SOD的初步论文

专业基础综合实验专业基础综合实验 题 目 胡萝卜中 SOD 的提取及活力测定 学 院 化 学 化 工 学 院 专业 生物工程 班级 1101 学号 201106030132 学生姓名 程晶晶 指导教师 张 何 完成日期 2014 年 1 月 2 日 专业基础综合实验任务书 院部 化学化工 专业 生物工程 班级 1101 姓名 程晶晶 1 专业基础综合实验题目 胡萝卜中 SOD 的提取及活力测定 2 专业基础综合实验内容及实验要求 本实验建立了邻苯三酚自氧化对胡萝卜中 SOD 测活方法的改进条件 并对不 同方法提取的胡萝卜 SOD 样液进行测活 结果表明 胡萝卜中含有丰富的 SOD 但是加工过程中温度对 SOD 活力影响很大 为胡萝卜的加工方法的选择提 供参考 对于果蔬中的超氧化物歧化酶有数种的提纯技术和活力测定方法 在工艺研 究或实际生产中 需要结合实际需求 制定合理的提纯方案 选择合适的测活 方法 3 实验时间安排 2013 年 12 月 16 日至 1014 年 1 月 2 日 第 16 周 根据实验要求设计实验 并准备相应的实验预备工作 根据方案进 行实验 第 17 18 周 根据方案进一步完善实验内容 并根据实验结果进行分析 书 写实验报告 四 主要参考文献 1 陶静 赵华 于会永 玉米超氧化物歧化酶的研究进展 J 粮食与饲料工 业 2005 4 26 27 2 孙永君 大蒜中 SOD 的提取研究 J 化学与生物工程 2005 10 23 25 3 邹国林 一种 SOD 测定方法 邻苯三酚自氧化法的改进 J 生物化学与生 物物理进展 1986 4 71 指导教师 张何 教研室主任 谢涛 教学院长 陈建芳 2014 年 1 月 2 日 目 录 1 前言 1 1 1 SOD 的发现 1 1 2 SOD 的产业联盟 1 1 3 SOD 的研究现状 2 1 4 果蔬中的 SOD 2 1 5 邻苯三酚自氧化法 3 1 6 课题概述 4 2 试验部分 4 2 1 试验药品 4 2 2 试验仪器 5 2 3 试验原理与方法 5 2 3 1 SOD 的检测方法 5 2 3 2 邻苯三酚自氧法测定 SOD 的活力 6 2 4 试验步骤 6 2 4 1 胡萝卜中 SOD 的提取 6 2 4 2 胡萝卜中 SOD 的活力测定 7 3 实验结果与分析讨论 7 3 1 SOD 的提取分析 7 3 2 SOD 活力测定的分析 8 3 2 1 不同的提取方案对 SOD 提取的影响 8 3 2 2 胡萝卜中 SOD 测定结果 8 4 结论 9 参考文献 10 生物 级专业基础综合实验 1 1 前言前言 1 1 SOD 的发现的发现 神秘的生命原动力 SOD 1938 年 英国 Mann 等人首次从小牛血液中分离出一种含铜的蓝绿色蛋白质 1953 年又有科学家从马胆中分离出相似的蛋白质 但当时他们并没有发现这种 蛋白质的生理活性 直到 1968 年 美国人 Mccord 在 Fridovich 指导下 从牛 的红细胞中提取出一种定名为超氧化物歧化酶的活性物质 SOD SOD 是生物体内最重要的抗氧化酶 它具有特殊的生理活性 能够分出一个电 子给自由基 使自由基变成无害物质 所以它是生物体内最重要的自由基清除 剂 是人类对抗自由基的第一道防线 事实证明 SOD 的缺少和活性降低是人类 生老病死的根本原因 补充 SOD 可以达到预防和治疗各种疾病 延缓衰老 防 癌的目的 1 2 SODSOD 产业联盟产业联盟 全国 SOD 产业联盟 