植物细胞实验参考答案

2010 20112010 2011 年第二学期植物细胞工程实验 本科 试题年第二学期植物细胞工程实验 本科 试题 1 1 实验室器具洗涤的工艺流程是什么 洗净的判定标准是什么 实验室器具洗涤的工艺流程是什么 洗净的判定标准是什么 工艺流程 浸泡 刷 冲洗 刷洗 干燥 存放 判定标准 净水反复冲洗至管壁 瓶壁形成均匀水膜而无水珠成股流下 2 2 无菌室及培养室的日常维护方法 无菌室及培养室的日常维护方法 维护方法 1 启用时清扫擦拭无尘 2 定期 不定期给予紫外线照射 来苏儿拖地 84 消毒液喷雾 氧乙酸消毒等 3 3 外植体消毒的一般程序 菊花 银杏 马铃薯三选一 外植体消毒的一般程序 菊花 银杏 马铃薯三选一 消毒程序 1 菊花 幼苗 摘掉叶片 流水冲洗 10 30min 75 酒精泡 30s 倒入废液桶 0 1 升汞 Hgcl2泡 10min 倒入升汞回收瓶 无菌水洗三至五遍即可 2 银杏 种子 剥去壳质中种皮 75 酒精泡 30s 倒入废液桶 0 1 升汞 Hgcl2泡 10min 倒入升汞回收瓶 无菌水洗三至五遍即可 3 马铃薯 芽 流水冲洗 10 30min 75 酒精泡 30s 倒入废液桶 0 1 升 汞 Hgcl2泡 10min 倒入升汞回收瓶 无菌水洗三至五遍即可 4 4 简述无菌操作的技术要点 简述无菌操作的技术要点 要点 1 组培室消毒处理 2 超净工作台开紫外灯照射 10 20min 送风 3 严格消毒外 植体 4 已消毒的外植体接触的所以工具 器血 包括空气均须是无菌的 5 5 简述高压灭菌锅的使用方法 简述高压灭菌锅的使用方法 方法 1 开盖 向左旋转移动手轮数圈 直至移动到顶 使锅盖充分提起 拉起左力 住上的保险栓 侧向推开横梁 2 通电 插好插头 将控制面板上的电源开关按至 ON 处 3 加水 加入约 8 升水直至高水位亮 如果加水过多溢出内胆 应开启下阀防 区内胆中的水 4 堆放 各包之间应留有一定的间隙 勿将灭菌包堵住安全阀气放孔 5 密闭 使锅盖与国体充分密合 绿灯亮时 表示容器密闭到位 6 灭菌 控制面板上的加热灯亮 待指针指向 0 05MP 时打开排气阀让少量蒸 汽排除 待排尽后关闭排气阀 可以达到灭菌室温度均衡的目的 7 排气 灭菌完成 关闭电源开关 拔掉插头 待压力表指示为零后 开启安 全阀 放尽气体 8 起盖 如果熟练使用方法 请读者自己概括 6 6 简述污染率 枯死率和诱导率的计算方法 简述污染率 枯死率和诱导率的计算方法 计算方法 污染率 100 污染数 总接种数 枯死率 100 未丛生芽的 未污染的 萌芽率 100 有丛生芽的 未污染的 7 7 请写出请写出 MSMS 基本培养基的母液基本培养基的母液 MS MS 的配置步骤 的配置步骤 MSI 大量元素 5 种 20 倍浓缩 取 1L 大量元素 20 倍浓缩 使用浓度 mg L 称量 NH4NO3 33 000 33 KNO3 38 000 38 Cacl2 2H2O 8 800 8 8 MgSO4 7H2O 7 400 7 4 KH2PO4 3 400 3 4 8 8 银杏愈伤组织提取黄酮的操作要点 银杏愈伤组织提取黄酮的操作要点 操作要点 取出愈伤组织 65 烘干 48h 磨成细粉 称取 0 5g 细粉 加入 20ml 甲醇提取黄酮 超声波水浴破碎 30min 过滤 收集滤液加入 10ml 1 5mol L 的 HCL 水浴回流 30min 最佳 甲醇定容至 50ml 于 366nm 下测 OD 值 OD 之在 0 2 0 8 间有效 9 9 菊花快繁实验中 在进行生根培养时 为什么要选择菊花快繁实验中 在进行生根培养时 为什么要选择 1 2MS1 2MS 作为基本培养基 作为基本培养基 原因 选择 1 2MS 作为基本培养基 即降低了无机盐的含量 降低了渗透压 有利于牙 系充培养基中吸水 促进根的生长 10 10 简述植物细胞工程实验室里马铃薯脱毒的方法及原理 简述植物细胞工程实验室里马铃薯脱毒的方法及原理 方法 选择品种和母株 