药用高分子材料生物相容性

第二章药用高分子材料生物相容性 安全性评价及灭菌方法 第一节药用高分子材料及其生物相容性生物相容性 biocompatibility 指生物材料与生物体间的相互作用结果以及生物体对这种结果的忍受程度 国际标准化组织 ISO 提出 生物相容性指生命组织对非活材料产生合乎要求反应的一种性能 药用高分子材料因伴随药物进入体内 有些暂停留于体内 有些则在体内降解 吸收 因此药用高分子材料生物相容性要求更加苛刻 一 药用高分子材料毒性的主要来源1 材料本身的溶出物或渗出物产生的毒性甲醛 皮肤炎症 引起肝中毒2 材料降解的中间物或最终产物产生毒性聚乳酸等聚酯类材料 局部酸性增大 产生无菌性炎症3 材料在合成或加工过程中带来的细菌或病毒污染带有细菌或病毒 造成热源反应或炎症反应或其他毒副反应 二 药用高分子材料的生物相容性生物相容性是指材料与人体之间相互作用产生各种复杂的生物 物理 化学反应 以及人体对这些反应的忍受程度 药用高分子材料应该对人体无毒性 无致敏性 无刺激性 无遗传毒性和无致癌性 对人体组织 血液 免疫等系统不产生不良作用 生物学反应 血液反应组织反应免疫反应 1 组织反应皮下或组织内药物释放体系进入人体内某一部位时 局部的组织对异物产生一种机体防御性反应 当材料有毒性物质渗出时 局部炎症不断加剧 严重时出现组织坏死 炎症和肿瘤2 血液反应血管药物释放体系 抗心律失常药物控释制剂 防治血管再狭窄控释制剂 抑制人工心脏瓣膜钙化的药物控释制剂 这些制剂中所用高分子材料应该具有良好的血液相容性 主要通过改变材料结构和表面性能来提高材料血液相容性 3 免疫反应人体的免疫系统是保护屏障 可防御侵害人体健康的物质和引起疾病的感染源以及其他环境因素和肿瘤 其功能有两种主要机制 第一种 如单核巨噬细胞 粒细胞和异体巨噬细胞都属于非特异性防御的范畴 第二种是特异性针对诱导物的特异性和适应性机制 如淋巴细胞 巨噬细胞及其细胞因子产物都属于特异性防御范畴 免疫系统可对侵入的微生物和异物进行不同方式的应答 体液免疫应答包括抗体对微生物 病毒表面抗原的反应 由T细胞 巨噬细胞和单核细胞介导的细胞免疫应答 第二节药用高分子材料的安全性评价一 药用高分子材料的安全性评价药用高分子材料作为药物释放体系的载体会与人体接触 有的载体在体内逐渐降解 有的甚至在体内留置3 5年 因此 必须对药用高分子材料进行安全性评价 以保障人民用药的安全性 并把对人体的毒害性作用降低到最低点 目前 药用高分子材料的安全性评价主要是采用生物材料生物学评价体系 即世界标准化组织 ISO 制定的10993系列标准 国内为国家标准 GB T 16886系列标准 1 ISO10993系列标准 20个标准 2 安全性评价试验项目选择药用高分子材料作为药物释放体系的载体会与人体不同部位接触 并且接触时间也会不同 因此应按其接触部位和接触时间进行分类 并按表2 1 P 25 选择要进行的生物学评价试验项目 3 药用高分子材料评价原则 1 在考虑一种材料与组织间的相互作用时 不能脱离整个药用高分子材料的总体设计 2 对一个产品的生物学评价 应该考虑加入材料中的各种添加剂 以及材料在生理环境中可浸提出的物质或降解的产物 3 应该用最后灭菌过的产品或最后灭菌过的产品中有代表性的样品作为试验样品或作为制备浸提液样品 4 在进行生物学评价试验时 一般是先进行体外试验 后进行动物试验 5 进行生物学试验必须要在专业实验室 并由经过培训且具有实践经验的专业人员进行 其试验结果应具有可重复性 6 由于高分子材料的复杂性和使用的多样性 