 展开剂 石油醚 乙酸乙酯 8 1 显色剂 FeCl3 加入 NaOH 重新环合后 展开剂 石油醚 乙酸乙酯 8 1 第一步乙酸乙酯萃取结果 第二步合成点板的结果 5 2 2 熔点测定 熔点测定为 162 3 163 4 熔程较短说明样品纯度高 5 2 3 HPLC 的纯度测定 我们对样品进行了面积归一化法的计算 得出了样品的纯度为 99 7 99 但整个峰的峰 型拖尾较严重 我们试着调整溶液的极性来改善这一现象 详见药分部分 5 3 讨论 5 3 1 文献中 第一步合成中间产物 3 萘氧基 1 2 环氧丙烷的较佳合成工艺 条件 萘酚 34g 0 24mol 环氧氯丙烷 75ml 0 96mol 的投料比 1 4 摩尔比 催化 剂三乙胺与 萘酚的投料比 0 5mL 14 4g 0 0035mol 0 1mol NaOH 20g 0 5mol 反 应温度 80 85 反应时间 6h 产品纯度 91 产率 96 8 为了保证我们产物产率 我们适当的增加了环氧氯丙烷的比例改为 1 5 反应 从点板我们 可以看出环氧氯丙烷确实在高温下易发生开环反应 在点板中出现了异于原料产物的点 从以往的实验中我们了解到低温是可以减少这种开环的发生的但是会大大降低反应速率 而开环的产物也可以通过加入 NaOH 重新环合 因而我们没有采纳低温的方法 5 3 2 实验中我们曾经将在盐酸普萘洛尔落入水中 由于样品的水溶性 使得相应水溶性 杂质也混入 随后我们采用酸溶碱沉法可用于提取碱性有机物 普萘洛尔的二乙基胺基侧 链有碱性与盐酸成盐可在水中进行溶解 加入强碱 NaOH 后重新反应为普萘洛尔并析出 此 时用乙酸乙酯萃取 收集有机相 并重复一次 抽滤掉溶剂后再次成盐 从这一次教训中 我们学到了很多实验上的失误是可以补救的 处理得当可以节约较多工时以及成本 5 3 3 合成的普萘洛尔有微红色 洗涤成盐后呈白色粉末状 实验过程中可用活性炭进行 脱色 由于本身考虑合成的量较大 在抽滤洗涤环节我们较注重样品的纯度 洗脱次数以 及要求较高 这可能是我们实验最终产率较低的重要原因之一 5 3 4 熔点测定文献上的范围为 162 164 显然我们所测的落在该范围内 且熔程只有 1 1 由此我们实验中没有再对样品进行重结晶而直接用 HPLC 进行测定而测定的结果也符 合了我们的预期 5 3 5 实验操作的 2 中温度阶梯反应后 回收异丙胺后用二甲苯凝固 考虑实验室中无 二甲苯相当难获得 而其与甲苯的性质对于该反应影响不大 参考了学长学姐意见后选用 甲苯为凝固剂 5 3 6盐酸盐易吸潮 需真空干燥 密闭保存 可考虑置入密闭盒中并放入干燥剂 六 参考文献 张英 盐酸普萘洛尔的合成工艺研究 浙江工业大学硕士学位论文 2008 年 朱宝泉等 新编药物合成手册 化学工业出版社 2003 年版 李安良 药物化学 高等教育出版社 第二版 申请分类 新药申报临床试验 注册分类 第二部分 药学研究资料 编号 8 药 品 名 称 盐酸普萘洛尔注射液 资料项目名称 处方及工艺的研究资料及文献资料 研究机构名称 加盖公章 浙江大学药学院本科教学实验中 心 研究机构地址 浙江省杭州市西湖区余杭塘路 388 号 研究机构邮编 研究机构电话 0571 研究机构主要研究者姓名 签字 姚彤炜 试验者姓名 王焕威 陈重均 朱俊峰 陈厚柳 试验起止日期 2011 3 3 2011 6 10 原始资料保存地点 浙江大学药学院实验中心 申请人机构联系人姓名 陈厚柳 申请人机构联系人电话 申请人机构联系人 E mail zju whw 申请人机构名称 公章 浙江大学药学院 目目 录录 1 处方组成与制备工艺 1 1 处方组成 1 2 制备工艺 2 工艺流程 