原名全国 SOD 应用开发产业化联盟 后曾一度更名为 中国 SOD 生产应用联盟 始创于 2009 年 10 月 是由部分有志于发展壮大我国 SOD 应用开发产业化事业的单位发起 自愿结合组成的民间社团 经有关部门 批准 目前正式挂靠中国药学会生化与生物技术药物专业委员会 中国保健协 会保健食品工作委员会和中国食品工业协会营养指导工作委员会 长期以来 由于 SOD 研究还不够深入 各生产单位生产规模偏小 彼此互 不沟通 各自为政 没有统一的质量标准和检测方法 限于分散微薄的实力 既影响了 SOD 生产技术 产品质量的提高 也阻碍了 SOD 产品宣传力度和销售 市场的开拓 为了彻底改变我国 SOD 应用开发产业化事业停滞不前的现状 谋 求各自企业的生存发展 联合起来日益成为许多 SOD 及其相关产品生产企业的 共同愿望 2009 年 9 月 由中国药学会生化与生物技术药物专业委员会主办的第六 届全国 SOD 学术研讨会在江苏省苏州市召开 许多 SOD 及其相关产品生产企业 应邀出席会议 在会上不少企业表达了联合起来共谋发展的热切期盼 仅仅时 隔一月 2009 年 10 月 由中国药学会生化与生物技术专业委员会主办的 SOD 开发战略研讨会紧接着在首都北京市举行 全国 SOD 应用开发产业化联盟应运 而生 正式创建 联盟的宗旨是 组织集中各方力量 充分发挥各自优势 环绕 SOD 及其 相关产品的研究开发 生产制造 市场营销等方面 为成员单位服务 在自愿 的基础上 为它们牵线搭桥 采取灵活多样的方式 发展双边 多边互利共赢 的协作 达到共同发展的目的 从而推动我国 SOD 及其相关产品 产业做大做 强 产品走遍全国 迈向世界 为促进科学发展 构建和谐社会 保障人类健 康作出应有的贡献 生物 级专业基础综合实验 2 1 3 SOD 的研究现状的研究现状 目前国内外已对 SOD 的机理 纯化 应用作了大量的研究 但注意力大都 集中在以动物血液为来源制取 SOD 方面上 对植物 SOD 的提取虽也有不少研究 但仅停留在初步验证阶段 国外 SOD 主要应用于医疗 保健方面 有以动物血 液及内脏为原料制取 SOD 的报导 但存在着成本高 含有致热因子等缺陷 因 此 适用范围极为有限 尤其是近年来受 疯牛病 的影响 许多国家和地区 抵制以动物血液及内脏为原料制取的超氧化物歧化酶 使得超氧化物歧化酶在 国际市场上极为紧缺 因此开发植物资源提取 SOD 以安全性极高且来源丰富 价格低廉的植物 原料制取超氧化物歧化酶 创意新颖 其产品必将以其安全性 优异的品质及 低成本等特点在国内 国际市场上成为走俏商品 因此可以预测市场应用前景 广阔 1 4 果蔬中的果蔬中的 SOD 超氧化物歧化酶 Orgotein Superoxide Dismutase SOD 别名肝蛋白 奥谷蛋白 简称 SOD SOD 是一种源于生命体的活性物质 能消除生物体在新 陈代谢过程中产生的有害物质 对人体不断地补充 SOD 具有抗衰老的特殊效果 超氧化物歧化酶 Superoxide Dismutase EC1 15 1 1 SOD 是 1938 年 Marn 等人首次从牛红血球中分离得到超氧化物歧化酶开始算起 人们对 SOD 的研究 己有七十多年的历史 1969 年 McCord 等重新发现这种蛋白 并且发现了它们 的生物活性 弄清了它催化过氧阴离子发生歧化反应的性质 所以正式将其命 名为超氧化物歧化酶 超氧物歧化酶 Superoxide Dismutase 简称 SOD 