不能规定一套硬性的合格或不合格指标 一般是在最终产品的标准中确定合格或不合格的指标 7 当最终产品投放市场后 如果制造产品的材料来源或技术条件发生变化 产品的配方 工艺 初级包装或灭菌条件改变 储存期内产品发生变化 产品用途发生变化 有迹象表明产品用于人体时会产生副作用时 要对产品重新进行生物学评价 4 药用高分子材料生物学评价试验方法学 1 在药物毒理学试验基础上发展起来的试验方法学 致敏试验 用材料或其浸提液做试验 评价药用高分子材料的潜在过敏原 常用的方法有最大剂量法和接触斑贴法 使用豚鼠做试验 刺激试验 用材料或其浸提液做试验 评价药用高分子材料的潜在刺激源 根据药用高分子材料的具体使用部位 可选择进行皮肤刺激试验 皮内刺激试验或黏膜刺激试验等 常使用兔子做试验 热源试验 检测材料或其浸提液中是否有致热源物质 常用兔法和细菌内毒素检查法 遗传毒性试验 用哺乳动物或非哺乳动物细胞培养技术 测定药用高分子材料或其浸提液引起的基因突变 染色体结构和数量变化 或其他遗传毒性 致癌试验 由单一途径或多种途径 在试验动物整个寿命期 例如大鼠为2年 测定药用高分子材料的潜在致癌作用 生殖和发育毒性试验 评价药用高分子材料或其浸提液对生育 生殖功能 胎儿和早期发育的潜在有害作用 试验包括一般生殖毒性试验 致畸胎试验和围产期毒性试验 2 方法学上似乎相似但有很大区别的试验 全身急性毒性试验 用材料或其浸提液 通过单一或多种途径由动物模型做试验 评价其急性有害作用 全身亚急性 亚慢性 毒性试验 通过多种途径 在不到试验动物寿命10 的时间内 例如大鼠最多到90d 测定药用高分子材料的有害作用 全身慢性毒性试验 通过多种途径 在不少于动物寿命的10 的时间内 如大鼠要超过90d 测定药用高分子材料的有害作用 3 独特的试验方法学p 28 细胞毒性试验 植入试验 血液相容性试验 降解试验 5 生物学评价试验的参照材料在生物学评价中 应使用参照材料来证实试验过程 并根据具体生物学评价试验采用相应的阴性对照 阳性对照和空白对照 同一参照材料可用于不同的试验 1 阳性参照材料 含有二甲基或二丁基 二硫代氨基甲酸锌链段的聚氨酯膜 含有有机锡添加剂的聚氯乙烯 增塑聚氯乙烯 含有乳胶成分或锌的盐溶液及酚醛和水稀溶液可作为浸提液的阳性参照液 2 阴性参照材料 高密度聚乙烯 低密度聚乙烯 无硅聚二甲基硅氧烷 聚醚聚氨酯等 6 生物学评价试验的样品制备 1 试验样品的选择原则最好直接用药用高分子材料作为试验样品 选择药用高分子材料成品中有代表性部分作试验样品 用相同配方材料的有代表性样品进行试验 并按照与成品相同的工艺过程进行预处理 2 药用高分子材料浸提液制备用浸提液作为试验样品可测定药用高分子材料中可滤出物质对生物体的生物反应 进一步预测药用高分子材料对于人体的潜在危害 在制备药用高分子材料浸提液时 所用浸提介质和浸提条件最好与最终产品的性能和临床使用情况相适应 并与试验方法的可预见性 如试验原理 敏感性等 相适应 理想的浸提条件既要反映产品的实际使用条件 还要反映试验的可预见性 二 药用高分子材料生物学评价试验方法 一 细胞毒性试验p 321 范围细胞毒性试验是利用体外细胞培养方法来评价药用高分子材料或其浸提液可滤出成分中急性细胞毒性的潜在性 2 试验项目选择 推荐 琼脂覆盖法 直接接触法 分子滤过法 生长抑制法 进行评价药用高分子材料的细胞毒性 3 试验条件 1 细胞株 L929和V79 2 培养基 培养基及其血清浓度的含量应能适合所选择细胞株的生长 满足细胞生长的需要 4 试验方法 1 琼脂覆盖法结果评定标准 