3 处方依据 4 原辅料在处方中的作用 5 原辅料来源及质量标准 盐酸普萘洛尔注射液生产工艺的研究资料及质量标准 1 处方组成与制备工艺处方组成与制备工艺 1 1 处方组成 原辅料 用量 盐酸普萘洛尔 1g 枸橼酸 适量 调节 PH 至 3 5 左右 注射用水 加至 1000ml 共制成 5ml 盐酸普萘洛尔注射液 200 支 1 2 制备工艺 称取盐酸普萘洛尔1 0029g于烧杯 加注射用水一定量搅拌至溶解 再加注射用水至接近总 量 900ml左右 用10 的枸橼酸调节PH至3 5左右 添加注射用水至总量 加入活性炭 然后粗虑 过滤 022um滤膜过滤 灌封 用100摄氏度灭菌30分钟即得 然后对灌封好的 安瓿瓶进行检漏 然后取一定量去进行质量检查至符合药典要求 2 工艺流程 配液 主药 调PH3 5 加注射用活性炭吸 附滤过 灌封灭菌 检漏 注射剂 微孔滤膜 滤过 质量检查 3 处方依据 对于小体积溶液型注射液辅料方面主药需要增溶剂 助溶剂 PH 调节剂 防腐剂 抗 氧剂 等渗调节剂等 主药盐酸普萘洛尔能溶解于水中 且制备的盐酸普萘洛尔的注射液 浓度较小 故不需要加增加溶解度的增溶剂和助溶剂 盐酸普萘洛尔在酸性条件下稳定性 较好 故不需要增加抗氧剂 同时由于制备的注射液不用于人体故不需要进行等渗调节 与偶遇盐酸普萘洛尔在中性和碱性条件下易分解 不稳定故增加 PH 调节剂枸橼酸来调节 PH 至 3 5 左右 药典要求 3 4 4 原辅料在处方中的作用 盐酸普萘洛尔 主药 枸橼酸 PH调节剂 注射用水 溶剂 5原辅料来源及质量标准 原料由本组成员自行合成 辅料 枸橼酸 由药剂实验室提供 质量均符合药典规定 主要参考文献 1 国家药典委员会 中华人民共和国药典 2005 年版二部 申请分类 新药申报临床试验 注册分类 第二部分 药学研究资料 编号 10 药 品 名 称 盐酸普萘洛尔 资料项目名称 质量研究工作的试验资料 研究机构名称 加盖公章 浙江大学药学院本科教学实验中 心 研究机构地址 浙江省杭州市西湖区余杭塘路 388 号 研究机构邮编 研究机构电话 0571 研究机构主要研究者姓名 签字 姚彤炜 试验者姓名 王焕威 陈重均 朱俊峰 陈厚柳 试验起止日期 2011 3 3 2011 6 10 原始资料保存地点 浙江大学药学院实验中心 申请人机构联系人姓名 王焕威 申请人机构联系人电话 申请人机构联系人 E mail zju whw 申请人机构名称 公章 浙江大学药学院 质质量量研研究究工工作作的的试试验验资资料料 1 样样品品来来源源 盐酸普 萘洛尔的原料药 在浙江大学药学院药物化学实验中心合成 批号为 2 含含量量限限度度 本品含 C16H21NO2 HCl 应不少于 标示量的 99 0 3 性性状状 本品为 白色的结晶状粉末 无臭 在水或乙醇中溶解 在三氯甲烷 中微溶 4 鉴鉴别别 紫外吸收光谱法 取本品 用甲醇溶解制成每1ml 中含 20 g 的 溶液 照紫外 可见分光光度法测定 按药典规定 在 290nm 的波长处有 最大吸收 测得本品在 292nm 有最大吸收 见图10 1 5 检检查查 本品的有关物质 与分解产物 检查选用高效液相色谱法测定 5 1 仪器和色谱条件 仪器 Agilent Technologies 高效液相色谱 仪 UV 检测器 色谱条件 色谱柱 十八烷基硅烷键合硅胶Agilent 150 4 6mm 5 m 流动相 甲醇 0 02mol L 磷酸二氢钾缓冲液 50 50 流速 1ml min 柱温 20 8 检测波长 292nm 进 样量 20 l 5 2 流动相的选择 参考部分文献后 流动相可以选择 乙腈 水 硫酸 55 45 