是一种新型酶制剂 它 在生物界的分布极广 几乎从动物到植物 甚至从人到单细胞生物 都有它的 存在 SOD 被视为生命科技中最具神奇魔力的酶 人体内的垃圾清道夫 超氧化 物歧化酶 SOD 为自由基清除剂 它广泛存在于生物体的各种组织中 能清除自由基 O2 超氧阴离子自由基 而 O2 具有细胞毒性 可使脂质过氧化 损伤细胞膜 引起炎症 肿瘤和自身免疫性疾病 并可能促使机体衰老 超氧化物歧化酶 SOD 正常值 酶速率 法 37 血清 242 620U L 红细胞 5375 7975 g g Hb 邻苯三酚法健康搜索 心肌 300 3 406 3U g 红细胞健康搜索 1567 2241U g 联大茴香胺法 心肌 1745 2231U g 红细胞 2906 4654U g 超氧化物歧化酶 SOD 临床意义超氧化物歧化 酶 SOD 为自由基清除剂 它广泛存在于生物体的各种组织中 能清除自由基 O2 超氧 阴离子自由基 而 O2 具有细胞毒性 可使脂质过氧化 损伤细胞膜 引起炎症 肿瘤和 自身免疫性疾病 并可能促使机体衰老 SOD 类型 超氧化物歧化酶按其所含金属辅基不同可分为三种 第一种是 含铜 Cu 锌 Zn 金属辅基的称 Cu Zn SOD 最为常见的一种酶 呈绿色 主要存在于机体细胞浆中 第二种是是含锰 Mn 金属辅基的称 Mn SOD 呈紫色 存在于真核细胞的线粒体和原核细胞内 第三种是含铁 Fe 金属辅 基的称 Fe SOD 呈黄褐色 存在于原核细胞中 生物 级专业基础综合实验 3 超氧物歧化酶 Superoxide Dismutase 简称 SOD 是一种新型酶制剂 它在生 物界的分布极广 几乎从人到细胞 从动物到植物 都有它的存在 原多从牛血中 提取 1997 年欧盟禁止使用动物中提取的 SOD SOD 是超氧化物歧化酶 superoxidedismutase 的英文缩写 是一种含有金属元素的活性蛋白酶 是目前 生物学 医学和生命科学领域中世界级的高 尖 精课题 超氧化物歧化酶 SOD 目前世界范围内的开发 大都从动物血里提取 不但代价昂贵 而且动 物性 SOD 的排他性 不易常温保存 艾滋病等血液病毒的交叉感染及其它潜在 危险 所以国际卫生组织呼吁 立刻停止动物性 SOD 的使用 我国传统工业多 从动物的血液和内脏器官中提取 SOD 但这类原料来源有限 成分复杂 在储 存 运输方面存在诸多不便 因此导致生产工艺复杂化 使生产成本大幅度上 升 相比而言 人们日常食用的蔬果中含有丰富的 SOD 资源丰富 易于处理 生产工艺得到简化 故成本低廉 且使用安全性高 所以 寻找富含高活力 SOD 的果蔬并从中提纯 SOD 开发抗癌产品具有深远意义 1 5 邻苯三酚自氧化法邻苯三酚自氧化法 SOD 的活力测定方法很多 常见的有化学法 免疫法和等电点聚焦法 其 中化学法应用最普遍 化学法的原理主要是利用有些化合物在自氧化过程中会 产生有色中间物和 O2 利用 SOD 分解而间接推算酶活力 在化学方法中 最 常用的有黄嘌呤氧化酶法 邻苯三酚法 化学发光法 肾上腺素法 NBT 还原 法 光化学扩增法 Cyte 还原法等 其中改良的邻苯三酚自氧化法简单易行较 为实用 化学发光法和光化学扩增法不适用于测定 Mn SOD 但对于 Cu Zn SOD 反应极灵敏 Cyte 还原法用于 Mn SOD 活力测定结果稳定 重复性好 但专一 性和灵敏度不够理想 而且需要特殊仪器 实际应用受到限制 在一般情况下 SOD 酶活性测定只能应用间接活性测定法 