在白色背景下观察样品周围及样品下面脱色区范围 在阴性样品周围和下面的细胞单层达到标准的反应即R 0 0 阳性样品亦达到标准反应即R 2 2 否则该培养皿弃之 反应指标 反应指标的大小用反应指标 R 来表示 R Z L Z为区域指标 见表2 3 与脱色区大小有关 L为细胞溶解指标 见表2 4 与区域内细胞溶解的范围有关 反应指标应作为2个数来报告 不是一个分数 两个指标的大小都应很明显 对每一只样品应报告其区域指标的平均值和溶解指标的平均值 2 分子滤过法结果评价 应在显微镜下检查滤膜 含细胞单层的膜片染色为深兰色 没有细胞的滤膜用来观察实验材料可能对滤膜产生的影响 按照表2 5 P 34 的记分系统来评价试验样品 3 细胞生长抑制法结果评价 根据相对增殖率 RGR 均值 按表2 6 P 34 所列评分标准对样品细胞毒性程度进行评价 二 皮肤致敏试验本试验方法是将一定量的药用高分子材料浸提液与豚鼠皮肤接触 以检测材料是否具有引起皮肤致敏的潜在性 有两种方法可供选择 只进行其中一种 1 接触斑贴致敏试验结果评价 如果试验组记分 1 而对照组记分 1 提示致敏 如果对照组动物记分 1 而试验组动物的反应超过最严重的对照反应则被认为是致敏所致 2 最大剂量实验结果观察与评定标准 将敷贴物取下后1h 24h和48h分别观察该处红斑和水肿 按表2 8 表2 9给各点记分并分级 三 刺激试验1 皮肤刺激试验本试验是将药用高分子材料浸提液与完整的皮肤在规定的时间内相接触评价药用高分子材料对局部皮肤的刺激作用 2 眼刺激试验本试验通过将一定量的药用高分子材料浸提液滴入动物眼内 观察角膜 虹膜和结膜的反应 从而评价药用高分子材料是否产生对眼的刺激性 3 皮内刺激实验本试验用于评价药用高分子材料对皮肤产生的潜在刺激性 四 全身急性毒性试验本试验是一种非特异急性毒性试验 将药用高分子材料浸提液通过动物静脉或腹腔注射到动物体内 观察其生物学反应 以判定材料的急性毒性作用 五 溶血试验本试验是用药用高分子材料进行体外试验 测定红细胞溶解和血红蛋白游离的程度 对材料的体外溶血性进行评价 由于本试验能敏感地反映试样对红细胞的影响 因而是一项特别有意义的筛选试验 本试验采用新鲜抗凝兔血或人血 结果和评价溶血程度用 表示 按下列公式计算 Dt一Dnc Dpc Dnc 100Dt 试验样品吸收度Dnc 阴性对照吸收度Dpc 阳性对照吸收度若材料的溶血率 5 则材料符合溶血试验要求 溶血率 5 则预示受试验材料有溶血作用 六 热源试验1 兔法 本试验是将一定量试验材料的浸提液由静脉注入兔体内 在规定时间内 观察兔体温变化 以确定浸提液中所含热源量是否符合人体应用要求的一种方法 2 细菌内毒素检查法 本法采用鲎 h u 试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理 以判断药用高分子材料中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法 内毒素的量以内毒素单位 EU 表示 七 遗传毒性 致癌性及生殖毒性试验根据ISO10993标准的要求 药用高分子材料长期接触人体或植人体内组织 血液应进行潜在的遗传毒性 致癌性和生殖毒性等方面的生物学评价试验 按下述要求进行评价试验 做遗传毒性试验有 用于黏膜 损伤皮肤表面接触时间超过30d 用于间接接触血液超过30d 用于导人体内与组织 骨 血液接触超过24h 用于植入体内与组织 骨 血液接触超过24h 做致癌性试验有 用于导入体内与组织 骨 血液接触超过30d 