MM_FS_CNJ_0277 出口粮谷及油籽中烯菌酮残留量检验方法.DOC

MM_FS_CNJ_0277出口粮谷 油籽 烯菌酮 残留量 气相色谱法 外标法定量MM_FS_CNJ_0277出口粮谷及油籽中烯菌酮残留量检验方法1.范围本方法适用于出口糙米、玉米、大豆、花生仁中烯菌酮残留量的检验。2.原理概要试样中残留的烯菌酮采用石油醚提取，提取液经乙腈反提取后，用硅胶层析柱净化，再以氯乙酰氯衍生化，用配有电子俘获检测器的气相色谱仪测定，外标法定量。3.主要试剂和仪器3.1.主要试剂石油醚：重蒸馏；乙腈：重蒸馏；丙酮；氯乙酰氯溶液：20(V/V)，取20mL氯乙酰氯溶于80mL石油醚中，混匀后，避光低温保存；无水硫酸钠：650灼烧4h，冷却后贮于密封容器中备用；硅胶：层析用，100200 目，用前在120活化3h，冷却后贮于密封容器中备用；烯菌酮标准品：纯度99%；烯菌酮标准溶液：准确称取适量烯菌酮标准品，用少量石油醚溶解，并以石油醚配制成浓度为0.100mg/mL的标准储备液。根据需要再以石油醚稀释成适当浓度的标准工作溶液。3.2.仪器气相色谱仪：配有电子俘获检测器；振荡器；旋转蒸发器；恒温水浴锅；超声波发生器；玻璃净化柱：25cm1.5cm(id)，自下而上依次填装2cm高无水硫酸钠、15g硅胶、2cm高无水硫酸钠。使用前用50mL石油醚预淋洗；微量注射器：10L。4.试样的抽取与制备4.1.检验批以不超过200t为一检验批。200t袋装糙米约4000袋；袋装玉米或大豆约2200袋；袋装花生仁约2400袋。玉米或大豆有时为散装品。同一检验批的商品应具有相同特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。4.2.抽样数量4.2.1.袋装货品按式(1)计算抽样袋数：a(1)式中：N 全批袋数；a 抽样袋数。注：a值取整数，小数部分向前进位为整数。4.2.2.散积货品(玉米或大豆)货堆高度不超过2m。按货堆面积划区设点。以50m2为一个取样区，每区设中心及四角(距边线1m处)5个点。每增加一个取样区，增设3个点。4.3.抽样工具金属单管取样器：全长55cm(包括手柄)，直径1.52.0cm，沟槽长度应超过袋对角线长度的一半；金属双套管取样器：全长分1m、2m(均包括手柄)两种。内、外管同部位分段开几个槽口，每个槽口长1520cm，口宽2.02.5cm。内管的内径为2.53.0cm；取样器的探头长约7cm；取样铲或取样勺；分样板；盛样器：筒或袋，可密封；分样布或适用铺垫物。4.4.抽样方法4.4.1.袋装抽样倒包抽样：从堆垛的各部位随机抽取4.2.1规定的应抽样袋数的10%(每批一般不少于3袋)，将袋口缝线全部拆开，平置于分样布或其他洁净的铺垫物上，双手紧握袋底两角，提起约成45倾角，倒拖约1m，使袋内货物全部倒出。查看袋内和袋间品质是否均匀。确认情况正常后，用取样铲随机在各部位抽取样品，并立即将样品倒入盛样器内。每袋抽取样品的数量应基本一致。袋内抽样：按4.2.1规定的应抽样袋数(扣除倒包抽样袋数)。在堆垛四周的上、中、下各层以曲线形走向随机抽取。然后按糙米、玉米、大豆、花生仁，用下述方法进行取样：对糙米，用金属单管取样器槽口朝下，从每袋一角依斜对角方向插入袋内，然后将管槽旋转朝上，抽出取样器，立即将样品倒入盛样器内。对玉米或大豆，用1m长的金属双套管取样器，关闭槽口，从每袋一角依斜对角方向插入袋内，然后旋转内管以开启槽口，待样品流满内管后，再旋转内管以关闭槽口。抽出取样器，立即将样品倒入盛样器内。对花生仁，将应抽各袋拆开袋口缝线35针，用取样勺从开口处抽取样品。立即缝好袋口，并将所取样品倒入盛样器内。每袋抽取样品的数量应与4.4.1.1基本一致。每批所抽取的样品总量应不少于4kg。4.4.2.散积抽样：按4.2.2规定的取样点，逐点抽取样品。将取样器槽口关闭，以倾斜45角度插入货堆至相应深度，旋转取样器内管以开启槽口，待样品流满内管后，再旋转内管以关闭槽口。抽出取样器，立即将样品倒入盛样器内。从各点所抽取样品的数量应基本一致。每批所抽取的样品总量应不少于4kg。4.4.3.