应用微生物法试剂盒检测奶粉中维生素B6的含量.doc

描述：目的 建立应用微生物法试剂盒检测奶粉中维生素B6含量的分析方法。 方法 采用维生素B6微生物检测试剂盒定量检测奶粉中添加维生素B6的含量。 结果 维生素B6的线性范围为0.0020.012 mg/1.摘要目的建立应用微生物法试剂盒检测奶粉中维生素B6含量的分析方法。方法采用维生素B6微生物检测试剂盒定量检测奶粉中添加维生素B6的含量。结果维生素B6的线性范围为0.0020.012mg/100g（ml），检出限为0.002mg/100g（ml），其标准曲线的相关系数为0.9987，相对标准偏差均8000g下离心5min。根据维生素B6的浓度范围，在1.5ml无菌离心管中应用无菌水对上清液进一步稀释成100倍或以上，使测定OD值在标准曲线范围内。1.5检测步骤取出所需数量的微孔板条并在板上固定，依次将150l维生素B6检测培养基、150l标准品或样品稀释液加入微孔中，用黏合箔盖住微孔条或微孔。在30培养箱中避光孵育4448h。再次向下挤压黏合箔，将微孔板向上放置在桌面上，在桌面平面上振荡，使微生物溶解在培养基中。小心揭开黏合箔，用移液枪头破坏微孔液体表面所有的泡沫。用酶标仪在620nm条件下测量浑浊度。1.6结果计算应用医学毕业论文4参数法进行结果计算。4参数法是指用含有4个参数的方程表示因变量（Y）随自变量（X）变化的规律。目前最常用于免疫检测领域，用于描述吸光度随抗原浓度变化的规律，四参数模式为Y=D+（A-D）/1+（X/C）B。2结果2.1标准曲线的绘制分别移取维生素B6的标准品浓缩液（试剂盒自带）按比例稀释成标准系列浓度分别为0.002、0.004、0.006、0.008、0.012mg/100g。以标准系列中的维生素B6浓度为横坐标，酶标仪的测量OD值为纵坐标绘制维生素B6的标准曲线（图1）。4参数曲线法线性回归方程为Y=-0.0127630+（1.53036286+0.01227630）/1+（X/0.00659779）（-1.45519092），其相关系数为0.9987。图1维生素B6的标准曲线2.2方法的精密度分析将进行样品处理的4种不同的奶粉样品分别进行6次维生素B6测定，得出不同样品的相对标准偏差（RSD）值（表1）。表1精密度分析（n=6）2.3方法的加标回收率将两种不同的奶粉样品，分别加入质量浓度为10、25、50mg/100ml的维生素B6标准溶液各10l，再按样品处理的步骤进行处理，然后平行测定6次，得到不同样品的加标回收率（表2）。表2加标回收试验（n=6）3讨论由于维生素B6是水溶性维生素，在高温、光线直射、空气暴露等环境条件下，会部分降解损失，故在样品提取操作过程中，要尽可能在避光条件下操作，标准溶液应在冷藏、避光条件下保存并尽快分析。含样品的微孔板在30培养箱中避光孵育后，将其放于28冰箱保存，分别于24、48、72h取微孔板用酶标仪在620nm条件下测量浑浊度，结果显示48h内微孔板中的维生素B6性质稳定。加入微孔中的样品提取液，样品稀释液用水，以及实验中需要的其他耗材都必须无菌。样品无菌提取后，也必须在无菌环境中进行操作。要保证黏合膜和微孔的封闭性，特别注意微孔的边缘部分，防止样品液在振荡过程中相互混合影响测量结果。检测样品前要估算样品中维生素B6的含量进行稀释，稀释过程要准确，样品的测量OD值在标准曲线中部的结果可信度较高。微生物法测定维生素B6的含量近50年来虽然已被广泛地纳入各类国际标准方法中，但在我国应用却很少。微生物法操作繁琐、实验周期长，与目前分析方法简便、快速、高效的发展方向所不符。因此，微生物检测试剂盒通过优化样品处理、试剂配制、反应条件，省略了菌种保存及种子培养液的制备，能有效地简化实验步骤，排除实验过程中的各种干扰，从而达到节省实验时间、减轻工作量，进而得到准确的定量结果的