0 1 甲醇 0 02mol L 磷酸二氢钾缓冲液 50 50 经流动相比例调整试验 和多种因素综合考虑 最终决定采用甲醇 0 02mol L 磷酸二氢钾缓冲 液 50 50 为本品的有关物质检查和含量测定的流动相较为适宜 5 3 方法的专属性 取空白溶剂 即流动相 合成中间体甲萘酚和 普萘洛尔溶液各 20 l 分别注入高效液相色谱仪 记录色谱图 另取盐酸普萘洛尔样 品适量 配成 2mg ml 3mg ml 溶液 按 上述色 谱条件进行 HPLC 测定 另取盐酸普 萘洛尔样品适量采用碱破坏性实验 然后进行HPLC 测定 以上各溶液所得色谱图见图10 2 A F 5 4 有关物质的检查 5 4 15 4 1 方法 取盐酸普 萘洛尔对照品 对照品为样品经试验室重结晶所得 和样 品适量 精密称定 用流动相配成1mg ml 的溶液 20 L 注入高效液相 色谱仪 记录色谱图至主成分峰保留时间的7 倍 样品测定液如显示杂 质峰 量取各杂质峰峰面积 单个杂质峰面积不得超过对照液主峰面积 的 0 5 倍 1 0 各杂质峰面积之和 应不得大于对照液色谱图中主成分 峰面积 2 倍 1 5 5 4 25 4 2 样品测定 取盐酸普 萘洛尔对照品与样品 上述方法进行高效液相色谱测定 记 录图谱 测定结果见图10 3 A B 和表 10 1 表 10 1 有关物质的 HPLC 法检查结果 样品批号总杂质 最大杂质 0 100 03 5 5 结论 在上述色 谱条件下本品中有关物质可达到良好的分离 且专属性符 合要求 本法可用于 盐酸普 萘洛尔原料药 中有关物质检查 6 含含量量测测定定 6 1 方法的筛选 根据相关 文献查询 原料药含量测定方法研究结果采用HPLC 法测 定 6 2 色谱条件 色谱柱 十八烷基硅烷键合硅胶Agilent 150 4 6mm 5 m 流 动相 甲醇 0 02mol L 磷酸二氢钾缓冲液 50 50 流速 1ml min 柱温 20 8 检测波长 292nm 进样量 20 l 理论塔板数按盐 酸普萘洛尔峰计算 不低于 500 盐酸普 萘洛尔峰与相邻杂质峰的分离度 符合要求 6 3 重复性实验 取盐酸普 萘洛尔对照品约 10mg 置 10ml 容量瓶中 加入流动相溶解 并稀释至刻度 滤过后连续进样6 次 测定峰面积 计算RSD 为 1 89 表 10 2 盐酸普萘洛尔重复性实验 次数123456RSD 峰面 积 24492 924938 724039 924325 125167 624166 81 89 6 4 线性关系考察 取盐酸普 萘洛尔对照品适量 精密称定 用流动相稀释成 10mg ml 的对照溶液 用移液管取对照溶液 0 80 0 90 1 00 1 10 1 20ml 分别置于 10ml 容量瓶中 加流动 相至刻度 摇匀 取20 l 进行测定 记录色谱图 结果表明 盐酸普 萘洛尔在 0 8 1 2mg ml 浓度范围内面积与浓度呈现良好的线性关系 回 归方程为 y 22640 x 821 86 r 0 9996 表 10 3 盐酸普萘洛尔线性关系考察 C mg mL 0 80 911 11 2 A 标 A 内18945 521115 223576 125696 127974 9 0 80 850 90 9511 051 11 151 2 15000 17000 19000 21000 23000 25000 27000 29000 31000 浓度 浓度 mg mLmg mL 盐酸普萘洛尔标准品峰面积盐酸普萘洛尔标准品峰面积 图 10 4 盐酸盐酸普萘洛尔线性关系曲线 6 5 稳定性实验 取含量测定项下同一份溶液 分别在0 2 4 6 8h 测定 记录 