霉菌和酵母菌检测

霉菌和酵母菌检测霉菌和酵母菌检测 1 设备和材料设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外 其他设备和材料如下 1 1 冰箱 2 5 1 2 恒温培养箱 28 1 1 3 均质器 1 4 恒温振荡器 1 5 显微镜 10 100 1 6 电子天平 感量0 1g 1 7 无菌锥形瓶 容量500ml 250ml 1 8 无菌广口瓶 500ml 1 9 无菌吸管 1ml 具0 01ml刻度 10ml 具0 1ml刻度 1 10 无菌平皿 直径90mm 1 11 无菌试管 10mm 75mm 1 12 无菌牛皮纸袋 塑料袋 2 培养基和试剂培养基和试剂 2 1 马铃薯 葡萄糖 琼脂培养基 见附录 A 中 A 1 2 2 孟加拉红培养基 见附录 A 中 A 2 3 操作方法操作方法 3 1 试验前准备 3 1 1 将供试品及所有已灭菌的平皿 锥形瓶 匀浆杯 试管 量筒 吸管 1ml 10ml 稀释剂等移至操作室内 准备好足够用量 避免操作中出入操作间 3 1 2 开启无菌室紫外杀菌灯和洁净工作台的空气过滤装置 30min 3 1 3 操作人员用肥皂洗手 关闭紫外杀菌灯 进入缓冲间 换工作鞋 用消毒液洗手 或用乙醇棉球擦手 穿戴好无菌衣 帽 口罩 手套等 3 1 4 操作前先用乙醇棉球擦手 工作台面 再用乙醇棉球擦拭供试品瓶 盒 袋等的 开口处周围 待干后用灭菌剪刀或镊子将供试品启封 3 2 样品稀释液的制备 2 5 根据供试品的理化特性与生物学特性 采取适宜的方法制备样品稀释液 样品稀 释液制备若需用水浴加温时 温度不应超过 45 样品稀释液从制备至加入检验用培 养基 不得超过 1 小时 3 2 1 固体和半固体样品 称取25g样品至盛有225ml灭菌蒸馏水的锥形瓶中 充分振摇 即为1 10稀释液 或放入盛有225ml无菌蒸馏水的均质袋中 用拍击式均质器拍打2min 制成1 10的样品 匀液 3 2 2 液体样品 以无菌吸管吸取25ml样品至盛有225ml无菌蒸馏水的锥形瓶 可在瓶内预置适当数 量的无菌玻璃珠 中 充分混匀 制成1 10的样品匀液 3 3 霉菌和酵母菌计数 3 3 1 用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1 10样品匀液1ml 沿管壁缓慢注于盛有9ml 稀 释液的无菌试管中 注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面 振摇试管或换用1支无 菌吸管反复吹打使其混合均匀 制成1 100的样品匀液 3 3 2 按3 3 1操作程序 制备10倍系列稀释样品匀液 每递增稀释一次 换用1次1ml 无菌吸管或吸头 3 3 3 根据对样品污染状况的估计 选择2个 3个适宜稀释度的样品匀液 液体样品可 包括原液 在进行10倍递增稀释时 吸取1ml样品匀液于无菌平皿内 每个稀释度做 两个平皿 同时 分别吸取1ml空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照 3 3 4 及时将15ml 20ml冷却至46 的马铃薯 葡萄糖 琼脂培养基或孟加拉红培养基 可放置于46 1 恒温水浴箱中保温 倾注平皿 并转动平皿使其混合均匀 3 4 培养 待琼脂凝固后 将平板翻转 28 1 培养5d 观察并记录 3 5 菌落计数 肉眼观察 必要时可用放大镜 记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母数 以菌落 形成单位 colony forming units CFU 表示 选取菌落数在10CFU 150CFU的平板 根据菌落形态分别计数霉菌和酵母数 霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为多不可 计 菌落数应采用两个平板的平均数 3 6 结果与报告 3 5 3 6 1 计算两个平板菌落数的平均值 再将平均值乘以相应稀释倍数计算 3 6 1 1 若所有平板上菌落数均大于150CFU 则对稀释度最高的平板进行计数 其他平 板可记录为多不可计 结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算 3 6 1 2 若所有平板上菌落数均小于10CFU 则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释 倍数计算 3 6 1 3 若所有稀释度平板均无菌落生长 则以小于1乘以最低稀释倍数计算 如为原液 则以小于1计数 3 6 2 报告 菌落数在100以内时 按 四舍五入 原则修约 采用两位有效数字报告 菌落数大于或等于100时 前3位数字采用 四舍五入 原则修约后 取前2位数字 后面用0代替位数来表示结果 也可用10的指数形式来表示 此时也按 四舍五入 原 则修约 采用两位有效数字 称重取样以CFU g为单位报告 体积取样以CFU ml为单位报告 报告或分别报告 霉菌和 或酵母数 4 5 附录 培养基和试剂 1 马铃薯 葡萄糖 琼脂培养基 1 1 成分 马铃薯 去皮切块 300g 葡萄糖 20 0g 琼脂 20 0g 氯霉素 0 1g 蒸馏水 1000ml 1 2 制法 将马铃薯去皮切块 加1000ml蒸馏水 煮沸10min 20min 用纱布过滤 补加蒸馏水 至1000ml 加入葡萄糖和琼脂 加热溶化 分装后 121 灭菌20min 倾注平板前 用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中 2 孟加拉红培养基 2 1 成分 蛋白胨 5 0g 葡萄糖 10 0g 磷酸二氢钾1 0g 硫酸镁 无水 0 5g 琼脂 20 0g 孟加拉红 0 033g 氯霉素 0 1g 蒸馏水 1000ml 2 2 制法 上述各成分加入蒸馏水中 加热溶