获取茎段 芽段消毒 剥离茎尖接种 分化成苗 保存无毒试管苗 扩繁或试管薯诱导 原种 生产种 原理 由于病毒在植株体内分布不均匀 存在于根尖 茎尖部分病毒含量低 或无病 毒 以茎尖组织作为外植体 能获得脱毒植株 供繁种 生产使用 11 11 简述配方简述配方 1 2MS NAA1 2MS NAA0 1 0 1 蔗糖 蔗糖 3 3 琼脂琼脂 0 7 0 7 pH5 8pH5 8 的含义及配的含义及配 1L1L 的制备方法 的制备方法 含义 1 2MS 降低了无机盐的含量 降低了渗透压 有利于牙系充培养基中吸水促进 根的生长 NAA0 1 即 BA NAA Ni 0 根据植物生长激素 CTK AUK 生长调控理论 Ni 值越 小 越有利于根的生长 配置方法 1 洁净的色搪瓷杯 取蒸馏水 700ml 待冒白气加入 7g 琼脂搅拌至融化后 加 30g 蔗糖溶解 2 移取加入母液 1 2MS 用移液管分别量取 MS 25ml MS 5ml MS 5ml MS 5ml MS 5ml 除 MS 量减半外其他不减半不影响实 验 取 1mlNAA 加入其中 3 将上述溶液定容至 1000ml 调节 pH 至 5 8 4 趁热分装 包扎封口 5 高压灭菌锅灭菌 15 20min 降温冷却 备用 12 12 简述配简述配 500ml500ml MS BAMS BA0 5 0 5 NAA NAA0 2 0 2 蔗糖 蔗糖 3 3 琼脂琼脂 0 7 0 7 pH5 8pH5 8 的过程 的过程 配置过程 1 洁净的色搪瓷杯 取蒸馏水 300ml 待冒白气加入 3 5g 7g 0 5 琼脂 搅拌至融化后 加 15g 蔗糖溶解 2 移取加入母液 用移液管分别量取 MS 25ml MS MS 各 5ml 除 MS 量减半外其他不减半不影响实验 分别取 2 5mlBA lmlNAA 加入其中 3 将上述溶液定容至 500ml 调节 pH 至 5 8 4 趁热分装 包扎封口 5 高压灭菌锅灭菌 15 20min 降温冷却 备用 13 13 简述菊花快繁的技术路线 简述菊花快繁的技术路线 技术路线 菊花嫩芽 J1 诱导丛生芽 J2 丛生芽增值 J3 生根 再生 根 14 14 简述马铃薯脱毒的工艺流程 简述马铃薯脱毒的工艺流程 工艺流程 选择品种和母株 获取茎段 芽段消毒 剥离茎尖接种 分化成 苗 保存无毒试管苗 扩繁或试管薯诱导 原种 生产种 15 15 如何理解如何理解 y m y m a an n 理解 Y 扩繁数 m 初始无菌系材料数量 a 每次芽增值数 n 继代次数 16 16 组培中外植体污染原因及预防措施 组培中外植体污染原因及预防措施 原因 1 培养基灭菌不彻底 2 外植体 工具器皿 空气中本身带毒 3 操作不规范 预防 1 保持已消毒的外植体接触的所以工具 器血 包括空气均严格无菌 2 操作 规范 认真对待 3 外植体取材要正确小心 消毒时应该彻底 1717 培养基灭菌后不能凝固的可能原因是什么 培养基灭菌后不能凝固的可能原因是什么 原因 1 使用的琼脂用量不足或琼脂质量不合格 2 操作失误 3 琼脂溶解不充分 4 调节 pH 不准确 如果低于 5 8 会不溶解 5 灭菌时间过长或灭菌时未排气等 18 18 菊花快繁实验中 请写出所用到的三种培养基 并用器官分化理论简单作出分析 菊花快繁实验中 请写出所用到的三种培养基 并用器官分化理论简单作出分析 培养基 J1 MS BA2 0 NAA0 2 30g l 蔗糖 7g 琼脂 pH5 8 Ni BA NAA 10 1 J2 MS BA2 0 NAA0 1 30g l 蔗糖 7g 琼脂 pH5 8 Ni 2 0 1 20 1 J3 1 2MS NAA0 1 30g l 蔗糖 7g 琼脂 pH5 8 Ni 0 0 1 0 分析 根据植物生长激素 CTK AUK 生长调控理论 Ni 值越小 越有利于根的生长 Ni 值越大 越有利于芽的生长 J1 是为了诱导芽丛生 J2 是为了使丛生芽增值 J3是为了 促进生根 19 19 