峰面积 RSD 为 1 56 表 10 4 盐酸普萘洛尔稳定性试验 时间 h 02468RSD 峰面积23669 424020 724202 423676 823240 51 56 6 6 含量测定 取盐酸普 萘洛尔对照品和样品适量 精密称定 用流动相配成 1mg ml 的溶液 按外标法计算即得 结果见表1 表 10 5 样品含量测定结果 批号含量 RSD 105 21 13 参参考考文文献献 1 曾苏 药物分析学 第五版 高等教育出版社 p362 365 2 中国药典委员会 中国药典 2010 版 化学工业出版社 3 李发美 分析化学实验指导 人民卫生出版社 4 马春燕 高效液相法测定盐酸普萘洛尔含量 中国药师2005 年第 8 卷第 8 期 5 李发美 分析化学 第六版 人民卫生出版社 附 色谱图附 色谱图 图 10 1 盐酸普萘洛尔紫外光谱扫描曲线 min0510152025 mAU 0 5 0 0 5 1 1 5 2 2 5 3 3 5 VWD1 A 波 波 292 nm WHW WHW201103170004 D 1 432 1 801 2 112 3 079 5 256 min02 557 51012 51517 520 mAU 0 20 40 60 80 100 120 140 VWD1 A 波波 292 nm WHW WHW201103240022 D 1 432 1 802 1 895 2 105 2 941 4 666 5 293 12 791 A B min0246810121416 mAU 0 100 200 300 400 500 VWD1 A 波波 292 nm WHW WHW201103170007 D 1 354 1 599 1 919 2 201 4 835 10 906 min0246810121416 mAU 0 100 200 300 400 500 600 700 800 VWD1 A 波波 292 nm WHW WHW201103240037 D 1 436 1 804 2 112 3 075 3 950 4 236 4 498 10 630 C D min0246810121416 mAU 0 100 200 300 400 500 600 700 VWD1 A 波波 292 nm WHW WHW201103240039 D 1 410 2 106 2 539 3 069 3 625 4 244 4 536 10 590 min024681012141618 mAU 0 200 400 600 800 1000 VWD1 A 波波 292 nm WHW WHW201103240026 D 1 432 1 780 2 019 2 109 2 447 2 903 3 072 3 626 3 873 4 148 4 360 10 594 12 622 E F A 空白溶剂 B 合成中间体甲萘酚 C 合成中间体普萘洛尔 D 2mg ml 样品 E 3mg ml 样品 F 碱破坏 图 10 2 盐酸普萘洛尔的有关物质检查的专属性考察 min0123456 mAU 0 100 200 300 400 500 600 700 800 VWD1 A 波 波 292 nm WHW WHW201103240119 D 1 435 1 707 1 907 2 117 3 077 3 983 4 194 4 473 min012345678 mAU 0 100 200 300 400 500 600 700 VWD1 A 波 波 292 nm WHW WHW201103240120 D 1 438 1 686 1 906 2 115 3 985 