用于植入体内与组织 骨 血液接触超过30d 注 遗传毒性试验阴性者可不做致癌试验 可疑者应做致癌试验 1 遗传毒性试验 1 总则试验组最少应做三项试验 这些试验的结果应从DNA影响 基因突变和染色体畸变等三个方面反映出对遗传毒性的影响 2 样品制备的要求 任何材料和制品均应用最终产品送检 浸提液应采用适合的溶剂 采用生理盐水或能溶解材料的适合溶剂 如DMSO 的任一种浸提液进行试验 3 试验方法 体外遗传毒性试验 主要可参照中国新药审批办法中推荐的进行微生物回复突变试验 哺乳动物培养细胞染色体畸变试验 体内遗传毒性试验 参照中国新药审批办法中推荐的选做啮齿类动物微核试验 但对于生殖系统的材料与制品应进行显性致死试验 2 致癌试验 1 总则 致癌试验是将材料以一定的形式处理动物 在大部分和整个动物生命期间及死亡后检查肿瘤的出现数量 类型 发生部位及发生时间 与对照动物比较以评价材料及其降解产物有无致癌性 2 样品的准备和要求 试样应选择固体状态的材料 一般可将样品制成圆形膜片 两面光滑 置生理盐水中煮沸灭菌30min 24h内备用 3 试验要求 试验动物可采用大鼠 试验组和对照组肉眼观察到局部有肿瘤病变或可疑肿瘤病变时 应对全身主要器官进行病理组织学检查 3 生殖毒性试验 1 总则 用于宫内避孕药物控释体系或其他在体内直接接触生殖系统组织或接触胚胎与胎儿的药物控释体系应做生殖毒性试验 2 样品的准备和要求 缓释装置的样品应将计划用于人的多倍的剂量植入动物体内进行试验 3 试验方法与要求 材料的生殖毒性试验方法参考我国新药审批办法中规定 可选用一般生殖毒性试验 致畸胎试验和围产期毒性试验 八 植入试验通过植入试验可从宏观和微观水平来评价组织的局部反应 材料的理化性质 如形状 密度 硬度 表面光洁度 酸碱度等 植入部位或体内负荷 移动等都可能影响局部组织的反应性 必须用已知的药用高分子材料作对照 1 试验周期植入物的局部反应 观察期包括亚慢性 短期 和慢性 长期 两个时期 2 植入物的埋植点根据测试材料类别 用途 试验周期 设计要求等 选用不同的植入位点 即皮下 肌肉 骨骼植入试验 其中以肌肉内植入作为常规试验方法 可用于亚慢性或慢性试验 3 动物选择动物选择要考虑植入物的大小 试验周期 动物寿命以及种属之间软 硬组织生物反应的差异 4 肌肉植入试验将一定大小 一定形状的样品 1mm 10mm圆柱试样 要求表面光滑 边缘平整 植入家兔或犬背部深层肌肉 定期采集标本和周围组织 肉眼及显微镜下观察接触部位的组织反应 5 皮下组织植入试验试验材料埋植皮下结缔组织内 适用于短期内观察局部生物学反应者 植入试样的形状和尺寸 可由实验者根据情况设计 6 骨内组织植入试验通过骨内组织植入试验测定植入部位骨组织生物反应 这种试验也可用来测定同种材料 不同表面状态和结构的生物学反应 或者评价治疗方法和材料改良效果 九 血液相容性试验通过药用高分子材料与血液相接触 评价材料对血栓形成 血浆蛋白 补体系统和血液有形成分的作用 1 原则根据试验的基本过程 系统以及血液学的反应 评价血液相容性的试验可分五个方面 组 分属二个水平 三种类型 1 五个方面 血栓形成方面 凝血方面 血小板方面 血液学其他方面 免疫学方面 暂未推荐 2 二个水平 水平一 是推荐的试验项目 见表2 14 水平二 是提供进一步选择的项目 见表2 15 具体试验方法可参见有关文献 3 三种类型 体外试验 半体内试验和体内试验 2 试验要求 1 试验时 试样暴露在血液的条件应达到如下要求 暴露时间 不少于15min温度 37 流量 