EP5.0微生物检测翻译

EP5 0 微生物检测翻译版本 下为 EP5 0 微生物检测 2 6 12 和 2 6 13 的中译本 不足之处请各位大侠指正 未消毒产品的微生物检测 以下所要描述的试验可定量检测出有氧条件下嗜温性细菌及菌类的数目 这个试验首先旨在于确定专题论文中的物质是否符合药典中关于微生物的要求 当用于此目的时可参考 下面的说明 包括取样的数目及以结果的解释如下 这个测试还可用于药典中抗菌剂保存的功效 5 1 3 他们可以用于进一步监测原料质量或用于制备药品的微生物质量 5 1 4 的相关项目 当用于这些目的 时 例如制造者用于监测原料或成品或工艺验证 测试的产品包括取样的数目 结果的解释等都需要制 造者与有能力的权威机构达成共识 在避免产品偶然污染的条件下进行检测 避免污染的进行的预防措施不能影响到试验中显示出的微生物 如果要检测的产品有抗菌微生物的活动必须使其中立 如果灭活剂用于此目的他们的功效及无毒性对抗 微生物就会显现出来 通过膜过滤方法确定活菌总数目 或用药典中所描述中平板计数法 当没有其它方法用于计算细菌数目时 可用最大或然数法 方法的选择基于几个因素 例如产品的性质 微生物的期待值 选择任何方法都要经过适当的验证 当联合就用 5 1 3 和 5 1 4 时 平板计数法 表面铺展法和膜过滤法可能用到 样品的制备 取样计划 产品取样必须依照一个较好定义的取样计划 取样计划主要取决于例如批量 与不可接受高污 染产品的健康危害因素 产品的物性及污染的预期水平等因素 除另有描述 考虑到以上预防措施一般 用制备或取 10g 或 10ml 物质做试验 如果必要的话 也可取其它量 用足够数量的容器将这样品混匀 取决于待检测物质的性质 适用于同种性质的产品的取样计划与微生物的分布是一个问题 是三级取样 计划 在这种情况下每批取五个样品并分别调查 这三级分别是 1 可接受样品 例如 样品每克或每毫升包含的少于 m 集落形成单位 m 表示相关专著中规定的限度 2 边际样品 例如 多于 mCFU 但每克或每毫升少于 10mCFU 3 缺陷试样 例如包含多于 10mCFU 水溶性产品 在 pH 7 0 缓冲氯化钠胨中或其它恰当液体中溶解或稀释 10g 或 10ml 产品 一般十个稀释液 中制备一个 尽管如此 产品的特性或必要的敏感性也可做成其它的比例的 如果已知此产品有抗微生 物活性 可加入灭活剂到稀释液中 如果需要调节 pH 值 可进一步制备同等 10 倍的液体 不溶于的非脂肪产品 在 pH 7 0 缓冲氯化钠胨中或其它恰当液体中悬浮 10g 或 10ml 产品 一般十个稀释液中制备一个 尽管 如此 产品的特性或必要的敏感性也可加大体积 一种恰当的表面活性剂 例如可加入 1g l 聚山梨酯 80 帮助较差湿度物质悬浮其中 如果已知此产品有抗微生物活性 可加入灭活剂到稀释液中 如果需要调 节 pH 值 可进一步制备同等 10 倍的液体 脂肪产品 10g 或 10ml 的待测的同类产品要有不超过其重量一半的已消毒的聚山梨酯 80 或其它的恰当的 表面活性剂 如果必要的话加热不超过 40 如果特例的话不超过 45 小心混合如果有必要保持温度 的话要在水浴中或细菌培养器中 加入足够的预热好的氯化钠胨缓冲液 pH 7 0 制备原来十个产品的一个 小心混合在乳状物形成的最短时间内保持温度 在任何情况下都不要超过 30 分钟 进一步用 pH 7 0 缓冲 氯化钠胨制备十倍的溶液含有适当浓度消毒的聚山梨酯 80 或其它浓度的表面活性剂 控释贴片用消毒的产钳去掉十个制备好的透皮的贴片 有粘性的一面往上 放到消毒的玻璃或塑料盘上 用消毒的纱布盖住粘性面 或编织过滤型单丝联合体格子 如果必要的话将这十个贴片放到最小体积 500mlpH 7 0 