4 213 4 504 A B A 对照品 B 样品 图 10 3 盐酸普萘洛尔的有关物质检查的样品测定 申请分类 新药申报临床试验 注册分类 第二部分 药学研究资料 编号 10 药 品 名 称 盐酸普萘洛尔注射液 资料项目名称 质量研究工作的试验资料 研究机构名称 加盖公章 浙江大学药学院本科教学实验中 心 研究机构地址 浙江省杭州市西湖区余杭塘路 388 号 研究机构邮编 研究机构电话 0571 研究机构主要研究者姓名 签字 姚彤炜 试验者姓名 王焕威 陈重均 朱俊峰 陈厚柳 试验起止日期 2011 3 3 2011 6 10 原始资料保存地点 浙江大学药学院实验中心 申请人机构联系人姓名 王焕威 申请人机构联系人电话 申请人机构联系人 E mail zju whw 申请人机构名称 公章 浙江大学药学院 质质量量研研究究工工作作的的试试验验资资料料 1 样样品品来来源源 制备盐酸普 萘洛尔注射液 的原料药由 浙江大学药学院药物化学实验 中心合成 注射液在浙江大学药学院药物制剂实验中心制备 批号为 2 含含量量限限度度 本品含 C16H21NO2 HCl 应为标示量的 90 0 110 0 3 性性状状 本品为 无色的澄明液体 4 鉴鉴别别 紫外吸收光谱法 取 含量测定 本品 照紫外 可见分光光度法测定 按药典规定 在 290nm 的波长处有最大吸收 测得本品在 290nm 有最大 吸收 见图 10 5 5 检检查查 5 1 pH 值 应为 3 0 4 0 结果见表 10 6 表 10 6 盐酸普萘洛尔注射液 pH 值测定 次数123 pH3 623 673 69 5 2 可见异物 在灯检下 有小白点 毛屑等异物 5 3 不溶微粒 符合要求 6 含含量量测测定定 6 1 方法的筛选 根据相关 文献查询 盐酸普 萘洛尔的 含量测定方法研究结果采用 紫外分光光度法 测定 6 2 仪器 北京普析通用 1901 紫外分光光度计 6 3 测定波长的选择 精密量取本品适量 加甲醇定量稀释制成每1ml 中约含 20 g 的 溶液 摇匀 照紫外 可见分光光度法 以水为空白 在400 200nm 波 长范围内扫描得到盐酸普 萘洛尔注射液的紫外吸收光谱图 见图10 5 盐酸普 萘洛尔注射液在 290nm 波长处有最大吸收 而辅料在此波长处 无干扰 见图 10 6 故选取用 290nm 波长为测定波长 6 4 回收率实验 精密量取 1 0mg 样品 置于 10mL 容量瓶中 加入约1 0mg 普萘洛 尔原料药混合 加水适量溶解并稀释至刻度 摇匀 精密量取1 0mL 置于 10mL 容量瓶中 加水至刻度 摇匀 照紫外分光光度法测量于 290nm 处得吸光度 按照吸光系数为207 计算 测得平均回收率为 100 35 RSD 为 1 35 见表 10 7 表 10 7 盐酸普萘洛尔注射液的回收率实验 n 9 次数 加入量 mg 测得量 mg 回收率平均回收率RSD 10 8080 809100 15 20 8080 80199 19 30 8080 79998 89 41 0100 99998 87 51 0101 014100 40 61 0101 032102 21 71 2141 240102 08 81 2141 236101 76 91 2141 20999 57 100 35 1 35 6 5 吸光系数法含量测定结果 取样品 10 支 将其内容物混匀 精密量取2 0mL 约相当于盐酸 普萘洛尔 2 0mg 置于 10mL 量瓶中 加水至刻度 从中精密量取 1 0mL 置于 10mL 量瓶中 加水至刻度 摇匀 以水为空白 测定吸光度 测得结果如下表 10 8 表 10 8 