类似试样的应用部位试验开始 暴露后15min内 2 尽量使用人的血液进行试验 3 应选择合适的动物进行试验 4 实验时应尽量避免使用抗凝剂 5 实验应重复足够次数 以获得足够数据 第三节药用高分子材料的灭菌 消毒和灭菌两者含义不同 消毒是指破坏非芽孢型和增殖状态的微生物过程 使其达到无害 灭菌是指杀灭产品中一切微生物过程 使其达到灭菌 一切微生物包括病原菌和非病原菌 如细菌 芽孢 真菌 病毒等 芽孢是某些微生物在其生命周期中的正常休眠阶段 其耐杀灭性要比增殖状态高许多倍 用消毒方法不能杀灭芽孢 肝炎病毒等 因此灭菌能达到消毒目的 而消毒则达不到灭菌要求 消毒的指标是灭菌指数达103 灭菌的指标是灭菌指数达106 即对一百万件灭菌后 只允许有一件以下的有活的微生物存在 虽然消毒和灭菌含义不同 但两者是有关联的 例如 某化学药剂在低浓度时是消毒剂 浓度高时是灭菌剂 一 微生物的灭杀微生物是一群形体微小 构造简单的低等生物 一般由单细胞构成 也有简单的多细胞和没有典型细胞形态的类型 它包括细菌 放线菌 真菌 立克次氏体 病毒等 由于芽孢膜致密耐热 抵抗力强 因此常以杀灭芽孢作为评价灭菌效果的依据 为保证达到灭菌要求 一般与体内接触或植入体内的药用高分子材料都要求至少在10万级的洁净条件下生产 有的甚至在万级条件下生产 微生物灭杀速率常用 十分之一时间 的D值表示 即杀灭90 微生物所需要的时间 为速度常数的倒数 二 灭菌方法 一 湿热灭菌法湿热灭菌法原理是高温可使微生物细胞蛋白质凝固 由于在湿热灭菌中加压蒸汽的穿透性增强 温度高以及细胞原生质含水量高 变性凝固更容易发生 所以湿热灭菌是热灭菌中最普通 效果最好 最可靠的一种灭菌方法 常用115 压力0 7kg cm2 时间30min 或121 压力1kg cm2 时间20min 由于许多高分子材料耐热不高 不适用于湿热灭菌法 适用于湿热灭菌的高分子材料有 聚丙烯 尼龙 硅橡胶 聚四氟乙烯 聚酯 聚碳酸酯 环氧树脂等 二 环氧乙烷灭菌法化学消毒和灭菌法是使化学物质渗人到微生物的细胞内与其反应形成化合物 影响蛋白质 酶系统的生理活性 从而破坏细胞的生理机能而导致细胞死亡 达到灭菌效果 常用的化学消毒灭菌剂分为溶液和气体两种 主要有醇类 乙醇等 过氧化物 过氧化氢等 卤族元素及其化合物 次氯酸等 氧杂环化合物 环氧乙烷等 醛类 甲醛 戊二醛等 酚和酚衍生物 石炭酸等 季铵化合物 新洁而灭等 工业上最常使用的是环氧乙烷灭菌剂 环氧乙烷 EO 是一种广谱灭菌剂 可在常温下灭杀各种微生物 包括芽孢 病毒 真菌孢子等 EO穿透性很强 可以穿透微孔 达到产品的深度 从而大大提高灭菌效果 目前药用高分子材料广泛采用EO进行灭菌 EO也可以抑制生物酶的活性 包括磷酸致活酶 肽酶 胆碱化酶和胆碱酯酶 环氧乙烷因穿透力强 消毒后必然会有部分残留在材料的表面 残留量是随材料的性能和形态不同而有差别多孔材料也容易吸收 这些残留环氧乙烷进入体内后会引起溶血 破坏细胞 造成组织反应 在各国标准中 都对环氧乙烷残留量有严格控制 三 辐射灭菌法电离辐射能使微生物产生广泛的物理和生物效应 辐射会使微生物中的脱氧核糖核酸 DNA 发生诱导电离 辐射灭菌具有穿透力强 效果好 可在常温进行 并在连续和大批量灭菌时经济效果好 电离辐射的灭菌剂量通常是以每克被照射物质吸收100尔格能量为一个拉得 rad 计量 工业上最常用60Co辐射的射线进行辐照 电离辐射是一种能量辐照 会使许多高分子材料变色和发生化学结构变化 交联或降解 如用于制备一次性注射器用的聚丙烯在辐照后会变色和发脆 