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文档简介

外 文 翻 译题 目: 番茄果实品质育种的研究进展 番茄果实发育过程中碳水化合物含量分析摘要:对番茄品种在果实代谢过程中的碳水化合物进行了研究,结果表明果皮和胎座组织的新陈代谢是不同的,淀粉在胎座中的发育相比果皮更慢,而可溶性糖在果皮上有了更多的积累。糖酵解酶活性的峰值倾向于开花后40天。其中磷酸烯醇丙酮酸磷酸酶和丙酮酸激酶在这个峰值前活动剧增。可能在呼吸跃变期间指示作用使糖酵解上调导致ATP的增加。对质体转运蛋白酶的表达进行研究,在未成熟的果实中,磷酸丙糖运输酶 和葡萄糖-6-磷酸,都在衰退期之前进行了强烈的表达。磷酸丙糖的转运比葡萄糖-6-磷酸的转运表达要强烈。ATP / ADP的运输是整个水果发育过程中的一种低表达。引言:番茄已有利用植物转基因重组DNA技术(Sheehy等人在1988年Smith等人在1988年)。它可能因此预期将成为一个研究植物生物学的许多方面的模型系统。虽然有一些研究番茄中碳水化合物利用了分子生物学代谢技术(Ohyama等人在1995年、1996年,Klann等人在1999年,Chengappa等人在1999年。DAoust和al - Nguyen机构等在1999年。)近年来其他物种,如拟南芥和马铃薯也有了更广泛的应用。造成这一现象的原因是马铃薯产生一个大的商业上重要作用的贮藏器官,而拟南芥具有较短的生命周期和一个完整的基因组序列。番茄因其自身的特点,它产生了一个在叶子和贮藏器官的新陈代谢分属不同方面而相互结合的果实。因此叶子的光合作用的能力,不一定依赖引入碳的增长。另一方面贮藏器官碳的来源依赖于叶子中经由韧皮部的蔗糖。番茄果实最初含有叶绿体中活跃的光合有效辐射,但是在成熟过程中他们和非光合作用的有色体是有区别的。因此至少在最初可以解决自身的碳需求,但是他们也导入韧皮部的蔗糖。这意味着在成熟过程中,一定程度上直接以果实内部的光合作用而供应的碳的来源改变了,果实变得完全依赖于韧皮部蔗糖的摄取。由于这种转换,在果实发育过程中酶的活性包括蔗糖代谢也在成熟过程中转换了(Schaffer和Petreikov在1997年)。酶在其他方面的新陈代谢也有望包含在内,比如涉及到糖酵解,也可能被改变;然而这无法了解,因为他们中的大多数在番茄果实发育的不同时间点上还没有被测量。这些番茄果实新陈代谢时的环境因素并没有集中地研究的一个原因,是因为大果型的植物及其生命周期相对较长。然而,最近一个新的品种(小型番茄)的开发,克服了这些问题(Meissner等,1997)。这个品系的番茄长到类似拟南芥的大小而且与其他番茄品种相比有较短的生命周期,通常生产的种子在12周内被种植。将来我们想研究小型番茄这个品种番茄果实的碳水化合物代谢,将通过利用基因工程技术的方法来压制特定酶的活动。作为一个初始的研究,我们决定在发育期间研究未转换的水果中酶的活性,来理解之前的研究中是否这个新品种等同于其他品种。另外我们决定检验基因编码的一些特殊的表达,质体转运蛋白在细胞质和质体之间协调碳代谢被认为是至关重要的。最后我们希望研究此前在其他番茄品种中未被测量的糖酵解酶的的活动来检查这些改变是否在水果发育过程中,此外, 这也许会给予水果成熟中碳的作用提供新的见解。材料和方法种植材料和生长Micro番茄由Avraham Levy教授(以色列雷霍沃特魏兹曼科学研究所)惠赠。植物在温室中生长(16 小时光照约250 mmol photonsm_/s,8小时黑暗)温度介于20到24摄氏度,相对湿度60-70%。单个花在开花期随着发育过程中果实的开花时间被精确的标记,每株植物仅允许生长六个果实。果实都是每隔5天在开花之后20-60天的情况下被收割,这包含了从绿果期到完熟的红色水果。收获的果实用解剖刀片垂直地切成两半,并且果皮与胎座分离。胎座在发育中的种子和果胶中被进一步分离,果皮和胎座组织均分别被冻结液态氮中。所有的样品在使用前均保持在摄氏零下80度的环境中。淀粉和可溶性糖的分析植物材料在液态氮中用研磨杵和研钵研磨成粉末。Stitt等人在1989年在80%的酒精的作用下萃取了葡萄糖、果糖和蔗糖。淀粉在0.2摩尔的氢氧化钾中发生水解作用时被测量,随后用市售的工具与11摩尔醋酸发生中和反应(德国曼海姆罗氏公司),利用分光光度法对葡萄糖进行测定。提取可溶性蛋白质酶活性测定植物材料在液态氮中用研磨杵和研钵研磨成细小的粉末。两倍于萃取的缓冲溶液,加入重量相当于样品的量,并将缓冲溶液,粉末和样品一起混合。2800g的样品在4摄氏度下用离心机分离15分钟,获得上层清液。这已脱盐的用NAP-5型号的培器培养(德国埃

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