盐酸普萘洛尔注射液的含量测定结果 次数吸光度 A 相当于标示量的百分含量平均值 10 370689 5 20 371089 6 89 6 30 370889 6 7 规规格格 5mL 5mg 参参考考文文献献 1 曾苏 药物分析学 第五版 高等教育出版社 p362 365 2 中国药典委员会 中国药典 2010 版 化学工业出版社 3 李发美 分析化学实验指导 人民卫生出版社 4 马春燕 高效液相法测定盐酸普萘洛尔含量 中国药师2005 年第 8 卷第 8 期 5 李发美 分析化学 第六版 人民卫生出版社 附 光谱图附 光谱图 图 10 5 盐酸普萘洛尔注射液紫外光谱扫描曲线 图 10 6 辅料枸橼酸的紫外光谱扫描曲线 申请分类 新药申报临床试验 注册分类 第二部分 药学研究资料 编号 12 药 品 名 称 盐酸普萘洛尔 资料项目名称 检验报告书 研究机构名称 加盖公章 浙江大学药学院本科教学实验中 心 研究机构地址 浙江省杭州市西湖区余杭塘路 388 号 研究机构邮编 研究机构电话 0571 研究机构主要研究者姓名 签字 姚彤炜 试验者姓名 王焕威 陈重均 朱俊峰 陈厚柳 试验起止日期 2011 3 3 2011 6 10 原始资料保存地点 浙江大学药学院实验中心 申请人机构联系人姓名 王焕威 申请人机构联系人电话 申请人机构联系人 E mail zju whw 申请人机构名称 公章 浙江大学药学院 药品检验报告单药品检验报告单 品名盐酸普萘洛尔批号 包装塑料袋装数量1 份 送样单位浙大药学院送样日期2011 4 检验目的 是否符合中国药典 检验项目质量检查 检验依据中国药典报告日期2011 7 3 检验项目与结果 检验项目检验项目质量标准草案要求质量标准草案要求实际测定结果实际测定结果 性状白色结晶性粉末白色结晶性粉末 鉴别UV 法290nm 处有最大吸收292nm 处有最大吸收 检查HPLC 法单个杂质峰面积不得超过 对照液主峰面积的 0 5 倍 1 0 各杂质峰面积之 和应不得大于对照液色谱 图中主成分峰面积 2 倍 1 5 最大杂质峰面积为对照液主 峰面积的 0 03 总杂质峰 面积为对照液主峰面积的 0 10 含量测定HPLC 法盐酸普萘洛尔含量不得低 于 99 0 盐酸普萘洛尔含量为 105 2 检验结论 符合中国药典规定检验单位 浙江大学药学院 检验者 陈厚柳 陈重均 复核者 朱俊峰 负责人 王焕威 申请分类 新药申报临床试验 注册分类 第二部分 药学研究资料 编号 12 药 品 名 称 盐酸普萘洛尔注射液 资料项目名称 检验报告书 研究机构名称 加盖公章 浙江大学药学院本科教学实验中 心 研究机构地址 浙江省杭州市西湖区余杭塘路 388 号 研究机构邮编 研究机构电话 0571 研究机构主要研究者姓名 签字 姚彤炜 试验者姓名 王焕威 陈重均 朱俊峰 陈厚柳 试验起止日期 2011 3 3 2011 6 10 原始资料保存地点 浙江大学药学院实验中心 申请人机构联系人姓名 王焕威 申请人机构联系人电话 申请人机构联系人 E mail zju whw 申请人机构名称 公章 浙江大学药学院 药品检验报告单药品检验报告单 品名盐酸普萘洛尔注射液批号 包装塑料袋装数量200 支 送样单位浙大药学院送样日期2011 6 检验目的 是否符合中国药典 检验项目质量检查 检验依据中国药典报告日期2011 7 3 检验项目与结果 检验项目检验项目质量标准草案要求质量标准草案要求实际测定结果实际测定结果 性状无色的澄明液体无色的澄明液体 鉴别UV 法在 290nm 处有最大吸收在 290nm 处有最大吸收 检查pH 值3 0 4 03 66 可见异物无可见异物有可见异物 