医学微生物学螺旋体

第21章 螺旋体 (spirochete),一类细长、柔软、弯曲呈螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物介于细菌与原虫之间，其基本特征同细菌,p198,名称 螺旋数 螺旋特点 举例,致病螺旋体的螺旋特点,密螺旋体 814 细密，规则； 两端尖直,疏螺旋体 310 不规则,苍白密螺旋体苍白亚种,钩端螺旋体 数十个 规则，更细密； 一端/两端呈钩状,问号状钩端螺旋体,回归热疏螺旋体 伯氏疏螺旋体,第一节 钩端螺旋体属 Leptospira,问号状钩端螺旋体(L.interrogans) 钩端螺旋体病 双曲钩端螺旋体(L.biflexa),螺旋体目钩端螺旋体科钩端螺旋体属,螺旋细密、规则，一端或两端呈钩状，故名，简称钩体。运动活泼，常呈C、S或8字型暗视野显微镜，形似细小珍珠排列的细链G-，不易着染，Fontana镀银染色法棕褐色,1.形态与染色,生物学性状,螺旋体基本结构,外膜、内鞭毛、细胞壁、肽聚糖、细胞膜（内膜）、原生质柱体（细胞质、原始核质）,营养要求复杂，常用含10兔血清的柯索夫（Korthof）培养基需氧或微需氧，适宜生长温度为2830，pH7.27.6，生长缓慢（8h一代），12周后 液体培养基：半透明云雾状 固体培养基：透明，不规则的扁平菌落,2.培养特性,属特异性抗原:糖蛋白或脂蛋白群特异性抗原:菌体内部，类脂多糖复合物型特异性抗原:表面抗原，多糖蛋白复合物 应用显微镜凝集试验（microscopic agglutination test ，MAT）和凝集素吸收试验(agglutination absorption test， AAT)来分血清群和血清型。我国至少发现有问号状螺旋体参考株有19血清群75血清型,3.抗原与分类,4.抵抗力弱,不耐热，6010分钟即死亡对常用消毒剂敏感夏季在湿土或中性水中可存活数月对青霉素敏感,致病性,致病物质-类似细菌内毒素与外毒素,内毒素样物质(ELS)：毒性低，引起发热， 炎症与组织坏死 黏附素：溶血毒素：鞘磷脂酶C，引起红细胞破坏胶原酶：,传播方式,鼠、猪（储存宿主）传染源,肾脏繁殖（隐性感染）,尿排菌,污染水源、土壤,人的皮肤、黏膜、消化道、垂直接触而感染,所致疾病,钩端螺旋体病（钩体病）,人畜共患传染病,致病性钩体穿透侵入皮肤粘膜，在局部繁殖后入血，引起钩体血症，产生致病物质，损伤全身毛细血管内皮细胞及肝、肾、肺心及中枢神经，引起钩端螺旋体病，出现休克、DIC、黄疸、出血、心肾功能不全、脑膜炎等。临床上根据脏器损伤的不同可分为流感伤寒型、肺出血型、黄疸出血型、肾衰竭型等,临床特点 起病急，高热、乏力、全身酸痛、结膜充血、腓肠肌压痛、表浅淋巴结肿大；三大症状：发热、头痛、一身乏 三大体征：眼红、腿疼、淋巴大免疫性 体液免疫为主，病后获得对同型钩体的持久免疫力。但抗体对肾脏中钩端螺旋体吴无作用,微生物学检查法,1.病原体检测标本: 发病一周内取血液; 第二周后取尿液; 有脑膜刺激者取脑脊液直接镜检：暗视野或镀银染色分离培养与鉴定:Korthof培养基培养，MAT和AAT 动物接种：幼龄豚鼠或金地鼠腹腔分子生物学方法：PCR,2.血清学检测,病初和发病后23周各采血清一次 方法:显微镜凝集试验(MAT) 间接凝集试验,防治原则,非特异性预防： 防鼠、灭鼠，加强对带菌家畜的管理，保护水源特异性预防： 接种多价钩端螺旋体死疫苗（包 含当地流行株）治疗: 首选青霉素，注意赫氏反应。