本实验采用邻 苯三酚自氧化方法 邻苯三酚在碱性条件下 能迅速自氧化 释放出 O2 生 成带色的中间产物 反应开始后反应液先变成黄棕色 几分钟后转绿 几小时 后又转变成黄色 这是因为生成的中间物不断氧化的结果 这里测定的是邻苯 三酚自氧化过程中的初始阶段 中间物的积累在滞留 30 45s 后 与时间成线 性关系 一般线性时间维持在 4min 的范围内 中间物在 420nm 波长出有强烈光 吸收 当有 SOD 存在时 由于它能催化 O2 与 H 结合生成 O2 和 H2O2 从而阻 止了中间产物的积累 因此 通过计算即可求出 SOD 的酶活性 酶活力单位定义 在 25 恒温条件下 每毫升反应液中 每分钟抑制邻苯 酚自氧化率达 50 的酶量定义为 1 个酶活力单位 生物 级专业基础综合实验 4 1 6 课题概述课题概述 SOD 被视为生命科技中最具神奇魔力的酶 人体内的垃圾清道夫 SOD 是氧 自由基的自然天敌 是机体内氧自由基的头号杀手 是生命健康之本 超氧化物歧化酶 SOD 目前世界范围内的开发 大都从动物血里提取 不 但代价昂贵 而且动物性 SOD 的排他性 不易常温保存 艾滋病等血液病毒的 交叉感染及其它潜在危险 所以国际卫生组织呼吁 立刻停止动物性 SOD 的使 用 通过查阅资料了解到 SOD 属于金属蛋白酶 按照结合金属离子种类不同 该酶有以下三种 含铜与锌超氧化物歧化酶 Cu ZnSOD 含锰超氧化物歧化 酶 Mn SOD 和含铁超氧化物歧化酶 Fe SOD 三种 SOD 都催化超氧化物阴离 子自由基 将之歧化为过氧化氢与氧气 它广泛存在于自然界的动物 植物以 及一些微生物中 许多资料表明 SOD 对人体有着广泛的保护作用 本实验建 立了邻苯三酚自氧化对胡萝卜中 SOD 测活方法的改进条件 并对不同方法提取 的胡萝卜 SOD 样液进行测活 为工艺研究或实际生产中 在结合实际需求前提 条件下 为制定合理的提纯方案 提供了合适的测定方法 2 试验部分试验部分 2 1 试验药品试验药品 药品名称纯度生产厂家 Hcl分析纯广东汕头市光华化学厂 Tris分析纯广东汕头市光华化学厂 EDTA 2Na分析纯广东汕头市光华化学厂 邻苯三酚分析纯广东汕头市光华化学厂 磷酸氢二钠分析纯广东汕头市光华化学厂 磷酸二氢钠分析纯天津市光复科技发展有限公司 胡萝卜市场购买 生物 级专业基础综合实验 5 2 2 试验仪器试验仪器 名称厂商 高速离心机 赛特湘仪 高速组织捣碎机 新加坡 Applied Biosystems 公司 紫外 可见分光光度计 天能科技 上海 有限公司 DK 8D型电热恒温水槽 巩义市予华仪器有限责任公司 FA1104A电子天平 上海精天电子仪器有限公司 SL磁力辅助加样枪 美国 RAININ 2 3 试验原理与方法试验原理与方法 2 3 1 SOD 的检测方法的检测方法 常用的几种 SOD 检测方法 1 分光光度法 分光光度法是最为典型的检测 SOD 的方法 这种方法使用 了细胞色素 C cytochrome C 或者氮蓝四唑 NBT 图 1 用 cytochrome C 的还原法来检测 O2 是因为还原后的 cytochrome C 会生成紫色的染料 图解 2 这是自 SOD 被发现以来最常用的方法 Cyt Fe O2 Cyt Fe O2 因为 cytochrome C 很容易被 NADPH 还原酶或者其他的还原剂所还原 因 此必须要考虑样品的污染因素 而且 这种方法需要每隔 1 5 分钟就要察看一 下 