含量测定UV 法盐酸普萘洛尔注射液含量 应为标示量的 90 0 110 0 盐酸普萘洛尔注射液含量 为 89 6 检验结论 不符合中国药典规定检验单位 浙江大学药学院 检验者 陈厚柳 陈重均 复核者 朱俊峰 负责人 王焕威 申请分类 新药申报临床试验 注册分类 第二部分 药理毒理研究资料 编号 17 药 品 名 称 盐酸普萘洛尔 资料项目名称 主要药效学试验资料及文献资料 研究机构名称 加盖公章 浙江大学药学院本科教学实验中 心 研究机构地址 浙江省杭州市西湖区余杭塘路 388 号 研究机构邮编 研究机构电话 0571 研究机构主要研究者姓名 签字 姚彤炜 试验者姓名 王焕威 陈重均 朱俊峰 陈厚柳 试验起止日期 2011 3 3 2011 6 10 原始资料保存地点 浙江大学药学院实验中心 申请人机构联系人姓名 朱俊峰 申请人机构联系人电话 申请人机构联系人 E mail zju whw 申请人机构名称 公章 浙江大学药学院 盐酸普萘洛尔对氯仿诱发小鼠心律失常模型的拮抗作用研究盐酸普萘洛尔对氯仿诱发小鼠心律失常模型的拮抗作用研究 目的目的 构建氯仿诱发小鼠心律失常的模型 观测小鼠心电图变化 统计其室颤发生率 研究 盐酸普萘洛尔对小鼠心率失常的影响 材料材料 药品和试剂 生理盐水 氯仿 自制盐酸普萘洛尔注射液 0 05 0 2 标准盐酸 普萘洛尔 0 1 来源 批号 仪器和设备 500ml 烧杯 手术器械 心电图机 天平 棉球 实验动物 小鼠 40 只 雌雄等量 23 30g 来源 动物生产许可证号 方法方法 1 将小鼠随机分为甲 乙 丙 丁 戊 5 组 分别为阴性对照组 阳性对照组 实验 高剂量组 实验中剂量组 实验低剂量组 每组 10 只 标记称重 2 阴性对照组 腹腔注射生理盐水 0 1ml 10g 阳性对照组 腹腔注射 0 1 标准盐酸普萘洛尔 0 1ml 10g 实验高剂量组 腹腔注射 0 2 盐酸普萘洛尔 0 1ml 10g 实验低剂量组 腹腔注射 0 05 盐酸普萘洛尔 0 1ml 10g 3 给药 20min 后 逐一将小鼠放入含 3 4ml 氯仿棉球的倒置烧杯内 至出现呼吸停止 时立即取出 记录心电图 也可剖开胸腔 肉眼观察室颤发生率 对实验数据进行统计学 分析 4 实验记录仪器采用生物机能实验系统进行实时采集与显示 仪器参数选择时间常数 为 0 02s 滤波 30Hz 扫描速度 80ms div 增益为 0 5mv div 信号输入连接方法是用 针形电极插人小鼠 或大鼠 右上肢及双侧下肢 连续地实时记录观察心电图 结果结果 记录小鼠心电图 观察其室颤发生状况 将小鼠心电情况分为以下三等并打分 基本正常 指小鼠未发生室颤 心率正常 记为 0 分 心电图如下 图 1 正常小鼠心电图 部分心率失常 指小鼠发生心室纤颤 但保持正常心脏节律 记为 1 分 心电图 如下 图 2 小鼠轻度室颤心电图 室颤 指小鼠发生重度室颤 无心脏节律 记为 2 分 心电图如下 图 3 小鼠室颤心电图 也就是说 室颤越明显 心率失常越严重 所得分数越高 统计各组小鼠所得分数 结 果如下 表 1 小鼠心率失常得分结果 编号阴性对照组阳性对照组高剂量组低剂量组 11202 22111 32111 42221 52000 62111 72120 82110 91220 102121 平均 1 81 21 20 7 t 检验 阳性对照组与阴性对照组比较 P 0 022 0 05 高剂量组与阴性对照组比较 P 0 048 0 05 低剂量组与阴性对照组比较 P 0 00 小于 0 05 说明 阳性对照组 高剂 量组 低剂量组与阴性对照组结果有显著差异 t 检验 阳性对照组与高剂量组比较 