只有在聚丙烯中加入特殊防辐照添加剂后 才能进行辐照消毒 对被辐射的材料进行选择或改性是进行辐射灭菌必须首先要考虑的问题 三 有关灭菌的标准 一 工业湿热灭菌的确认和常规控制要求 IS011134 本标准规定了工业湿热灭菌的工艺选择 确认灭菌工艺和控制常规灭菌的要求 这个标准涉及所有应用湿热灭菌工艺 包括饱和蒸汽和空气 蒸汽混合气体 适用于所有进行湿热灭菌的生产企业或单位 包括四个方面 1 产品条件2 包装条件3 设备4 灭菌工艺选择 二 环氧乙烷灭菌的确认和常规控制 ISO1135 本标准规定了环氧乙烷 EO 灭菌工艺过程 灭菌工艺过程的确认以及常规控制的要求和指导原则 1 环氧乙烷灭菌工艺过程预处理 处理 抽真空 加温 加湿 灭菌 注入灭菌剂 保持一定时间 去除灭菌剂 放入空气 通风其中处理和灭菌两个过程为一个灭菌循环 1 预处理 2 灭菌循环 3 通风 2 环氧乙烷灭菌确认确认包括灭菌装置试运行确认和性能确认 物理和微生物学 两个过程 1 试运行确认 2 性能确认 物理性能确认 微生物学确认 3 环氧乙烷灭菌过程控制和检测要记录并保留每一个灭菌循环数据以证明灭菌过程达到设计规范要求 这些数据至少包括 1 对预处理区内最难达到规定条件的位置进行监测 并记录湿度和温度 2 开始时间和从预处理区内移出每一灭菌负载的时间 3 每一灭菌负载开始灭菌循环的时间 4 在灭菌循环中从灭菌柜内具有代表性位置测量的温度和压力 5 证实气体灭菌剂已注入到灭菌柜内 6 测定所用EO的量或柜内EO的浓度 7 记录灭菌剂作用时间 8 通风过程中时间 温度和压力变化 以及通气操作过程 9 EO灭菌指示剂的试验结果 4 灭菌效果监测和产品放行通过核对所有物理数据和灭菌指示剂 证明灭菌循环达到规范要求 并且产品达到灭菌要求 使用化学指示剂时 要求所有包内和包外化学指示剂均要符合标准颜色 使用生物指示剂是更可靠的检测灭菌效果的方法 通过存活曲线法或部分阴性法来测定微生物灭活能力 三 生物指示剂 ISO11138系列标准 本系列标准包括总则 环氧乙烷灭菌用生物指示剂和湿热灭菌用生物指示剂3个标准 生物指示剂应和灭菌过程的物理监测配合在一起使用 以证明灭菌过程的灭菌效果 当灭菌过程中物理监测的数据超过了规定的范围 不管生物指示剂获得的结果如何 灭菌循环都不被认可 生物指示剂的性能会受到使用前贮存环境 使用方法或暴露在灭菌循环时的技术所影响 因此应按照生产厂家的说明书进行贮存和使用 1 总则 1 试验菌 试验菌应是无需特殊设备和易于处理的菌株 这些菌株应经过鉴定 并由公认的菌种保存中心保存 例如 环氧乙烷灭菌采用枯草杆菌芽孢 湿热灭菌用嗜热性脂肪杆菌芽孢 2 试验菌悬液 制造厂商应明确制备试验菌悬液的培养基和培养条件 同时在培养和随后的处理方法中 应保证在载体染菌时使用的悬液不含有影响染菌载体或生物指示剂操作的培养基残留物 制造厂商应标明试验菌的贮存条件和有效期 并对试验菌悬液进行活菌计数 标出活菌计数与总的被测微生物数量的百分比 3 染菌载体 染菌载体的制备是将试验菌染在载体上 然后在控制条件下干燥 生产一批染菌载体时 只能采用一批试验菌 同一批生物指示剂的染菌载体上试验菌数量应相同 制造厂商应明确染菌载体的保存条件和有效期 并且要有标识和详细的使用说明 4 生物指示剂 生物指示剂应在原始包装内将每个染菌载体分别包装 原始包装的设计和制造应保证在按要求的条件进行贮存和运输时 染菌载体不会被污染或试验菌从载体上丢失 每个生物指示剂的原始包装上应标识 试验菌名称 批号 失效期 灭菌方法 制造厂家名称和商标以及地址 5 抵抗力测定 