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实验二十一实验二十一 红辣椒中色素的分离红辣椒中色素的分离 实验目的实验目的 学习用薄层层析和柱层析方法分离和提取天然产物的原理和实验方法 实验原理实验原理 红辣椒中含有多种色素 已知的有辣椒红 辣椒玉红素和 胡萝卜素 它们都属于类胡萝卜素类化合物 从结构上说都属于四萜化合物 其中 辣椒红是以脂肪酸酯的形式存在的 它是辣椒显深红色的主要因素 辣椒玉红素可 能也是以脂肪酸酯的形式存在的 本实验是以二氯甲烷为萃取溶剂 从红辣椒中只萃取出色素 经浓缩后用薄层 层析法作初步分析 再用柱层析法分离出红色素 用红外光谱鉴定并测定其紫外吸 收 课前预习课前预习 简单回流 柱色谱 薄层色谱 实验步骤实验步骤 1 色素的萃取和浓缩 将干的红辣椒剪碎研细 称取1 g 置于250 mL圆底烧瓶中 加入10 mL二氯甲烷和两三粒沸石 装上回流冷凝管 水浴加热回流20分钟 冷至室温后抽 滤 将所得滤液用水浴加热蒸馏浓缩至剩约1 mL残液 即为混合色素的浓缩液 2 薄层层析分析 用实验15中所述方法铺制CMC硅胶薄层板 2 5 cm 7 5 cm 六块 晾干并活化后取出一块 用平口毛细管汲取前面制得的混合色素浓缩液 点样 用1体积石油醚 30 60 与3体积二氯甲烷的混合液作展开剂 1 展开后记录各斑点的大小 颜色并计 算其Rf值 已知Rf值最大的三个斑点是辣椒红的脂肪酸酯 辣椒玉红素和 胡萝卜素 试根据它们的结构分别 指出这三个斑点的归属 3 柱层析分离 选用内径1 cm 长约20 cm的层析柱 按照实验3中记述的方法 用硅胶10 g 100 200目 在二氯甲烷中装柱 柱装好后用滴管汲取混合色素的浓缩液 2 仍按照实验13中的方法将混合加入柱顶 小心冲洗内壁后改用体积比为3 8的石油 醚 30 60 二氯甲烷混合液淋洗 3 用不同的接收瓶分别接收先流出柱子的三个色带 当第三 个色带完全流出后停止淋洗 4 柱效和色带的薄层检测 取三块硅胶薄层板 划好起始线 用不同的平口毛细管点样 4 每块板上点两 个样 其中一个是混合色素浓缩液 另一个分别是第一 第二 第三色带 仍用体 积比为1 3的石油二氯甲烷混合液作展开剂展开 比较各色带的Rf值 指出各色带 是何化合物 观察各色带点样展开后是否有新的斑点产生 推估柱层析分离是否达 到了预期效果 5 红色素的红外光谱鉴定和紫外吸收 将柱中分得的红色带浓缩蒸发至干 充分干燥后用溴化钾压片法作红外光谱图 与红色素纯样品的谱图相比较 并说明在3100 3600 cm 1区域中为什么没有吸收峰 用自己分得的红色素作紫外光谱 确定 max 本实验需6小时 注意事项注意事项 1 本展开剂一般能获得良好的分离效果 如果样点分不开或严重拖尾 可酌减 点样量或稍增二氯甲烷比例 2 混合色素浓缩液应留出滴作第步使用 3 此淋洗剂一般可获得良好的分离效果 如色带分不开
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