P 1 0 05 阳性对照组与低剂量组比较 P 0 105 0 05 高剂量组与低剂量组比较 P 0 145 0 05 说明 阳性对照组 高剂量组 低剂量组之间结果无显著差异 讨论讨论 1 开胸腔观察室颤 对小鼠影响比较大 所得结果不准确 所以通过心电图判断室颤 的发生 实验中关键的一点是判断小鼠呼吸停止 需要谨慎小心 小鼠晕厥后 观察到其 胸腹腔起伏不明显至停止 即取出小鼠 记录心电图 2 为了区分盐酸普萘洛尔的作用效果 本实验没有采用单纯的记录小鼠是否发生室颤 来评价药物的作用效果 一些现象如心室纤颤 心律失常无室颤那么强烈 说明药物也发 生了一定的作用 因此评分可以体现药物的轻度作用 打分越高 说明小鼠室颤越明显 心率失常越严重 3 t 检验结果显示 阳性对照组 高剂量组 低剂量组与阴性对照组结果有显著差异 说明各剂量的盐酸普萘洛尔均发挥了抗心律失常作用 阳性对照组 高剂量组 低剂量组 之间结果无显著差异 说明各剂量的盐酸普萘洛尔发挥抗心律失常作用的差别不大 可以 调节剂量差以区分最佳剂量的范围 推测低剂量的盐酸普萘洛尔抗心律失常作用更好 结论结论 阳性对照组 高剂量组 低剂量组的盐酸普萘洛尔均具有抗心律失常作用 但各剂量 组之间抗心律失常作用差别不明显 参考文献参考文献 盐酸普萘洛尔对乌头碱诱发大鼠心律失常模型的保护作用研究盐酸普萘洛尔对乌头碱诱发大鼠心律失常模型的保护作用研究 目的目的 构建乌头碱诱发大鼠心律失常模型 观测给药后大鼠心电图变化 统计诱发大鼠心率 失常所需时间 研究盐酸普萘洛尔对大鼠心率失常的影响 材料材料 药品和试剂 20 乌拉坦溶液 盐酸普萘洛尔注射液 0 05 0 2 标准盐酸普萘 洛尔 0 1 6ug ml 乌头碱溶液 生理盐水 来源 仪器和设备 心电图机 心电图示波器 大鼠固定台 手术刀 止血钳 眼科镊 头 皮静脉注射针头 注射器 天平 实验动物 大鼠 20 只 雌雄等量 体重 175 200g 来源 方法方法 1 将大鼠随机分为甲 乙 丙 丁 4 组 分别为阴性对照组 阳性对照组 实验高剂 量组 实验低剂量组 每组 5 只 标记称重 2 各鼠均用乌拉坦 1 2g kg 20 溶液 0 6ml 100g 腹腔注射麻醉 背位固定 在四肢皮 下插入心电图机的针形电极 作描记心电图的准备 3 实验记录仪器采用生物机能实验系统进行实时采集与显示 仪器参数选择时间常数 为 0 02s 滤波 30Hz 扫描速度 80ms div 增益为 0 5mv div 信号输入连接方法是用 针形电极插人小鼠 或大鼠 右上肢及双侧下肢 连续地实时记录观察心电图 4 各鼠均于一侧腹股沟部剪毛 沿股静脉走向剪开皮肤约 1 5cm 暴露股静脉 插入 与注射器相连的头皮静脉注射针头 以备注射药物 5 阴性对照组 股静脉注射生理盐水 0 1ml 100g 阳性对照组 股静脉注射 0 1 标准盐酸普萘洛尔 0 1ml 100g 实验高剂量组 股静脉注射 0 2 盐酸普萘洛尔 0 1ml 100g 实验低剂量组 股静脉注射 0 05 盐酸普萘洛尔 0 1ml 100g 6 各鼠均于给药后 10min 静注乌头碱 30ug kg 6ug ml 溶液 0 5ml 100g 1min 注完 各鼠均于注完乌头碱后开始计算时间 用心电图示波器监视心电图的变化 必要时描记心 电图 密切注意异常心率 包括室性早搏 室性心动过速 室颤等 的出现时间 比较 4 组大鼠诱发心律失常所需的时间 从注完乌头碱至出现心律失常所经时间 的长短 对照 鼠的诱发心律失常所需时间一般为 2 3min 结果结果 实验过程中由于手术难度很大 本批大鼠对于实验室提供的乌头碱不敏感 因此成功 的个例很少 结