大样缩分袋装样品：合并从倒包和袋内抽样所取全部样品，倒于分样布上，用分样板按四分法缩分样品至不少于2kg，倒入盛样器内，加封后标明标记，并及时送交实验室。散积样品：将抽取的全部样品，倒于分样布上，以下按上述袋装样品方法进行。4.5.试样制备4.5.1.制样工具磨碎机；粉碎机；筛子：20 目筛，2.0mm圆孔筛；分样板；盛样瓶：具塞广口瓶。4.5.2.制样方法糙米、玉米或大豆试样制备：将样品按四分法缩分至1kg，用磨碎机(4.5.1.1)全部磨碎并通过20 目筛，混匀，均分成两份作为试样，分装入洁净的盛样器内，密封，标明标记。花生仁试样制备：将样品按四分法缩分至500g，用样品粉碎机(4.5.1.2)粉碎，使全部通过2.0mm圆孔筛。混匀，均分成两份作为试样，分装于洁净的盛样器内。密闭，标明标记。4.6.试样保存将试样于5以下避光保存。注：在抽样及制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。5.过程简述5.1.提取称取试样约20g(精确至0.1g)，置于250mL具塞锥形瓶中。加入50mL石油醚，振荡提取30min。将提取液过滤于250mL分液漏斗中，并用50mL石油醚分两次洗涤残渣，过滤，合并滤液于上述分液漏斗中。5.2.净化加入50mL乙腈于上述分液漏斗中，振摇1min，静置10min。收集下层乙腈相，上层石油醚相再分别用250mL乙腈提取。合并乙腈相于梨形瓶中，于低于40水浴中用旋转蒸发器浓缩至近干，用15mL石油醚分三次超声波振荡溶解残渣。并将溶解液倾入玻璃净化柱中，用150mL石油醚淋洗，弃去流出液，再加入100mL丙酮-石油醚(595)混合液洗脱，收集洗脱液于梨形瓶中，于低于40水浴中用旋转蒸发器浓缩至干。5.3.衍生化用20mL石油醚超声波溶解残渣，加入 0.5mL氯乙酰氯溶液，加塞后，于室温下避光放置30min，放置期间进行断续轻摇。反应结束后，于低于40水浴中用旋转蒸发器浓缩至干。加入50mL石油醚以溶解残渣，于低于40水浴中用旋转蒸发器浓缩至干。准确加入10.0mL石油醚以溶解残渣，溶液供气相色谱测定。5.4.标准物衍生化准确移取10.0mL适当浓度的烯菌酮标准工作溶液于具塞试管中，用氮气吹干，按5.3操作进行衍生化后，供气相色谱测定。5.5.测定5.5.1.色谱条件色谱柱：填充柱3m3.2mm(id)，填充物为10%(m/m)SE-30涂于Chromosorb W AW-DMCS(80100 目)；色谱柱温度：185；进样口温度：260；检测器温度：260；载气：氮气，纯度99.99%，40mL/min；进样量：1L。5.5.2.色谱测定根据样液中被测农药含量情况，选定浓度相近的标准工作液。标准工作液和待测样液中农药的响应值均应在仪器检测的线性范围内。对衍生比的标准工作液与样液应等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，烯菌酮氯乙酰化物的保留时间约为6.6min。5.6.空白试验除不加试样外，均按上述测定步骤进行。6.结果计算用色谱数据处理机或按式(2)计算试样中烯菌酮残留含量：XhcV(2)hsm式中：X 试样中烯菌酮残留含量，mg/kg；h 样液中烯菌酮氯乙酰化衍生物的色谱峰高，mm；hs 标准工作液中烯菌酮氯乙酰化衍生物的色谱峰高，mm；c 标准工作液中烯菌酮的浓度，g/mL；V 样液最终定容体积，mL；m 最终样液所代表的试样量，g。注：计算结果需将空白值扣除。7.低限、回收率的测定7.1.低限本方法的测定低限为0.020mg/kg。7.2.回收率7.2.1.糙米中烯菌酮的回收率实验数据：烯菌酮添加浓度在0.020mg/kg时，回收率为96.2%；烯菌酮添加浓度在0.050mg/kg时，回收率为92.1%；烯菌酮添加浓度在0.200mg/kg时，回收率为89.0%。7.2.2.玉米中烯菌酮的回收率实验数据：烯菌酮添加浓度在0.020mg/kg时，回收率为92.7%；烯菌酮添加浓度在0.050mg/kg时，回收率为96.3%；烯菌酮添加浓度在0.200mg/kg时，回收率为93.5%。7.2.3.大豆中烯菌酮的回收率实验数据：烯菌酮添加浓度在0.020mg/kg时，回收率为89.2%；烯菌酮添加浓度在