,第二节 密螺旋体属 (Treponema),苍白亚种：人类梅毒(syphilis)地方亚种：地方性梅毒极细亚种：雅司病,苍白密螺旋体品他密螺旋体,品他病,分为致病与非致病两大类，对人致病的有：,梅毒螺旋体 （Treponema pallidum，TP),螺旋体细长，形似细密的弹簧，螺旋弯曲而规则，814个，两端尖直，运动活泼G-，因其透明，不易着色，故又称苍白螺旋体 Fontana镀银染色法染成棕褐色,生物学性状 形态与染色,目前在人工培养基上尚不能培养。接种兔睾丸或眼前房，兔睾丸活体，家兔上皮细胞培养，但生长缓慢，约30h分裂一次。两种菌株：用作梅毒血清学的诊断抗原 Nichols株(Nichols strain): 有毒力， 在家兔睾丸或眼前房内接种可获得 Reiter株(Reiter strain): 失去致病力， 转种于含有多种氨基酸的兔睾丸碎片，,培养特性,抵抗力极弱,对温度和干燥特别敏感在血液中4C经3d死亡对常用化学消毒剂亦敏感，1%2%石炭酸内数分钟就死亡对青霉素、四环素、红霉素或砷剂均敏感,致病性,致病因素 目前尚不清楚，有较强的侵袭力：荚膜样物质，黏附因子，透明质酸酶 所致疾病梅毒 梅毒只感染人类 先天梅毒 母体胎盘胎儿 后天梅毒 95%是性接触传播，少数通过输血 等间接途径感染。,先天梅毒（胎传梅毒）,梅毒孕妇通过胎盘传给胎儿，引起胎儿的全身性感染，导致流产、早产或死胎出生后为梅毒儿，呈现马鞍鼻、锯齿形牙、间质性角膜炎、先天性耳聋等特殊体征,后天梅毒（获得性梅毒） 分三期,I期梅毒：多见外生殖器，出现无痛性、直径约1cm的硬性下疳，含有大量梅毒螺旋体。48周后，下疳自然愈合。经23个月无症状潜伏期后进入第 II 期,特点：传染性极强，破坏性小,II期梅毒,全身皮肤黏膜出现梅毒疹，周身淋巴结肿大。梅毒疹、淋巴结肿大内有大量梅毒螺旋体。不经治疗一般在13个月后症状自然消退而痊愈，但常复发。经24年，又可被激活进入第期。,特点：感染性强，破坏性小。,期（晚期）梅毒,感染梅毒2年（亦可达1015年）后，可侵犯全身组织和器官，出现慢性肉芽肿病变。以心血管梅毒和神经梅毒常见，出现梅毒瘤、动脉瘤、脊髓痨。,特点：感染性小，破坏性大,免疫性,属有菌免疫，传染性免疫；细胞免疫为主，体液免疫为辅；梅毒患者的血清中出现两种抗体： 1. 抗螺旋体抗体： 2. 心脂质抗体：又称反应素（reagin） 能与生物组织中的类脂抗原（如牛心肌）发生非特异性结合反应，可利用其进行血清学诊断。,微生物学检查法,1.标本期梅毒-硬下疳渗出液期梅毒-梅毒疹渗出液或局部淋巴结抽出液 血清2.显微镜检查：暗视野、镀银染色、荧光染色3.血清学诊断,非密螺旋体抗原试验：测非特异性抗体用正常牛心肌的心脂质(抗原)检测患者血清中的反应素方法:RPR试验（rapid plasma reagin,快速血浆反应素）TRUST试验 (tolulized red unheated serum test甲苯胺红未加热血清学试验) VDRL试验（venereal disease research laboratory，性病研究实验室）意义：适用于梅毒的初筛试验注意排除假阳性：回归热、结核、红斑狼疮等,3.