《血细胞直方图》PPT课件

血细胞直方图 检验科马燕 血细胞计数原理 一 电阻抗法库尔特原理 亦称 电阻法 电脉冲法与电感应区技术 悬浮在电解液中的颗粒随电解液通过小孔管时 取代相同体积的电解液 在恒电流设计的电路中导致小孔管内外两电极间电阻发生瞬时变化 产生电位脉冲 脉冲信号的大小和次数与颗粒的大小和数目成正比 与等渗电解质溶液相比 血细胞为不良导体 血细胞电阻值 稀释液的电阻值血细胞通过检测器小孔管微孔的孔径感受器区时 检测器内外电极之间的恒流源电路上电阻值瞬间增大 产生一个电压脉冲信号 脉冲信号数 细胞数 小孔管 电阻抗法细胞计数的一个重要组成部分 当电流接通 位于小孔两侧的电极产生恒定电流 若供给的阻抗是稳定的 则小孔的电压不变 当有一个细胞通过小孔时 电阻会增加 瞬间引起电压变化 即 通过脉冲 细胞体积越大 脉冲振幅越高 细胞数量越多 脉冲数量越多 各种大小不同细胞产生的脉冲信号分别送入仪器内电脑的各个通道 运算出各种细胞参数 细胞群体大小分布情况的图形 就成为 细胞体积直方图 脉冲信号经过以下步骤 得出细胞计数 信号发生 各种微粒通过检测小孔时 信号发生器 产生脉冲信号放大 将血细胞产生的微弱脉冲信号 通过 放大器 放大阈值调节 阈值调节器 在一定范围内调节参考电平的大小 能区分不同群细胞合适的信号电平 使计数结果尽可能符合实际甄别 利用 甄别器 根据阈值调节器提供的参考电平 将低于参考电平的假信号 细胞碎片 杂质微粒 去掉整形 通过 整形器 将脉冲信号波形修整成一致标准的平顶波 显示为不同类群的细胞数计数 经过以上步骤偶 进入 计数系统 得出结果电阻抗法可精确测出细胞 或类似颗粒 大小 是三分类的主要应用原理 也与光学检测原理 共同应用于五分类血细胞分析仪中 仪器将每个细胞的脉冲根据其体积大小分配并储存在相应体积通道中 每个通道收集的数据被统计出 相对数 表示在Y轴上 体积 表示在X轴上 白细胞体积从30 450fl分为256个通道 每个通道1 64fl 依据体积大小分别放在不同通道中 得出直方图 第一群 小细胞群 主要为淋巴 体积35 90fl第二群 中间细胞群 主要为单核 体积90 160fl第三群 大细胞群 主要为中性粒 体积可 160fl Plat和RBC共用一个孔管 正常人RBC体积和Plat体积有明显的界限 因此Plat计数准确容易 当血细胞悬液中含有异常血细胞 如小RBC 时 则划分界限不清 为使Plat计数有较高的准确性 计算机对Plat和RBC分布图进行判断 将Plat计数的上限阈值判定线放在RBC和Plat分布图交叉部分的最低处计数 白细胞直方图 三分类血球仪一般以电阻抗原理进行WBC分类 依据大多数正常形态的WBC在溶血素作用后的大小排列 人为设置4个鉴别线 将直方图分为三个区域 计数WBC时 加入溶血素 使RBC破坏 而WBC膜受到破坏后胞浆流失 WBC体积大小发生变化 因此 WBC直方图上细胞排列顺序不是细胞的原始大小 而是经溶血液修饰后的细胞大小 电阻抗原理 血细胞非导电性质 悬浮在电解质溶液中的血细胞颗粒 通过检测小孔时 引起电阻的变化 从而对血细胞计数和分类 加入溶血素前的细胞大小 加入溶血素后的细胞大小 一 设置鉴别线 低鉴别线 LD 自动寻找30 60fl之间最适位置高鉴别线 UD 定在300fl 用作粒度分布异常监视鉴别线1 T1 自动寻找从LD UD之间WBC分布曲线的波谷 第一波谷值设为 TROUGH T1鉴别线2 T2 自动寻找从LD UD之间WBC分布曲线的波谷 第二波谷值设为 TROUGH T2 仪器是如何分类WBC 报警信息列表WL LD的相对度数 规定值 可能 存在Plat聚集 较多巨大Plat WU UD的相对度数 规定值 可能 溶血不充分 较多异常细胞 T1 当第一谷值不能决定时T2 当第二谷值不能决定时F1 小WBC分布异常 T1的相对度数 规定值F2 中WBC分布异常 T1或T2的相对度数 规定值F3 小WBC分布异常 T2的相对度数 规定值 2 监视WBC粒度分布的情况 提供异常分布信息分布正常时 直方图为三峰性分布 在LD UD之间有两个谷值T1和T2当各值鉴别线不能设定 或在设定的鉴别线位置的度数比规定值高时 将标有WBC粒度分布的异常报警 二 鉴别线作用 1 对正常形态的WBC进行粒度分类LD T1 为W SCR 相当于LYM T1 T2 为W MCR 相当于MEX M E B T2 UD 为W LCR 相当于NEUT 1 3 LD度数高 无T1 T2 WBC有结果 但标有报警 WL 其余结果无 报警 WL 1 1 LD度数高 所有结果都有 但标报警 WL 常见于 存在RBC溶血不全 有核RBC 大Plat增多 Plat聚集 纤维蛋白析出 1 2 LD度数高 无T2 WBC L L 有结果 但标有报警 WL 其余结果无 报警 WL 无T2 不能设定中间细胞与中性粒细胞之间的波谷鉴别线常见于 幼稚粒细胞 RBC溶血不全 标本放置时间过长 WLLD的相对度数 规定值 1 4 黄疸病人的特征性改变 