因此不适合做大批量的实验 NBT 法的原理是生成不溶于水的蓝色甲臢染 料 lmax 560 nm 去和 O2 反应 这种染料不溶于水 在做长时程分析时会生 成不均一的沉淀物 从而影响实验数据的重现性 为了得到水溶性的甲臢染料 许多改良后的方法如添加 BSA 被人们所采用 但是 添加了不必要的蛋白质会 使数据分析变得十分复杂 而且 NBT 会被多种还原剂所还原 NBT 的这种特性 被用于酮胺的检测 酮胺可以作为糖尿病的标记物并且是 Maillard 反应的中间 体 NBT 法的最大缺点是即使加入过量的 SOD 也不能获得 100 的抑制率 原因 是 NBT 会与黄嘌呤氧化酶直接反应 2 化学发光法 用于 O2 检测的化学发光探针同样也能用于 SOD 的检测 这种探针分为 2 种 一种是光泽精 另一种是荧光素衍生物 MCLA 这种化学 发光反应对 pH 有高度的依赖性 例如 光泽精只有在 pH 9 0 或者更高处会发 出强烈的化学光 因此 在生理的 pH 条件下用这种方法检测 SOD 是不可行的 另一方面 MCLA 在生理条件下能够发出较强的化学荧光 因此可以用于人脑的 Cu Zn SOD 活性的检测 但是 MCLA 不适合用作 SOD 检测的探针 因为它不单 单和 O2 反应 还会和单质氧反应 而且 MCLA 与溶解氧反应后会发出化学光 转移的金属离子还会加速氧化反应 3 电子自旋共振 ESR 光谱法 在室温下 溶液中 O2 的 ESR 信号不能直 接被检测出 但能够通过自旋捕捉法间接获得 最常见的诱捕剂是 5 5 dimethyl 1 pyrroline N oxide DMPO 由于 O2 诱捕 DMPO 会产生一个特 生物 级专业基础综合实验 6 殊的光谱图 因此 ESR 法是 O2 检测的方法中特异性最好的一种 然而 DMPO 与 O2 间的二阶速度常数比 O2 自发反应常数相对要低 因此需要向溶液中加入 大量的 DMPO 如 终浓度为 0 45M 这样 每次试验所要用的 DMPO 将花去大 笔的经费 这种方法的另一个问题是在实验中需要一套较为昂贵的 ESR 设备 4 利用水溶性四唑盐检测 SOD 的新方法 为了克服上述的诸多问题 我们 在做 SOD 检测时需要考虑如下几个方面 实验设备要简单 经济 pH 灵敏度要 低 对 O2 有高度的特异性 如果用分光光度计作为一种简单的实验设备的话 就需要一种与 cytochrome C 和 NBT 相似的比色探针 检测中最重要的一点是在 没有其他物质干扰的情况下 测定出 SOD100 的抑制率 为了得到一种新的检 测 SOD 的方法 我们对还原后能生成水溶性甲臢的四唑盐作了一系列的实验 2 3 2 邻苯三酚自氧法测定邻苯三酚自氧法测定 SOD 的活力的活力 SOD 的活力测定方法很多 常见的有化学法 免疫法和等电点聚焦法 其 中化学法应用最普遍 化学法的原理主要是利用有些化合物在自氧化过程中会 产生有色中间物和 O2 利用 SOD 分解而间接推算酶活力 在化学方法中 最 常用的有黄嘌呤氧化酶法 邻苯三酚法 化学发光法 肾上腺素法 NBT 还原 法 光化学扩增法 Cyte 还原法等 其中改良的邻苯三酚自氧化法简单易行较 为实用 化学发光法和光化学扩增法不适用于测定 Mn SOD 但对于 Cu Zn SOD 反应极灵敏 Cyte 还原法用于 Mn SOD 活力测定结果稳定 重复性好 但专一 性和灵敏度不够理想 而且需要特殊仪器 实际应用受到限制 改良的邻苯三酚自氧化法简单易行较为实用 1 