可通过成活曲线或部分阴性法来测定D值 并计算存活 杀灭时限 成活时间 剂量 D值 log 初始菌数 2 杀灭时间 剂量 D值 log 初始菌数 4 2 环氧乙烷灭菌用生物指示剂 1 试验菌 试验菌为枯草杆菌芽孢或其他被证明具有同等性的微生物 已证实BacillussubtilisNCTC100T3 CIP7718和ATCC9372为合适茵株 2 试验菌悬液 悬液所含活试验菌的数目应在规定总数范围 35 以内 3 载体和内包装 确认载体和内包装材料符合规定要求 试验条件为温度 55 相对湿度 70 气体浓度 800mg L 暴露时间 6h 4 生物指示剂 在生产过程中 必须控制每个生物指示剂上可再生的试验菌数目 并限定在规定总数 50 之内或标明规定总数的最小值和最大值 日常监测中使用的生物指示剂规定总数必须不小于1 106 规定增殖不大于1 105 3 湿热灭菌用生物指示剂 1 试验菌 嗜热性脂肪杆菌芽孢或其他被证明具有同等性的微生物 已证实BacillusstearothermophilusNCTC1003 DSM497 ATCCl2980 DSM22 CIP5281 DSM5934 ATCC7953 NCTC10007为合适菌株 2 试验菌悬液 悬液所含活试验菌的数目应在规定总数范围 35 以内 3 载体和内包装 确认载体和内包装材料符合要求 试验条件温度为145 或不低于生产厂商规定的最大暴露温度 5 暴露时间为30min或不少于生产产商规定的最大暴露时间 4 生物指示剂 在生产过程中 必须控制每个生物指示剂上可再生的试验菌数目 并限定在规定总数 50 之内或标明规定总数的最小值和最大值范围 日常监测中使用的生物指示剂规定总数必须不小于1 105 规定增值不大于1 104 5 抵抗力 采用成活曲线或部分阴性法测定D值 测定条件是暴露于湿热12l 1 时间不少于1 5min 其对数倍数的D值应不少于10min 四 化学指示剂 IS011140系列标准 本系列标准规定了可在蒸汽 环氧乙烷 电离辐照 蒸汽 福尔马林或干热灭菌过程中使用的化学指示剂要求 本系列标准包括通用要求 试验方法 用于多孔性物品灭菌器的高密度物品穿透试验装置和用于非多孔性物品灭菌器的低密度物品穿透试验装置4个标准 1 通用要求 1 灭菌程序的关键参数各种不同类型的灭菌程序的关键参数不同 2 指示剂生产生产厂家应按质量体系标准 1SO9000系列标准 制备指示剂 3 指示剂说明书在包装箱内技术说明书或指示剂单包装上要标明 指示剂的类型 指示剂预定的选择变化等内容 2 指示剂分类 1 程序指示剂 1级 用于单个单元 如包装袋或箱 的灭菌程序 2 特定试验的指示剂 2级 用于灭菌器或灭菌过程中的特定试验 3 单项参数指示剂 3级 用于标示某一项关键参数是否达到标定值 4 多项参数指示剂 4级 用于标示两项或多项参数是否达到标定值 5 综合指示剂 5级 用于标示各灭菌周期内所有关键参数是否达到灭菌要求 6 模拟指示剂 周期验证指示剂 用于指示各灭菌周期内所有关键参数是否达到标定值 五 环氧乙烷残留量的测定 IS010993 7 被环氧乙烷 EO 灭菌后的药用高分子材料 往往含有残留的EO 由于EO有毒性 可导致皮炎 溶血 致畸 不排除接触产生癌变的可能 所以残留量EO应控制在一定范围内 进行EO灭菌后的药用高分子材料应测定其EO残留量 1 浸提液的制备将被测样品截成小块 精密称取1g放入装有500 l去离子水的顶空瓶中 密封 容器内压力为常压 平衡时间20min 浴温50 供顶空分析 2 试验 1 标准溶液的配制 将事