红细胞内外铁粒染色.doc

红细胞内外铁粒染色一、原理：骨髓细胞外铁及有核红细胞中铁粒与亚铁氰化钾作用后，呈普鲁士兰阳性反应。二、试剂：1、4%低铁氰化钾25ml（低铁氰化钾1g+蒸馏水25ml配成4%低铁氰化钾）2、4%HCL 25ml。（HCL27.8ml+蒸馏水222.2 ml即4HCL）染色时1、2液混合即可。3、1%核固红(核固红配制时，用5%硫酸铝溶解)25g硫酸铝+500 ml蒸馏水即5%硫酸铝,1g核固红+100ml5%硫酸铝即1%核固红.三、方法：1、干燥血片或骨髓片，用福尔马林37薰蒸固定5分钟水洗(蒸馏水)2、入4%低铁氰化钾盐酸混合液37(先预热20分钟)，置入血片或骨髓片40分钟水洗待干3、入1%核固红复染1520分钟，水洗待干。(蒸馏水)四、结果判定：铁粒幼细胞：胞质内出现兰色颗粒的幼红细胞。环铁粒幼细胞：幼红细胞质内的兰色颗粒在6个以上，并围绕于核周排列成环形者。铁粒红细胞：含有兰色铁颗粒的红细胞。 红细胞外铁：根据铁量的多少以“0”“+”表示，正常人一般为“+”“+”（观察骨髓小粒）“0”：无铁粒可见“+”：有少数铁粒或偶见到铁小珠“+”：有铁粒小珠和少数小块“+”：有很多的铁粒小珠和少数铁小块“+”：有很多的铁粒、小珠并有小块红细胞内铁：计数100个有核红细胞，以含铁粒红细胞百分数报告。正常人一般铁粒幼红细胞占40%， 以I、II型为主，无环形铁粒幼红细胞。“+”仅含1个铁颗粒“+”含2-5个铁颗粒“+”含6-9个铁颗粒“+”含10个以上铁颗粒五、临床意义： 1.鉴别缺铁性与非缺铁性贫血：缺铁性贫血时，细胞外铁消失，铁粒幼红细胞减少，平均为3%，因此铁染色可作为诊断缺铁性贫血及指导铁剂治疗的重要方法。2.诊断铁粒幼红细胞性贫血：铁粒幼细胞性贫血时，细胞外铁显著增多（+），其所含铁颗粒的数目也较多，颗粒也粗大。因此本染色可作为诊断铁粒幼细胞性贫血的重要方法。出现较多的环形铁粒幼细胞，可占幼红细胞的15%以上。铁染色是诊断铁粒幼细胞性贫血的重要手段。 3. MDS 时，铁粒幼细胞的百分比可增高，其所含铁颗粒的数目可增多，环铁粒幼细胞常见。在铁粒幼细胞难治性贫血，环铁粒幼细胞在15%以上。 4.非缺铁性贫血如巨幼细胞性贫血、溶血性贫血等，细胞外铁可增多，铁粒幼红细胞亦增多。含铁血黄素是由于组织内发生出血、长期慢性淤血和其它病变时，红细胞释放的血红蛋白分解、破坏的产物所致，或者是红细胞释放出的血红蛋白被吞噬细胞吞噬后，在某些溶酶体酶的作用下，血红蛋白被分解为不合铁的橙色血质和含铁的含铁血黄素。一般认为足由氢氧化铁和铁蛋白所组成的复合物，由于铁蛋白分子含存高铁盐，可用亚铁氰化钾和盐酸处理后呈现蓝色，故称普鲁士蓝反应。多见于吞噬细胞内，当细胞破裂后也可在间质内出现。体会：1普鲁士蓝反应是个很古老而又是非常敏感的组织化学反应。反应原理是组织内的高价铁与亚铁氰化钾作用牛成亚铁氰化铁即是普鲁士蓝反应。2组织最好用缓冲中性福尔马林液固定，但如果用10福尔马林液固定的标本做此反应应在一周内进行。因为长期经10福尔马林液固定的组织会影响反应结果。3亚铁氰化钾与盐酸最好选用分析纯，这样可保证反应结果可靠。4在操作过程中所使用容器必须要化学纯净。不要接触金属，更不要使用自来水冲洗切片，防止自来水管内所含的铁离子与组织内钙盐结合而出现铁的阳性反应。5最好选用已知的阳性切片对照染色。6显色时以镜下观察，如含铁血黄素含量过高，几分钟