在一般情况下 SOD 酶活性测定只能应用间接活性测定法 本实验采用 邻苯三酚自氧化方法 邻苯三酚在碱性条件下 能迅速自氧化 释放出 O2 生成带色的中间产物 反应开始后反应液先变成黄棕色 几分钟后转绿 几 小时后又转变成黄色 这是因为生成的中间物不断氧化的结果 这里测定的是 邻苯三酚自氧化过程中的初始阶段 中间物的积累在滞留 30 45s 后 与时间 成线性关系 一般线性时间维持在 4min 的范围内 中间物在 420nm 波长出有强 烈光吸收 当有 SOD 存在时 由于它能催化 O2 与 H 结合生成 O2 和 H2O2 从 而阻止了中间产物的积累 因此 通过计算即可求出 SOD 的酶活性 2 酶活力单位定义 在 25 恒温条件下 每毫升反应液中 每分钟抑制邻 苯酚自氧化率达 50 的酶量定义为 1 个酶活力单位 2 4 试验步骤试验步骤 2 4 1 胡萝卜中胡萝卜中 SOD 的提取的提取 方法 A 100g 胡萝卜加少量水在组织捣碎机中高速破碎成匀浆 过滤 滤渣 加适量水提取约 3 小时再过滤 重复前面操作一次 合并三次过滤液 即为 SOD 粗酶液 置 4 冰箱尽早测定 生物 级专业基础综合实验 7 方法 B 100g 胡萝卜按 1g 2 3ml 的比例加 50mmol L 的磷酸缓冲液 在组 织捣碎机中高速破碎成匀浆 用离心机 15000r min 离心 15min 上清液即为 SOD 粗酶液 置 4 冰箱及时测定 2 4 2 胡萝卜中胡萝卜中 SOD 的活力测定的活力测定 1 邻苯三酚自氧化速率的测定 取两支试管按下表加入 25 预热过的缓冲液 然后加入预热过的邻苯三酚 空 白管用 10mmol L HCl 代替邻苯三酚 迅速摇匀 立即倾入 1cm 比色杯中 在 325nm 波长处测定光吸收值 每隔 30s 读数一次 测定 4min 内每分钟光吸收值 的变化 要求自氧化速率控制在每分钟的光吸收值为 0 07 可增减邻苯三酚的 加入量 以控制光吸收值 试剂 空白管 mL 自氧化管 mL pH8 2 50mmol L Tris HCl 2 98 2 98 10mmol L HCl 0 02 0 01 50 mmol L 邻苯三酚 0 01 2 SOD 样液的活性测定 样品管取代自氧化管 样品管测定时先加入预热 的待测酶液 再加邻苯三酚 其余步骤同邻苯三酚自氧化速率的测定 试剂 空白管 mL 样品管 mL pH8 2 50mmol L Tris HCl 2 98 2 98 10mmol L HCl 0 02 SOD 样液 0 01 50 mmol L 邻苯三酚 0 01 3 实验结果与分析讨论实验结果与分析讨论 3 1 SOD 的提取分析的提取分析 表表 1 试剂用量试剂用量 试管号试剂 空白对照 0 1 2 3 4 5 6 0 1mol LTris Hcl 2ml 双蒸水2ml SOD 终浓度00 000 250 500 751 001 251 50 20mmol L PR020ul 系统 PR 浓度00 10mm ol L 系统 PH 8 2 0 01 生物 级专业基础综合实验 8 表表 2 PR 的自氧化速率的自氧化速率 PR 自氧化时间 min 12 3 4 5 6 OD 自氧化速率 A min 0 1330 2250 314 0 078 0 3920 4620 525 3 2 SOD 活力测定的分析活力测定的分析 3 2 1 不同的提取方案对不同的提取方案对 SOD 提取的影响提取的影响 表表 3 SOD 