DL-96试剂 SOP文件

X X X 检验科 临床微生物实验室 DL 96 细菌测定系统 标准操作规程 编号 WSW SOP 1 日期 年 月 版号 第 1 页 共 4 页 目的目的 规范 DL 96 细菌测定系统随机体外诊断试剂操作规程 保证检验质量 该该 SOPSOP 变动程序变动程序 本标准操作程序的改动 可由任一使用本 SOP 的工作人员提出 并报经下述人员批准签字 专业主管 科主 任 原理原理 试剂板由生化反应孔和抗菌药物 MIC 测定孔组成 在生化反应孔中加入细菌悬液 经 35 37 孵育 在细菌 代谢作用下生化反应直接颜色变化或经加入显色剂后产生颜色变化 抗菌药物 MIC 采用微量肉汤稀释法 加入 还有细菌的 MH 肉汤培养基 经 35 37 孵育 根据试验孔是否出现浑浊 沉淀 确定细菌是否生长 测定系统 采用比色法对各项生化反应进行结果判定 根据细菌生化反应的概率来完成细菌的鉴定 测定系统通过比浊法 对抗生素进行 MIC 半定量测定分析 MIC 值 操作程序操作程序 1 使用本试剂板的基本要求 1 1 无特殊营养要求的革兰氏阳性菌 革兰阴性菌和真菌等病原菌 1 2 18 24 小时分离培养的单个纯菌落 或纯培养物 2 随机试剂板的选择 2 1 根据待测菌的培养特性 菌落特征 氧化酶实验 触酶试验结果以及革兰染色情况 选择好相应的试剂 板 2 2 试剂板的选择 DL 96E DL 96NE DL 96STAPH DL 96STREP DL 96FUNGUS 3 试剂板的接种 3 1 菌悬液与药敏液的配置 菌悬液制备 挑取纯培养单个菌落于稀释液瓶内壁研磨呈细菌悬液 要求如下 DL 96E DL 96NE DL 96STAPH 的菌悬液都制备 0 5 麦氏单位 DL 96STREP 菌悬液制备 2 麦氏单位 DL 96FUNGUS 菌悬液都制备 1 麦氏单位 药敏液的配置 具体请见细菌测定系统随机体外诊断试剂板使用说明书 3 2 试剂板的接种 3 2 13 2 1 DL 96EDL 96E 试剂板试剂板 适用于氧化酶试验阴性的革兰氏阴性杆菌的鉴定和抗菌药物适用于氧化酶试验阴性的革兰氏阴性杆菌的鉴定和抗菌药物 MICMIC 测定 测定 3 2 1 1 菌悬液制备 挑取纯培养单个菌落于稀释液瓶内壁研磨呈细菌悬液 0 5 麦氏单位 3 2 1 2 用连续移液器 配无菌移液吸头 吸取该菌悬液加入试剂板 A1 A12 B1 B12 和 C1 C4 孔内 每孔 X X X 检验科 临床微生物实验室 DL 96 细菌测定系统 标准操作规程 编号 WSW SOP 1 日期 年 月 版号 第 1 页 共 4 页 100 l 3 2 1 3 在 A1 A7 孔分别滴加无菌石蜡油 2 滴 3 2 1 4 吸菌悬液 50 l 加至肉汤培养基内 充分混匀 继续加入试剂板的其余各孔 所有的抗菌药物 MIC 测定试验孔及生长对照孔 C 每孔 100 l 3 2 1 5 剩余的菌液及吸头浸入杀菌溶液内浸泡灭菌 3 2 23 2 2 DL 96NEDL 96NE 试剂板试剂板 适用于氧化酶试验阳性或氧化酶试验阴性但厌氧葡萄糖不产酸的革兰氏阴性杆菌的鉴适用于氧化酶试验阳性或氧化酶试验阴性但厌氧葡萄糖不产酸的革兰氏阴性杆菌的鉴 定和抗菌药物定和抗菌药物 MICMIC 测定 测定 3 2 2 1 菌悬液制备 挑取纯培养单个菌落于稀释液瓶内壁研磨呈细菌悬液 0 5 麦氏单位 3 2 