蛋白质的等电点测定及性质实验

蛋白质的等电点测定及性质实验蛋白质的等电点测定及性质实验 一 实验目的一 实验目的 初步学会测定蛋白质等电点的基本方法 并了解蛋白质的性质 二 实验原理二 实验原理 蛋白质分子是两性电解质 当调节溶液的酸碱度 使蛋白质分子上所带的 正负电荷相等时 在电场中 该蛋白质分子既不向正极移动 也不向负极移动 这时溶液的 pH 值 就是该蛋白质的等电点 pI 不同蛋白质 等电点不同 在等电点时 蛋白质溶解度最小 容易沉淀析出 因此 可以借助在不同 pH 溶 液中的某蛋白质的溶解度来测定该蛋白质的等电点 在蛋白质溶液中加入一定浓度的中性盐 蛋白质即从溶液中沉淀析出 这 种作用称为盐析 盐析法常用的盐类有硫酸铵 硫酸钠等 蛋白质的盐析作用 是可逆过程 由盐析获得的蛋白质沉淀 当降低其盐类浓度时 又能再溶解 而重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物 三 试剂和器材三 试剂和器材 高筋面粉 低筋面粉 1mol L 醋酸 每组自配 每组自配 0 1mol L0 1mol L 醋酸 醋酸 0 01mol L0 01mol L 醋酸 醋酸 0 5 酪蛋白溶液 称取 2 5 克酪蛋白 放入烧杯中 加入 40 的蒸馏水 再加入 50 毫升 1N 氢氧化钠溶液 微热搅拌直到蛋白质完全溶解为止 将溶解好的蛋白溶液转到 500 毫升容量瓶中 并用少量蒸馏水洗净烧杯 一并倒入容量瓶 在容量瓶中 再加入 1N 醋酸溶液 50 毫升 摇匀 再加蒸馏水定容至 500 毫升 得到略显混 浊的 在 0 1N NaAc 溶液中的酪蛋白溶液 鸡蛋白溶液 将 80mL 鸡蛋清与 800mL 蒸馏水混合均匀后 用洁净的多层湿纱布垫在漏斗 上过滤 滤液即为鸡蛋白溶液 不能有不溶性物悬浮 要现配现用 最好使 用经过煮沸并封在容器中隔绝空气冷却的蒸馏水 质量分数为 5 的 CuSO4溶液 每排 每排 3 3 组合配 组合配 NH4 2SO4饱和溶液 确保有固体析出 确保有固体析出 天平 水浴锅 移液管 试管等 四 操作步骤四 操作步骤 1 1 蛋白质的等电点测定 蛋白质的等电点测定 取 5 支同种规格的试管 编号 按表 1 顺序精确加入各种试剂 特别注特别注 意意 0 5 0 5 酪蛋白溶液最后加入 酪蛋白溶液最后加入 然后逐一振荡试管 使试管混合均匀 此时 1 2 3 4 5 管的 pH 值依次为 5 9 5 3 4 7 4 1 3 5 将上述试管静置于试管架上 15min15min 后后 仔细观察 比较各管的浑浊度 将观察的结果记录于表格内 并指出酪蛋白的等电点 注意 注意 本试验各种试剂的浓度及用量均要求很准确 确保缓冲液的 pH 值准 确 浑浊度可用 等符号表示 最混浊的一管的最混浊的一管的 pHpH 值即为值即为 酪蛋白的等电点酪蛋白的等电点 表表 2 12 1蛋白质的等电点测定表蛋白质的等电点测定表 试管号蒸馏水 mL 1mol L 醋 酸 mL 0 1mol L 醋酸 mL 0 01mol L 醋酸 mL 0 5 酪蛋 白溶液 mL 浑浊度 18 40 61 0 28 70 31 0 38 01 01 0 49 01 0 57 41 61 0 2 2 蛋白质性质实验 蛋白质性质实验 蛋白质的盐析蛋白质的盐析 在试管里加入 1 2mL 鸡蛋白的水溶液 然后逐滴加入 NH4 2SO4饱和溶液 观察现象 有无白色混浊产生 滴加过程中不要摇动试管 现象不明显时 多加几滴硫酸铵饱和溶液 把少量混浊倾入另一支盛有蒸馏水的试管里 观察白色混浊是否溶解 蛋白质的变性蛋白质的变性 在试管里加入 2mL 鸡蛋白的水溶液 沸水浴加热 5min 观察现象 把试管 里的下层物质取出一些放在水里 观察现象 把试管里加入 3mL 鸡蛋白的水溶液 然后加入 1mLCuSO4溶液 观察现象 有无淡蓝色絮状混浊沉淀产生 把少量沉淀放入盛有蒸馏水的试管里 观 察沉淀是否溶解 蛋白质发泡性蛋白质发泡性 取 100mL 烧杯 装入 5mL 鸡蛋白的水溶液 插入 1mL 移液管 用吸耳球不 断鼓入空气 1min 观察发泡情况 泡沫数量 泡沫持续时间 另取 100mL 烧杯 装入 5mL 蒸馏水 插入 1mL 移液管 用吸耳球不断鼓入 空气 1min 观察发泡情况 泡沫数量 泡沫持续时间 3 3 面粉中面筋的粘弹性 面粉中面筋的粘弹性 将 20g 高筋面粉加 9mL 水揉成面团 注意朝着一个方向揉捏 另外将 20g 低筋面粉加 9mL 水揉成面团 注意朝着一个方向揉捏 要求揉捏有力 将上述揉捏好的面团静止 15min 以上 将上述静置好的面团 用手握住 不断在水中揉洗 注意朝着一个方向 揉捏 直至没有淀粉洗出为止 即无白色液体流下 将上述洗好的面团放置 60min 以上 使得表面水分挥发 用手揉捏上述两个面团 观察两个面筋的粘弹性及拉伸成薄膜的情况 并进行对比 4 4 自主设计实验 自主设计实验 根据兴趣爱好 3 6 位同学为一组 查找相关资料 开展