请写出由无菌系和从自然取材这两种方式对于建立初代培养有何异同 请写出由无菌系和从自然取材这两种方式对于建立初代培养有何异同 相同点 均可以在一定环境培养条件下获得完整的组织 器官或植株 可以高效 快 速和用很少的材料产生大量植株 需要的培养条件一样 不同点 从自然界中取材建立初代培养中其外植体需要严格消毒而无菌系不需要 从 自然界取材中培养出来的植株容易发生褐变 玻璃化苗现象而无菌系不易 自然界中取材 多带毒取材的部位可能会与无菌系不同 20 20 马铃薯结薯培养基中加入活性炭的目的是什么 蔗糖含量高达马铃薯结薯培养基中加入活性炭的目的是什么 蔗糖含量高达 80g L80g L 又是为何 又是为何 目的 吸附培养物分泌出有害物质 原因 1 提高渗透压降低培养基的渗透势 减少马铃薯水分获取 以防产生玻璃化苗 2 马铃薯的主要成分为淀粉故其生长需要大量的糖类物质 2121 解释激素调控理论 解释激素调控理论 NiNi 值 值 调控理论 Ni CTK AUX 则可建立起茎 芽 根分化情况与 Ni 的相关 Ni 大 芽的分化 Ni 小 细胞增殖与根的分化 Ni 适中 保持愈伤组织生长状态 不同 物种 不同基因型对适中的 Ni 值要求不同 起决定作用的 CTK AUX 的值 而非绝对用量 22 22 谈谈利用组培技术生产次生代谢产物的优点 谈谈利用组培技术生产次生代谢产物的优点 优点 1 植物次级代谢对人类健康和生活非常重要 在医药 食品添加剂和化妆品的 研究和生产中具有很大的价值 2 通过组培技术 进行工厂化大规模生产植物有用次级代谢产物 满足人类健 康和生活的需求 促进人类社会的可持续性发展等 23 23 某组培公司计划扩繁非洲菊 拟用配方为 某组培公司计划扩繁非洲菊 拟用配方为 MS BAMS BA2 0 2 0 NAA NAA0 1 0 1 年计划生产试管苗 年计划生产试管苗 1212 万支 万支 请计算出拟购请计算出拟购 BABA 的用量 单位 的用量 单位 g g 注 每升培养基可以分装注 每升培养基可以分装 6060 支试管支试管 解 解 BA2 0 即每 L 要使用 2mg 而每 L 可以分装 60 支试管故需要 120000 60 2000L 因此至少需拟购 2000 2 0 1000g 4g 的 BA 24 24 某研究所开展苹果茎尖脱毒的研究工作 初步统计结果为 初代培养 其污染率为某研究所开展苹果茎尖脱毒的研究工作 初步统计结果为 初代培养 其污染率为 60 60 分化率为 分化率为 50 50 移苗成活率为 移苗成活率为 100 100 继代培养 其分化芽数为 继代培养 其分化芽数为 2 2 个 每一个半月为一个 每一个半月为一 周期 现拟商业化生产脱毒种苗周期 现拟商业化生产脱毒种苗 51205120 株株 年 请计算需剥离茎尖的数量 年 请计算需剥离茎尖的数量 解 Y 扩繁数 5120 m 初始无菌系材料数量 a 每次芽增值数 2 n 继代次 数 12 1 5 8 Y m an 5120 m28 m 20 N 1 60 50 m 20 N 100 个 故理论上需要剥离 100 个茎尖 25 25 某组培公司计划扩繁蝴蝶兰 拟用某组培公司计划扩繁蝴蝶兰 拟用 1 2MS BA5 0 NAA0 1 CM10 1 2MS BA5 0 NAA0 1 CM10 年产量 年产量 100100 万苗 已万苗 已 知每瓶装苗量为知每瓶装苗量为 5 5 个 请计算个 请计算 BABA CMCM 的用量 的用量 解 假设每 L 培养基可分装 20 瓶计算 则需要 1 106个 5 个 20 瓶 10000L 培养基 BA5 0 即 5mg L M BA5 0 5mg L 10000 50g CM10 椰乳 即每 L 需要 100ml 故需椰乳 100ml L 10000L 1000L 26 26 某公司经初步实验表明 玫瑰每四周扩繁一次 增殖倍数为某公司经初步实验表明 玫瑰每四周扩繁一次 增殖倍数为 4 4 现有玫瑰试管苗 现有玫瑰试管苗 200200 支 支 请计算该公司年产玫瑰