缓冲氯化钠胨中并有恰当的灭活剂象聚山梨酯 80 或蛋黄素 用力振荡此制备品至少三十分 钟 制备品 A 以相同方式制备另外十个贴片 将其放在 500ml 肉汤介质 D 中 并用力振荡此制备品至 少三十分钟 制备品 B 产品的检测 薄膜过滤用薄膜过滤有名义上的孔径不超过 0 45um 且其可保持细菌的有效性已经建立 选择过滤材料的 类型以这样一种方式进行 保持细菌的有效性不受调查样品组成的影响 纤维素硝酸盐过滤膜 例如可 用于水性 油性 弱酒精性溶液 纤维素醋酸盐膜例如可用于强酒精性溶液 过滤装置的设计允许将过滤 转移至培养介质中 将制备样品一段中所描述的制备好的样品取适当数量 最好一种产品取一克代表 如果集落形成单位要 求较大的话也可少取些 每个用两层膜迅速过滤 用三等量 每次大概 100ml 的适当液体象 pH 7 0 缓 冲氯化钠胨洗过滤 向溶液中加入表面活性剂聚山梨酯 80 或抗微生物的灭活剂 如果通过验证 可用三 批洗过的 转移一层过滤膜 首先对细菌计数 在表面上放一层适当的琼脂 例如介质 B 或其它 如果 为了真菌计数在表面上也放一层适当的琼脂例如介质 C 琼脂 B 的培养器在 30 35 琼脂 C 的培养器在 20 25 五天 除非在短时间内就可得到可靠数量 选择平板最大数目不少于 100 集落并且计算每克或每 毫升产品的集落数 当检测释放贴片时 分别用两个消毒的过滤膜过滤 50ml 制备品 A 一个膜放上琼脂 B 用来测总存活数 另一个用琼脂 C 测真菌数 平板计数法 a 倾倒式平板法 用 9CM 皮氏培养皿 每个均加入制备阶段制备好的样品 1ml 15 20ml 适于培养细菌 液状琼脂 象介质 B 或 15 20ml 适于培养真菌液状琼脂 象介质 C 不超过 45 如果用大的皮氏培 养皿琼脂量也要相应的增加 每种等级的溶液制备每种介质至少要有两个皮氏培养皿 培养平板在 30 35 五天 真菌是 20 25 除非在短时间内就可得到可靠数目 对应一个溶液选择平板 显示的最大 集落数要小于 300 真菌是 100 计算出每克或每毫升的平均数目及集落数目 b 表面扩散法 用 9CM 皮氏培养皿 加入 15 20ml 适于培养细菌液状琼脂 象介质 B 或 15 20ml 适于 培养真菌液状琼脂 象介质 C 在 45 允许固体化 如果用大的皮氏培养皿琼脂量也要相应的增加 将 平板干燥 例如在 LAF 椅上或培养器 将制备阶段制备好的样品不超过 0 1ml 的样品在介质表面扩散开 每种等级的溶液制备每种介质至少要有两个皮氏培养皿 用倾倒平板法中所说的方法培养并计算集落数 最大或然率方法 此法的准确度和精密度均低于前两种方法 尤其在霉菌的计数上结果不可靠 由于以上这些原因此法用 于在其它方法均不可用的情况下计算细菌 如果使用此方法是公正的 程序如下 制备一系列三个连续的产品在制备阶段制备好的样品的十倍溶液 从每个等级的溶液中取出可被 3 整除的 1g 或 1ml 用来培养三个装有适当介质 例如肉汤介质 A 的试管 如果必要的话可加入聚山梨酯 80 表 面活性剂或抗菌剂的灭活剂 因此如果制备三个等级的溶液就要培养 9 个试管 培养所有的试管在 30 35 五天 记录每个等级溶液试管数目显示微生物的增长 如果读出结果困难或不确定是否取决于检查 产品的性质 在同样的肉汤里面进行次培养 或在一个适当的琼脂介质中 如琼脂介质 B 在同样的温度 下 18 到 24 小时采用此结果 确定每克或每毫升中产品的最大可能存活数如下表 表格 培养媒介的有效性和计数法的正确性 细菌生长实验分别隔离在有一种恰当的液体介质 例如 肉汤介质 A 的容器中从 30 35 18 24 小时 真菌生长实验是隔离在适当的琼脂介质 例如无抗生素的介质 C 对于假丝酵母在 