2 2 用连续移液器 配无菌移液吸头 吸取该菌悬液加入试剂板 A1 A12 和 B1 B12 孔内 每孔 100 l 3 2 2 3 在 A1 A7 孔分别滴加无菌石蜡油 2 滴 3 2 2 4 吸取菌悬液 50 l 加至肉汤培养基 充分混匀 继续加入试剂板的其余各孔 所有的抗菌药物 MIC 测定试验 生长对照孔 C 及 6 5 NaCl 每孔 100 l 3 2 2 5 剩余的菌液及吸头浸入杀菌溶液内浸泡灭菌 3 2 33 2 3 DL 96STAPHDL 96STAPH 试剂板 适用于触酶试验阳性的革兰氏阳性球菌的鉴定和抗菌药物试剂板 适用于触酶试验阳性的革兰氏阳性球菌的鉴定和抗菌药物 MICMIC 测定 测定 3 2 3 1 菌悬液制备 挑取纯培养单个菌落于稀释液瓶内壁研磨呈细菌悬液 0 5 麦氏单位 3 2 3 2 用连续移液器 配无菌移液吸头 吸取该菌悬液加入试剂板 A1 A12 和 B1 B10 孔内 每孔 100 1 3 2 3 3 在 A1 A3 孔分别滴加无菌石蜡油 2 滴 3 2 3 4 吸菌悬液 50 l 加至肉汤培养基内 充分混匀 继续加入试剂板的其余各孔 所有的抗菌药物 MIC 测定试验孔及生长对照孔 C 每孔 100 l 3 2 3 5 剩余的菌液及吸头浸入杀菌溶液内浸泡灭菌 3 2 43 2 4 DL 96STREPDL 96STREP 试剂板试剂板 适用于触酶试验阴性的革兰氏阳性球菌的鉴定和抗菌药物适用于触酶试验阴性的革兰氏阳性球菌的鉴定和抗菌药物 MICMIC 测定 测定 3 2 4 1 记录菌落溶血类型 溶血 溶血 3 2 4 2 挑取纯培养单个菌落于 0 3ml 无菌水中 混匀 3 2 4 3 将以上菌悬液浇于或用无菌棉拭子均匀涂于血平皿上 3 2 4 4 对于 溶血链球菌和肠球菌 经以上 24 小时孵育 一般能形成较大的菌落 对于其它链球菌需经 48 小时孵育才可形成较大的菌落 对于某些对营养要求极高的苛养菌 则取菌落于链球菌专用培养液 1ml 中 35 37 孵育 5 小时 将以上菌悬液均匀浇于血平皿上 再置 35 37 孵育 18 24 小时 3 2 4 5 菌悬液制备 挑取纯培养单个菌落于稀释液瓶内壁研磨呈细菌悬液 2 麦氏单位 X X X 检验科 临床微生物实验室 DL 96 细菌测定系统 标准操作规程 编号 WSW SOP 1 日期 年 月 版号 第 1 页 共 4 页 3 2 4 6 用连续移液器 配无菌移液吸头 吸取该菌悬液加入试剂板 A5 A12 孔内 每孔 100 l 3 2 4 7 吸菌悬液 500 l 加至肉汤培养基 A 内 充分混匀 继续加入试剂板 A1 A4 B1 B7 孔内 每孔 100 l 3 2 4 8 在 A1 A4 A9 B1 B7 孔分别滴加无菌石蜡油 2 滴 3 2 4 9 吸剩余肉汤培养基 A 50 l 加至肉汤培养基 B 内 充分混匀 继续加入试剂板的其余各孔 所有的 抗菌药物 MIC 测定试验孔 生长对照孔 C 及 6 5 NaCl 每孔 100 l 并在 C1 孔滴加无菌石蜡油 2 滴 3 2 4 10 剩余的菌液及吸头浸入杀菌溶液内浸泡灭菌 3 2 53 2 5 DL 96FUNGUSDL 96FUNGUS 试剂板试剂板 适用于真菌的鉴定和抗菌药物适用于真菌的鉴定和抗菌药物 MICMIC 测定 测定 3 2 5 1 菌悬液制备 挑取纯培养单个菌落于稀释液瓶内壁研磨呈菌悬液 