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实验十微生物的生理生化反应 二 vp试验甲基红试验淀粉水解试验 一 目的要求 1 了解细菌的一般生化反应 2 了解细菌的生化鉴定方法其原理 二 基本原理 1 伏一普 Voges proskauer 二氏反应 即V P反应2 甲基红试验 M R试验 3 淀粉水解试验 1 伏一普 Voges proskauer 二氏反应 即V P反应 某些菌生长于葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸 而丙酮酸又可缩合 脱羧而转化成乙酰甲基甲醇 如加入强碱液 即与空气中的氧起作用产生二乙酰 二乙酰与蛋白胨中的含胍基成分作用生成红色化合物 称阳性反应 没有红色化合物产生则称阴性反应 2 甲基红试验 M R试验 某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能产生大量的酸 使pH降低至4 5 它先产生丙酮酸 丙酮酸再被分解成甲酸 乙酸 乳酸等 酸的产生可由加入甲基红指示剂的变色而指示 有效pH范围为4 2 6 3 细菌分解葡萄糖产酸 则培养液由原来的桔黄色 变为红色 即为甲基红反应 3 淀粉水解试验 某些细菌可以产生能水解培养基中淀粉的淀粉酶 胞外酶 使淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖 再被细菌吸收利用 淀粉水解后 遇碘不再变蓝色 三 材料 菌种 大肠杆菌 枯草杆菌 自己分离的大肠杆菌 葡萄糖蛋白胨水培养基 淀粉培养基 试剂 碘液 甲基红试剂 V P试剂 四 操作步骤 1 伏一普 Voges proskauer 二氏反应 即V P反应 1 取葡萄糖蛋白胨水培养基四支 分别接种大肠杆菌 自己分离的大肠杆菌 枯草杆菌 留一支作空白对照 并在试管上注明菌名和组别 置37 培养24小时 2 培养后取出 按书123页上的要求加试剂后 放置37 温室30分钟 呈红色者为阳性 不呈红色者为阴性 2 甲基红试验 M R试验 1 取葡萄糖蛋白胨水培养基四支 一支接种大肠杆菌 第二支接自己分离的大肠杆菌 第三支接枯草杆菌 第四支不接种 作空白对照 在各试管上标明菌名和组别 置37 培养48小时 2 培养后取出 沿管壁加入甲基红指示剂3 4滴上层呈红色者为阳性 3 淀粉水解试验 1 淀粉培养基在水浴中融化后 冷至50 以无菌操作制成平板 用接种环取少量枯草杆菌在平板的一边划 字形接种 或点种 另取少量大肠杆菌菌在平板的另一边接种 在各培养皿底部标明菌名和组别 置37 温箱中培养16 20小时 2 观察结果 打开皿盖 滴加少量碘液于培养基上 轻轻旋转培养皿 使碘液均匀铺满整个平板 如果在菌周围出现无色透明圈 说明淀粉被水解 透明
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