20 25 48 小时 黑 曲菌要在 20 25 7 天 小表 用 pH 7 0 缓冲氯化钠胨使参考的悬浮液每毫升有 100 个菌落 分别用每个微生物的悬浮液作为一种控制 计数方法 在有无产品的情况下都要检测 当用膜过滤法或平板计数法测试时 任何微生物测试数目的差异不 多于得到接种体根据其数目计算出的值 当用最大或然率方法时 从接种体计算出的数值结果可信度达 95 为 了测试培养基的无菌状态和稀释液和操作的无菌 用无菌的 pH 7 0 缓冲氯化钠胨来准备测验 一定要确保 没有滋生微生物 结果的解释 在琼脂 B 上发现的平均菌落数目与细菌数目认为是相同的 认为真菌的数目和琼脂 C 上单位的菌落是相同 的 所有存活的细菌的总数是上述所说的细菌和真菌的总和 如果有证据证明在这两种培养基上有相同的微 生物 则是正确的 如果数目用最大或然率计算 则结果为细菌数目 专题文献中提到的限度解释如下 100 微生物 最大可接受限度 500 1000 微生物 最大可接受限度 5000 以此类推 如果取样计划象例子中说的用的三级取样的话 程序如下 每五个样品计算一下总的存活数 如果满足如下条件的话 物质或制备就可通过测验 1 所有的单个的存活数目均未超过描述限度 例如没有不可接受的样品 2 同时不多于两个的活数目均未超过描述限度且在十倍的限度之间 例如不超过两个边界样品 方法及培养 基详见 2 6 13 2 6 13 专有微生物测试 在这种常用的方法中 通常是有选择性的应用一定的介质 对于所有的介质来说有一共同点那就是亚致死量 伤害微生物是无法检测到的 因为它与产品的质量有关 复生需要依靠选择的介质进行试验规程 如果被检测的产品有抗菌活动 这个产品必须足够的中和 肠道菌和一定的革兰氏阴性菌 尽管设计的试验是用于检测肠道菌属的细菌 其它菌 气单胞菌属 假单胞菌属 也许也可以发现 细菌的检测 准备产品按 2 6 12 但是用肉汤 D 代替 pH 7 0 缓冲氯化钠胨 均一化在 35 37 度培养一段时间使细菌复活 但不要充足的激活他们使其繁殖 通常 2 小时到 5 小时 振荡容器 将产品与富足的培养基按 1 比 100 的 比例 在 35 37 度培养 18 48h 如果在任何盘上均没有葛兰氏阴性菌 产品通过测试 定量评价 接种适当量的富足培养基 E 到同质的 A 和 或它的溶液分别包含 0 1 0 01 0 001g 待检测的产品 在 35 37 度培养 24 48h 次培养每个产品在琼脂培养基 F 上得到选择性的分离 在 35 37 度培养 18 24h 较好集落 的成长呈红色或微红色 革兰氏阴性菌组成一个阳性结果 标记小量的产品给出阳性的结果 大量的给出的是 阴性的结果 从下表中可估算出细菌的数目 表格 当测试缓释片时 过滤制备品 B50ml 如一般方法 2 6 12 中所描述的方法那样通过一个无菌的过滤膜 将膜 放在 100ml 富足肉汤 E 中 35 37 度培养 18 24h 培养后 在琼脂 F 上扩展以检测肠道菌和其它革兰氏阴性 菌 埃希氏菌属大肠杆菌 按一般方法 2 6 12 中所描述的那样制备产品 用 10ml 或者是与 1g 或 1ml 相对应的量在 100ml 富足肉汤 A 中培养 均一化 35 37 度培养 18 48h 振荡容器 转移 1ml 到 100ml 富足肉汤 G 中培养 43 45 度培养 18 24h 在琼脂培养基 H 上进行次培养 35 37 度培养 18 72h 长出红色 非粘液状革兰氏阴性杆菌表明存在沙 门氏菌 这个可由适当的生化试验再次确认 例如生产吲哚 产品通过测试如果没有见到菌落或生化测试呈阴 性 沙门氏菌 按一般方法 2 6 12 中所描述的那样制备产品 用琼脂培养基代替 pH 7 0 缓冲氯化钠胨 