遗传学大实验

遗传学综合大实验主要内容 蚕豆多倍体诱导与细胞遗传学鉴定蚕豆组型分析 材料预处理 根尖压片 DNA的孚尔根染色鉴定染色体结构与数目变异的观察与分析临时片与永久片的制作 第一天安排 上午 组型分析材料预处理当蚕豆根尖长至1cm时 切下置于0 1 秋水仙碱溶液25 处理3hr 水洗 卡诺液 3乙醇 1冰乙酸 固定 用于根尖压片 多倍体诱导处理取刚萌动的蚕豆根尖经0 1 秋水仙碱溶液25 处理24hr 多倍体材料的固定 上一个班的材料普通根尖压片 洋红染色法 下午 染色体结构变异观察 60Co 射线处理的蚕豆种子根尖 根尖临时片和永久片制作 第二天安排 上午 多倍体蚕豆冲洗培养 水洗后插入砂盘发芽DNA测定 蚕豆根尖处理 脱色碱性品红染色3 5hr 多倍体蚕豆根尖压片 洋红染色法 及观察永久片制作下午 DNA测定蚕豆根尖压片多倍体 结构变异永久片制作 第三天安排 继续完成多倍体 结构变异永久片制作 蚕豆多倍体诱导 将刚萌动的种子横放在培养皿中 有根的一侧朝下 然后滴入0 1 的秋水仙碱溶液 浸没根尖即可 25 处理24hr后 充分洗净移入砂盘中培养 2 3天后 将膨大的根尖切下 用卡诺液 3乙醇 1冰乙酸 固定4 24hr 将固定好的根尖置入70 洒精中 待下次实验时进行细胞学鉴定 秋水仙碱是剧毒药品 实验完成后 一定要将手洗净 实验时 不得将饭盒食物带入室内 脱氧核糖核酸 DNA 的测定 一 实验目的 学习掌握细胞核内DNA的鉴定方法 孚尔根 Feulgen 染色法 二 实验材料 蚕豆根尖 三 实验原理 DNA经温盐酸水解处理后 其嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键被打断 形成醛基 CHO 醛基与脱色碱性品红 席夫试剂 作用显紫红色 根据紫红色的出现而鉴定DNA的存在 席夫 Schiff 试剂 碱性品红 NaHSO3 HCl 四 实验步骤取固定后的蚕豆根尖放入小药瓶中 在60 1NHCl中水解5 12min 再放入冷1NHCl处理1min 以不处理作对照 将1NHCl倒掉水洗3次后吸干 放入脱色碱性品红 用黑纸包住药瓶 放在暗处染色3 5hr 倒掉染液 用SO2溶液冲洗3次 每次1min 倒掉SO2液 加H2O 切记不能把根尖暴露在空气中 防氧化 取根尖顶端 紫红色部分 放在载玻片上 再用另一载玻片呈十字形压片 分开后滴上45 醋酸液1滴 加盖片 用吸水纸吸掉多余溶液 显微镜下观察 选染色较深 细胞呈薄层分散的临时片 交老师当场记分 临时片的制作 取固定好的根尖水洗3次 把根尖放入洗净的小药瓶中 加5ml左右的1NHCl 置入60 水浴锅中水解8 12min 蒸馏水漂洗2 3次 取少量根尖分生组织置于载玻片的中央 用镊子和解剖针将组织轻轻捣碎 分散并去掉残渣 用另一载玻片呈 十 字型压片 不要移动 后 用铅笔橡皮头 或解剖针 垂直轻敲 分开后加1滴醋酸洋红染色5 10min 盖上盖玻片 用吸水纸吸干多余的染液 镜检后 若有好的临时片再做永久制片 如果染色不深 可以复染 烤片是制片中一个极重要的过程 方法是将载玻片在酒精灯火焰上来回移动 一边用手摸载玻片的底下 如烫手即可 在减数分裂涂抹制片中 烤片更为重要 但必须染色较深 这样才能使细胞核变深 细胞质变浅 理想制片标准 背景干净 染色到位 细胞分散 分裂相丰富 永久片制作方法 脱盖玻片 把临时片翻转 盖玻片朝下 放入盛有脱盖玻片液 1份45 乙酸 1份95 乙醇 的培养皿 编号 中 将载玻片的一端搁在短粗玻璃棒上 呈倾斜状 让盖玻片自然滑落 盖玻片脱落后2 3min 分别取出盖玻片和载玻片 用吸水纸吸干 注意不要触动载玻片上的材料 脱水 透明 取三只培养皿 分别编号 在其中各放入一根短粗玻璃棒 顺序加入下列脱水剂 号培养皿加2份95 酒精 1份正丁醇 号培养皿加1份95 酒精 2份正丁醇 号培养皿加正丁醇 操作时用鸭嘴镊子把 号培养皿中已脱落的盖玻片和载玻片取出 稍干后迅速放入 号培养皿中 依次脱水 透明 最后放入 号培养皿中 在各编号培养皿中分别浸泡5min左右 整个脱水过程中 必须保持载玻片和盖玻片原来相对的方向和位置 同时注意操作轻巧 以免造成玻片上材料漂失 封片 从 号培养皿中取出载玻片和盖玻片置于滤纸上吸去多余的溶剂 在载玻片中央载有材料处滴上1小滴中性树胶 将盖玻片盖回原来位置进行封片 覆盖盖玻片时 要注意用鸭嘴镊子夹住盖玻片 轻轻地倾斜覆盖 使之随着树胶的扩展自然下滑 切不可施加压力或移动盖玻片 如发现封片中树胶有气泡 应让其自行逸出或用针尖烧热后烫一下 使气泡逸出 如果树胶滴得