终浓度对终浓度对 PR 自氧化抑制率之间的关系自氧化抑制率之间的关系 SOD 终浓 度 0 000 250 500 751 001 251 50 OD 抑制率 0 392 0 340 13 26 0 297 24 23 0 255 35 00 0 205 47 70 0 168 57 14 0 145 65 87 标准方程 Y 0 0226X 0 0349 R 0 9984 3 2 2胡萝卜中胡萝卜中 SOD 测定结果测定结果 表表 4 胡萝卜胡萝卜 SOD 测定结果测定结果 样品胡萝卜 A胡萝卜 B SOD 酶液总量 ml SOD 酶液测定取样量 ul 本底吸收值 OD 反应液吸光度 OD 抑制率 平均值 反应液 SOD 浓度 U ml 胡萝卜 SOD 测定值 U g Fw 300 50 0 183 0 464 28 24 0 59 140 2550 30 0 088 0 319 41 15 0 90 3051 注 表中 胡萝卜 A 指胡萝卜经 方法 A 提取 SOD 其他类推 生物 级专业基础综合实验 9 4 结论结论 1 胡萝卜含有丰富的 SOD 不同的 SOD 提取方法对其活性影响很大 测定值相差几十倍 实验表明 胡萝卜在加工过程中温度对 SOD 活力影响很大 常温下较长时间的处理破坏了 SOD 的活性 如方法 A 而低温则能很好的保 护其 SOD 的活性 如方法 C 2 在高等植物中 植物体内源 SOD 类型主要为 Cu Zn SOD 和 Mn SOD 有资料报道 Mn SOD 对温度比较敏感 而 Cu SOD 则对温度比较稳 定 据此 我们初步分析胡萝卜 SOD 类型很可能主要为 Mn SOD 根据本实 验对胡萝卜不同贮藏条件 SOD 活性的测定结果 我们建议在胡萝卜加工利用时 为了保护 SOD 的活性 原料应该在低温条件下贮藏 加工过程也应该尽量在低 温下进行 生物 级专业基础综合实验 10 参考文献参考文献 1 王钢 自由基与中医中药 M 南京 南京大学出版社 1993 42 492 2 江苏省植物研究所 新华本草纲目 第三册 M 上海 上海科学技术出版社 1990 121 3 袁勤生 超氧化物歧化酶的研究进展 J 中国医学杂志 1989 24 7 387 391 4 宋金耀 超氧化物歧化酶 邻苯三酚自氧化测活方法的改进 J 河北农业技术师 范学院学报 1992 6 2 30 35 5 邹国林 桂兴芬 钟晓凌 一种SOD的测定方法 邻苯三酚自氧化法的改进 J 生物化学与生物物理进展 1986 4 71 73 6 陶静 赵华 于会永 玉米超氧化物歧化酶的研究进展 J 粮食与饲料 工业 2005 4 26 27 7 孙永君 大蒜中SOD的提取研究 J 化学与生物工程 2005 10 23 25 8 国占生 超氧化物歧化酶样活性测定方法 J 衡水师专学报 2001 2 20 21 9 谢秋玲 郭勇 超氧化物歧化酶活力测定方法及其进展 J 广东药学 1997年04期 10 王岁楼 张平之 张欣 章银良 酵母SOD形成的生理学研究 J 工业微生 物 1997年03期 11 杨东升 超氧化物歧化酶的研究与应用 J 化学与生物工程 2004年03 期 12 陈惠鹏 罗贵民 李惟 程玉华 棕色固氮菌含铁超氧化物歧化酶重组研 究 J 中国生物化学与分子生物学报 1989年05期 13 阎家麒 谢文正 月桂酸修饰超氧化物歧化酶的制备及其性质研究 J 生物化学与生物物理进展 1994年02期 生物 级专业基础综合实验 11 14