均一化 在 35 37 度培养 18 24h 转移 1ml 培养好的产物到 10ml 肉汤培养基 I 中 41 43 度培养 18 24h 次培养至少在琼脂 培养基 J 琼脂培养基 K 琼脂培养基 L 中选择出两个 在 35 37 度培养 18 72h 沙门氏菌的存在可由下列表 象证明 琼脂培养基 J 发展的很好 无色菌落 琼脂培养基 K 发展的很好 红色菌落 有或没有黑心 琼脂培养基 L 小的 透明的 无色或粉色或不透明白色菌落 通常由一粉色或红色区域包围 转移分离一些可疑菌落到琼脂培养基 M 在试管中 用表面和深度接种 如果在深度接种中而不表面接种中颜 色从红色变成黄色通常还会有气体的生成 有或没有硫化氢的形成 可以更加确定沙门氏菌的存在 可通过适 当的生化或血清学测试来更精确的确认此菌的存在 如果描述的菌落不存在或者确认性的生化或血清学测 试是阴性的 此产品通过试验 铜绿假单胞菌 按一般方法 2 6 12 中所描述的那样制备产品 用 10ml 或与 1ml 或 1g 相对应的量在 100ml 肉汤培养基 A 中培养 35 37 度培养 18 48h 次培养在琼脂培养基 N35 37 度培养 18 72h 如果没有检测到微生物的生长 产品通过测试 如果有革兰氏阴性杆菌生长 转移一些形态不同的物质 将菌落转移到肉汤培养基 A 中 41 43 度培养 18 24h 如果在 41 43 度未长出 则产品通过测试 当测试透皮缓释时 过滤如 2 6 12 方法制备的 A50ml 用无菌过滤膜 然后将其放在 100ml 肉汤培养基 A 中 35 37 度培养 18 48h 接种后 在琼脂培养基 N 上扩展 金黄色葡萄球菌 按一般方法 2 6 12 中所描述的那样制备产品 用 10ml 或与 1ml 或 1g 相对应的量在 100ml 肉汤培养基 A 中培养 35 37 度培养 18 48h 次培养在琼脂培养基 O35 37 度培养 18 72h 革兰氏阳性球菌黑色菌落由一 透明区域包围表明有金黄色葡萄球菌 可用如凝固酵素或脱氧核糖核酸酶进行恰当的生化测试进一步确定 如果描述的菌落未在琼脂培养基 O 上出现或确认生化测试是阴性的 则产品通过测试 当测试透皮缓释时 过滤如 2 6 12 方法制备的 A50ml 用无菌过滤膜 然后将其放在 100ml 肉汤培养基 A 中 35 37 度培养 18 48h 接种后 在琼脂培养基 O 上扩展 介质的营养及选择性质及测试的验证 从这以后进行的测试至少要在每一批无水的培养基上进行 按如下操作进行 分别进行如下测试 在包含适当介质的试管内进行 30 35 度培养 18 24h 小表 用 pH 7 0 缓冲氯化钠胨将培养物稀释成不同比例使测试的悬浮液每微升包含 1000 存活的微生物 将每个 悬浮液用相同的体积混合 用 0 4 ml 作为接种体在对金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 大肠杆菌 沙门氏菌的 测试中 看它们在产品中存在与否 还要有其它微生物测试的阳性结果 梭菌 下面描述的测试是用以不同的目的 第一种方法主要用于排除致病梭菌的结论上的而且有必要去测试它们是否存在 产品总体上可能数目较低 第二种方法用于产气荚膜梭菌的半定量测试同时也是产品定性的一个标准 1 梭菌的测试 如方法 2 6 12 中所说方法制备产品 取两个相对于 1g 或 1ml 量相当的两个相同比例的产品进行测试 将其中一个加热到 80 10 分钟 迅速冷却 另一个不要加热 将两个相同性质的产品转移出 10ml 到两 个容器中 38mm 200mm 或其它恰当的容器含有 100ml 介质 P 在无氧情况下培养 48h 35 37 在培 养后 用试管进行次培养 介质 