血清学诊断,密螺旋体抗原试验 Nichols株螺旋体（抗原）螺旋体特异抗体 优点：特异性强，可用作梅毒确诊试验 常用方法： 梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA） 荧光密螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）、 梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）、 梅毒螺旋体微量血凝试验（MHA-TP） ELISA 免疫印迹法,防治原则,加强性卫生教育和严格社会管理尚无疫苗预防治疗用青霉素等药物，以血清中抗体转阴为治愈指标,第三节 疏螺旋体属（Borrelia）,伯氏疏螺旋体(B.burgdorferi),回归热疏螺旋体（B.recurrentis),对人致病的有：,伯氏疏螺旋体 (B.burgdorferi),莱姆病（Lyme）的病原体,（一）形态染色 螺旋稀疏两端稍尖，38个螺旋，运动活泼，运动活跃。Giemsa或Wright染色均佳,一、生物学性状,Wright染色,（二）培养特性营养要求高微需氧，510CO2促进生长， 可用BSK培养基培养。生长缓慢， 1218h繁殖一代。培养23周，长出细小而边缘整齐的小菌落。（三）抗原： 外膜表面蛋白（outer surface protein，Osp），具有高度免疫原性，种特异性,所致疾病：莱姆病,自然疫源性传染病储存宿主：野生和驯养的哺乳动物传播媒介：硬蜱，我国北方林区主要是全沟硬蜱叮咬部位可出现一个或数个慢性移行性红斑(ECM)，伴有乏力、头痛、发热、颈硬及关节炎等。晚期主要表现为慢性关节炎、慢性神经系统或皮肤异常,硬蜱,硬蜱,慢性移行性红斑(ECM),以血清学试验和分子生物学方法来检测1）血清学试验：取血清，ELISA和IFA2）分子生物学：取皮损、血液等，PCR,三、微生物学检查法,预防：1）疫区人员加强个人防护，避免硬蜱的叮咬。2）灭活疫苗于1992年获准在美国家犬中使用。人用重组蛋白疫苗（OspA、OspC）正在临床试验中治疗：1）早期莱姆病可口服四环素、强力霉素、羟氨苄青霉素及红霉素等。2）晚期莱姆病由于多种深部组织损害，故一般用青霉素联合头孢三嗪等静脉滴注。,四、防治原则,引起人类回归热的病原体。根据回归热传播媒介不同，分为两类： 1）虱传回归热，或称流行性回归热，其病原体为回归热疏螺旋体； 2）蜱传回归热，又称地方性回归热，其病原体多至15种，如赫姆疏螺旋体。我国流行的回归热主要是虱传型。,二、回归热疏螺旋体,致病性致病过程： 经310天潜伏期，病人突发高热，持续3天退热；由于螺旋体外膜蛋白易变异，约一周后有出现高热，如此反复发作310次左右。,微生物检查1）取发热期外周血1滴，加盖玻片用暗视野显微镜观察，可见运动活泼螺旋体。 2）取发热期外周血1滴，直接涂片后进行Giemsa或Wright染色，光镜下见为红细胞直径的24倍，螺旋稀疏不规则，呈波状的螺旋体,Wright染色,致病螺旋体的分类,属和代表菌 引起人类疾病 传播方式或媒介,密螺旋体属（Treponema） 苍白密螺旋体苍白亚种 梅毒 性传播 苍白密螺旋体地方亚种 地方性梅毒 黏膜损伤 苍白密螺旋体极细亚种 雅司病 皮肤损伤 品他密螺旋体 品他病 皮肤损伤疏螺旋体属（Borrelia） 伯氏疏螺旋体 莱姆病 硬蜱 回归热疏螺旋体 流行性回归热 体虱 杜通疏螺旋体 地方性回归热 软蜱 奋森疏螺旋体 咽峡炎、牙龈炎 条件致病钩端螺旋体属（Leptospira） 问号状钩端螺旋体 钩端螺旋体病 接触疫水,分3个科13个属,思考题,1.能引起人致病的螺旋体有哪些属及代表种？2.简述钩端螺旋体的生物学性状（形态染色、培养、抗原分类）及致病性。3.简述梅毒螺旋体的致病性、免疫性及微生物检查法 。 4.名词解释：螺旋体（spiroc