1 个麦氏单位 3 2 5 2 用连续移液器 配无菌移液吸头 吸取该菌悬液 100 l 加至同化稀释液内 充分混匀 加入试剂 板 C1 C11 和 D1 D12 孔内 每孔 100 l 3 2 5 3 用连续移液器 配无菌移液吸头 吸药敏稀释液 100 l 加入 E12 孔内 3 2 5 4 再吸菌悬液 20 l 加至药敏稀释液内 充分混匀 加入试剂板 E1 E11 和 F2 F12 孔内 每孔 100 l 3 2 5 5 剩余的菌液及吸头浸入杀菌溶液内浸泡灭菌 3 3 试剂板的孵育 撕开不开胶的纸对齐贴于测试板 35 37 孵育 DL 96FUNGUS 试剂板放置 30 湿盒内孵育 4 随机试剂板的检测 4 1 试剂板孵育培养 18 24 小时后 个别生长缓慢可延长 36 48 小时 检测试剂板 按照使用说明的要求向 DL 96E DL 96NE DL 96STAPH DL 96STREP 测试板加入辅助试剂 4 1 1 DL 96E 先于 A12 孔 VP 滴加 VP 试剂 A B 各 1 滴 20 分钟后 再于 A11 孔 IND 滴加靛基质试 剂 1 滴 数分钟后 于 A10 孔 PHE 滴加苯丙氨酸试剂 1 滴 立即判读结果 4 1 2 DL 96NE 1 先于 A11 孔 IND 滴加靛基质试剂 1 滴 数分钟后 再于 A10 孔 NIT 滴加硝酸盐还原 试剂 A B 各 1 滴 立即判读结果 4 1 3 DL 96STAPH 先于 A12 孔 VP 滴加 VP 试剂 A B 各 1 滴 30 分钟后 再于 A10 孔 PYR 滴加 PYR 试剂 1 滴及 All 孔 NIT 滴加硝酸盐还原试剂 A B 各 1 滴 立即判读结果 4 1 4 DL 96STREP 先于 A11 孔 VP 滴加 VP 试剂 A B 各 1 滴 于 A10 孔 PYR 滴加 PYR 试剂 1 滴 再于 A12 孔 HIP 滴加马尿酸盐试剂 1 滴 30 分钟后判读结果 X X X 检验科 临床微生物实验室 DL 96 细菌测定系统 标准操作规程 编号 WSW SOP 1 日期 年 月 版号 第 1 页 共 4 页 4 2 打开细菌测定系统软件 录入病人信息资料 选择测试板类型后 按判别键 按照颜色和浊度输入结果 系统自动得出细菌鉴定和药敏试验结果 5 报告单的打印 细菌鉴定与药敏试验报告单在细菌测定系统中专家系统中打印 6 报告的查询与统计 6 1 按查询键进入查询界面 输入查询条件 观察结果 6 2 按统计键进入统计界面 输入统计条件 观察结果 质量控制 1 质控方法 1 1 DL 96E DL 96NE DL 96STAPH DL 96STREP DL 96FUNGUS 为鉴定与药敏复合试剂板 采用鉴定与药 敏一起进行质控 1 2 鉴定与药敏的质控 每新近一批鉴定卡做一次质控 每一新生产批号鉴定卡需用相应质控菌株做质控以 检测生化反应的可靠性 每一新生产批号药敏卡需用相应质控菌株做质控以检测 MIC 结果的可靠性 材料和试 剂批号必须记录并保存 2 质控步骤 DL 96E DL 96NE DL 96STAPH DL 96STREP DL 96FUNGUS 质控步骤同 操作程序 观察质 控是否失控 3 失控原因分析和处理 3 1 如果失控应按一下步骤进行初步分析和处理 错误使用质控菌株 每一按照彼岸准操作程序操作 试剂板超出有效期 测定系统严重误差 3 2 无