Q 上已经加过庆大霉素 在无氧情况下培养 48h 35 37 如果没有检 测到有微生物生长 产品通过测试 如果有菌生长 在培养介质 Q 上次培养每个不同菌落 没有庆大霉素 且同时在有氧和无氧情况下培养 只有厌氧的革兰氏阳性菌 有或没有孢子内壁 生长使产生阴性的过氧化氢酶反应 表明有梭菌肠球菌 的存在 比较而言 如果必要的话 在两个板上的菌落形态且用过氧化氢酶测试去减少存活和特许厌氧 的芽孢杆菌 可使产生一个阳性的过氧化氢反应 这个测试可用于琼脂上的离散菌落或随后转移到玻璃 滑片上 用一滴稀释的过氧化氢溶液 产生气泡的话表明阳性过氧化物酶反应 2 产气荚膜梭菌的数目 如方法 2 6 12 中所说方法制备产品 在 PH7 0 的缓冲氯化胨溶液中制备 1 100 或 1 1000 的溶液 按照 2 6 12 中所说的总存活数确定最多的可能数目 在试管中用培养基 R 或其它适当容器用一个小的德拉姆 管 轻微振荡将其混匀 在 45 5 46 5 培养 24 48 小时 容器由于硫化铁变黑且在德拉姆管中生成了 气体 至少 1 10 体积 表明有产气荚膜梭菌的存在 用下表的方法估算出此菌的最多可能数量 表格 控制 用如下方法 小表 如果必要的话可联合此菌检查选择性及厌氧条件 下列段落因信息而出版 提到的溶液及培养基 下列的溶液及培养基可满足测试中按照药典对微生物污染方面的要求 如果它们对测试的微生物有相同 的营养或选择性质也可用其它培养基 PH7 0 的缓冲氯化胨溶液 磷酸二氢钾 3 6g 磷酸氢二钠 7 2g 氯化钠 4 3g 蛋白胨 肉或酪蛋白 1 0g 纯化水 1000ml 可向此溶液中加入表面活性剂或抗微生物的灭活剂 例如 聚山梨醇酯 80 1g l 通过在高压锅中加热 15min 121 灭菌 肉汤培养基 A 大豆蛋白消化肉汤 胰酶水解干酪素 17 0g 大豆粉木瓜酶消化物 3 0g 氯化钠 5 0g 磷酸二氢钾 2 5g 水合葡萄糖 2 5g 纯化水 1000ml 调节 PH 值这样在灭菌后 PH 为 7 3 0 2 通过在高压锅中加热 15min 121 灭菌 琼脂培养基 B 大豆蛋白消化琼脂 胰酶水解干酪素 15 0g 大豆粉木瓜酶消化物 5 0g 氯化钠 5 0g 琼脂 15 0g 纯化水 1000ml 调节 PH 值这样在灭菌后 PH 为 7 3 0 2 通过在高压锅中加热 15min 121 灭菌 琼脂培养基 C 含有抗生素的沙氏葡萄糖琼脂培养基 水合葡萄糖 40 0g 琼脂 15 0g 纯化水 1000ml 调节 PH 值这样在灭菌后 PH 为 5 6 0 2 通过在高压锅中加热 15min 121 灭菌 在使用之前 每升琼脂迅速加入 0 1g 青霉素钠 和 0 1g 四环素灭菌溶液或者用 0 05g 氯霉素代替 在灭 菌之前 琼脂培养基 D 水合乳糖肉汤 牛肉膏 3 0g 明胶胰腺消化物 5 0g 乳糖 5 0g 纯化水 1000ml 调节 PH 值这样在灭菌后 PH 为 6 9 0 2 通过在高压锅中加热 15min 121 灭菌 迅速冷却 富集肉汤培养基 E 肠道菌富足肉汤 明胶胰腺消化物 10 0g 水合葡萄糖 5 0g 脱水牛胆汁 20 0g 磷酸二氢钾 2 0g 磷酸氢二钠 8 0g 亮绿 15mg 纯化水 1000ml 调节 PH 值这样在加热后 PH 为 7 2 0 2 在 100 度加热三十分钟迅速冷却 琼脂培养基 F 结晶紫 中性红 含有葡萄糖的胆汗琼脂 酵母提取物 3 0g 明胶胰腺消化物 7 0g 胆汗盐 1 5g 水合乳糖 10 0g 氯化钠 5 0g 水合葡萄糖 10 0g 琼脂 15 0g 中性红 30mg 结晶紫 2mg 纯化水 1000ml 调节 PH 值这样在加热后 PH 为 7 