黄疸病人RBC膜上脂质含量增多 蛋白质含量减少 对溶血素的拮抗作用增加 RBC难于破碎 WL LD的相对度数 规定值 2 无T1 无T2 WBC数无报警 但WBC分类结果无 且报警 T1 常见于 幼稚粒细胞 RBC溶血不全 T1T1相对度数 规定值 第一谷值不能决定 WBC数无报警 L L 结果报警 F1 其余结果无 且报警 T2 常见于 幼稚粒细胞 M增多 E增多 B增多 RBC溶血不全 标本放置时间过长 T2T2相对度数 规定值第二谷值不能决定 F1T1相对度数 规定值小WBC群分布异常 3 1 T1高 无T2 WBC数 L L 无报警 其余结果无 报警 T2 3 2 仅T1高 WBC数 N N 有结果 无报警 L L 结果报警 F1 M M 结果报警 F2 3 3 仅T2高 WBC数 L L 有结果 无报警 M M 结果报警 F2 N N 结果报警 F3 3 4 T1 T2都高 WBC数报警 WU L L 结果报警 F1 M M 结果报警 F2 N N 报警 F3 常见于 原始细胞 幼稚粒细胞 M增多 E增多 B增多 RBC溶血不全 标本放置时间过长 F1T1相对度数 规定值小WBC群分布异常F2T1或T2相对度数 规定值中WBC分布异常F3T2的相对度数 规定值大WBC分布异常 4 LD高 UD高 LD高 Plat值标有报警 AG UD高 WBC报警 WU 其余结果无报警常见 溶血不充分 Plat聚集 异常细胞 WUUD的相对度数 规定值 小结 一 结果不输出 原因分析 T1负责监视淋巴区域和中间细胞区域T2负责监视中间区域和中性粒区域当WBC粒度分布曲线异常 仪器找不到谷底T1和 或T2时 T1 T2负责监视的细胞群结果就不输出 二 WBC直方图异常 原因分析1 病理因素 直方图的变化 可反映血液中WBC群体的变化 但无特异性 引起血液学变化的病因很多 但其直方图变化是相近的 因此 出现提示报警 就是给检验师命令 要求我们进行镜检复核 2 非病理因素 1 仪器因素 凡影响细胞脉冲信号的因素 都可以使直方图发生变化 血细胞自身体积 仪器的阈值 孔电压 脉冲的增益 2 试剂因素 试剂性能好坏直接影响直方图 因此 应使用配套试剂稀释液的电导率 渗透压 离子强度溶血剂的种类 浓度 用量 溶血时间 抗凝剂的种类 浓度 EDTAK21 5 2 2mg抗凝1ml全血3 样本放置时间 一般认为样本采集后20分钟 2h内检测 过短 可能存在Plat未完全解离 抗凝剂未完全溶解等 过长 则细胞变形 特别是免疫功能亢进的病人 其淋巴细胞容易变成异型淋巴 从而影响直方图变形 红细胞直方图 红细胞直方图 分析范围 36 360fl正常RBC主要分布在50 200fl直方图上可见两个细胞群 50 150fl几乎两侧对称 较狭窄 正态分布 125 200fl大RBC和Ret 分类规则 按体积 在RL RU之间分析RBCRL Plat和RBC的分界线 可反映出小RBC 大Plat 血小板簇RU 可反映出RBC聚集 RL与直方图交点高 电子噪声干扰 破碎RBC 大Plat增多 Plat聚集 MCV高MCHC低RDW高 RU与直方图交点高DW 相对度数20 处的鉴别线与直方图曲线交点增高 RU 电子噪声干扰 冷凝集素干扰 WBC极度增高 DW RBC明显大小不均 MCV高MCHC低RDW无法得出 RBC曲线跨度大 小RBC干扰 曲线不光滑 抬尾 RDW 明显增高 Plat 报警PLPDW 报警DWMPV 报警PL无法测出 RBC大小不均 RBC大小不均 主峰位于65fl 小RBC MCV 低MCH 低MCHC 低RDW 轻度增高 抬尾 不与横坐标重合 浮动界标PU在20fl定位 小RBC出现 缺铁性贫血 RBC外观无异常 双峰 接受贫血治疗 输血 出现多种大小的RBC群 MCHC 低RDW 高报警MP 治疗2w后 输血 铁剂 双峰 MCV 低MCH 低MCHC 低RDW 高报警MP 治疗4w后 双峰 但以正常RBC为主 MCV 低MCH 低MCHC 低RDW 高报警MP 缺铁性贫血治疗后 无T2 出现连续体积大小的细胞 RBC 低Hb 低HCT 低MCV 高 WBC 高M 无法得出报警T2N 无法得出报警T2 曲线右移 大细胞性贫血 大细胞性贫血 CML 血小板直方图 分析范围 2 30fl正常Plat直方图 左偏态 主要分布在2 15fl3条鉴别线 2条固定鉴别线 PL 2 6fl PU 12 30fl1条浮动鉴别线 12fl RBC分析范围 36 360fl 对于和Plat大小相似的细胞大小 成为 非Plat颗粒 包括小RBC RBC碎片 WBC碎片 细菌 真菌 免疫复合物 误认为Plat 使得假性增高 对于聚集的Plat因体积增大 而不归类为Plat 使得假性减低 PU Plat和RBC的分界线 可反映出小RBC 大Plat 血小板簇 报警PL LD相对度数超过设定值 Plat 报警PLPDW 报警PLMPV 报警PLP LCR 报警PL低 存在电子噪声 冷凝蛋白 破碎RBC 白血病