4 0 2 加热至沸腾 不需在高压锅中加热 肉汤培养基 G 麦康凯肉汤 明胶胰腺消化物 20 0g 水合乳糖 10 0g 脱水牛胆汁 5 0g 溴甲酚紫 10mg 纯化水 1000ml 调节 PH 值这样在灭菌后 PH 为 7 3 0 2 通过在高压锅中加热 15min 121 灭菌 琼脂培养基 G 麦康凯琼脂 明胶胰腺消化物 17 0g 蛋白胨 肉或酪蛋白 3 0g 水合乳糖 10 0g 氯化钠 5 0g 胆汗盐 1 5g 琼脂 13 5g 中性红 30 0mg 结晶紫 1mg 纯化水 1000ml 调节 PH 值这样在加热后 PH 为 7 0 0 2 加热至沸腾 不需再加热 琼脂培养基 J 去氧胆酸柠檬酸琼脂 牛肉膏 10 0g 蛋白胨 肉或酪蛋白 10 0g 水合乳糖 10 0g 柠檬酸钠 20 0g 柠檬酸铁 1 0g 去氧胆酸钠 5 0g 琼脂 13 5g 中性红 20mg 纯化水 1000ml 调节 PH 值这样在灭菌后 PH 为 7 0 0 2 加热至沸腾一分钟 冷却到 50 度倒在 Petri 盘里 不需用高压 锅加热 琼脂培养基 K 木糖 赖氨酸 去氧胆汗酸琼脂 木糖 3 5g L 赖氨酸 5 0g 水合乳糖 7 5g 蔗糖 7 5g 氯化钠 5 0g 酵母提取物 3 0g 酚红 80mg 琼脂 13 5g 去氧胆汁酸钠 2 5g 硫代硫酸钠 6 8g 柠檬酸铁铵 0 8g 纯化水 1000ml 调节 PH 值这样在加热后 PH 为 7 4 0 2 加热至沸腾 冷却到 50 度倒在 Petri 盘里 不需用高压锅加热 琼脂培养基 L 亮绿 酚红 水合乳糖 蔗糖琼脂 蛋白胨 肉或酪蛋白 10 0g 酵母提取物 3 0g 氯化钠 5 0g 水合乳糖 10 0g 蔗糖 10 0g 琼脂 20 0g 酚红 80mg 亮绿 12 5mg 纯化水 1000ml 加热至沸腾 1 分钟 调节 PH 值灭菌后可达 6 9 0 2 使用前迅速用高压锅将其灭菌 15min 121 冷却 至 50 度倒 Petri 盘里 琼脂培养基 M 三糖铁琼脂 牛肉提取物 3 0g 酵母提取物 3 0g 蛋白胨 肉或酪蛋白 20 0g 氯化钠 5 0g 水合乳糖 10 0g 蔗糖 10 0g 水合葡萄糖 1 0g 柠檬酸铁铵 0 3g 硫代硫酸钠 0 3g 酚红 25mg 琼脂 12 0g 纯化水 1000ml 加热至沸腾 1 分钟并振荡 调节 PH 值灭菌后可达 7 4 0 2 将其重量的三分之一填入管内 用高压锅将 其灭菌 15min 121 在一个较深部位有倾斜表面的位置将其冷却 琼脂培养基 N 西曲溴铵琼脂 明胶胰腺消化物 20 0g 氯化镁 1 4g 硫酸钾 10 0g 西曲溴铵 0 3g 琼脂 13 6g 纯化水 1000ml 甘油 10 0g 加热至沸腾 1 分钟并振荡 调节 PH 值灭菌后可达 7 2 0 2 用高压锅将其灭菌 15min 121 琼脂培养基 O Baird Parker 琼脂 酪蛋白胰腺消化物 10 0g 牛肉提取物 5 0g 酵母提取物 1 0g 氯化锂 5 0g 琼脂 20 0g 甘氨酸 12 0g 丙酮酸钠 950ml 纯化水 1000ml 加热至沸腾 1 分钟并振荡 调节 PH 值灭菌后可达 6 8 0 2 用高压锅将其灭菌 15min 121 冷却到 45 50 度 并加入 10ml 碲酸钾溶液 10g l 和 50ml 蛋黄乳化剂 培养基 P 梭菌加强培养基 牛肉提取物 10 0g 蛋白胨 肉或酪蛋白 10 0g 酵母提取物 3 0g 可溶性淀粉 1 0g 水合葡萄糖 5 0g 盐酸半胱氨酸 0 5g 氯化钠 5 0g 乙酸钠 3 0g 琼脂 20 0g 纯化水 1000ml 将琼脂水合 加热溶解至沸腾