消毒剂效力及有效期验证方案.doc

TEST METHOD VALIDATION PROTOCOL 分析方法验证方案分析方法验证方案 方案编号方案编号 版本号版本号 Protocol No Version V TMP 07 077 分析方法名称分析方法名称 TEST METHOD QUALIFICATION OF DISINFECTANT EFFECTIVENESS AND STABILITY 消毒剂效力及有效期确认方案消毒剂效力及有效期确认方案 PROTOCOL APPROVAL PAGE 方案批准页方案批准页 PROTOCOL PREPARATION 方案准备方案准备 WYETH PHARMACEUTICAL CO LTD 惠氏制药有限公司惠氏制药有限公司 SIGNATURE 签名签名DATE 日期日期 QC Microbial Analyst QC Microbial Analyst PROTOCOL REVIEW 方案复核方案复核 QC Senior Analyst QC Manager QAValidation Officer PROTOCOL APPROVAL 方案批准方案批准 Senior QO Manager PROTOCOL REVISION HISTORY PAGE 方案修订历史记录页方案修订历史记录页 REVISION NUMBER 修订次数修订次数 VERSION 版本号版本号 REVISION CONTENT 修订内容修订内容 01Original 原稿 1 目的 PURPOSE 5 2 范围 SCOPE 5 3 引言 INTRODUCTION 5 4 参考资料 REFENRENCE 6 5 验证方法 TEST METHOD 6 5 1 所用仪器和物料 6 5 2 测试工作菌种 6 5 3 实验程序 6 6 接受标准 8 6 1 消毒效力接受标准 8 6 2 中和效力控制及其接受标准 8 1 目的目的 PURPOSE 验证惠氏苏州工厂目前使用的几种消毒剂 Process LpHse 酸性 Process Vesphene se 碱 性 Ethanol 酒精溶液 快活溶液 在不锈钢 橡胶 瓷砖 玻璃 塑料门帘 墙面等不 同材质上的消毒效力 同时验证消毒剂的使用有效期 2 范围范围 SCOPE 本验证需要验证的消毒剂有 Process LpHse 酸性 Process Vesphene se 碱性 Ethanol 酒精溶液 快活溶液 FORWARD disinfectant 四种 表 1 各消毒剂使用时涉及的材质 消毒剂消毒剂类型类型适用对象适用对象所涉及的材质所涉及的材质 Process LpHse 酸性 酚类消毒剂 广谱 中效 生产设备 器具 车间 地面 墙壁 天花板 不锈钢 橡胶 瓷砖 玻璃 塑料门帘 墙面 Process Vesphene se 碱性 酚类消毒剂 广谱 中效 车间设备 器具 操作 间地漏 不锈钢 橡胶 瓷砖 玻璃 塑料门帘 墙面 Ethanol 酒精溶 液 醇类消毒剂 中效 生产设备 器具 微生 物实验室 不锈钢 橡胶 瓷砖 玻璃 塑料门帘 墙面 快活溶液 季铵盐类消毒 剂 低效 车间地面 墙壁 天 花板 非控制区域 车间公用区 不锈钢 橡胶 瓷砖 玻璃 塑料门帘 墙面 3 引言引言 INTRODUCTION 本验证的原理是 在某种材质表面接种 0 1ml 104 105CFU 的菌种 室温下自然风干后 将消毒剂直接喷在材质表面 等消毒剂作用一段时间后 检验没有被杀灭的细菌数 根据 细菌被杀灭的数量 来判断消毒剂的杀菌效果 实际消毒操作时 消毒剂喷到要消毒物体 表面后 再通过人为的涂擦等操作使消毒剂与物体表面充分接触 同时 此操作也会机械 去除掉一部分微生物 在该验证中 消毒剂是喷到材质表面 这种方法要比实际消毒时的 效果差 因此验证的结果更能体现实际的消毒效果 4 参考资料参考资料 REFENRENCE Disinfectant Effectiveness Study 812 Analytical Report 0807 1 0 SOPTS 35 V5 5 验证方法验证方法 TEST METHOD 5 1 所用仪器和物料 所用培养皿 移液管 容器均在 121 度下灭菌 30 分钟后使用 无菌一次性培养皿 移液管 生物安全柜 BHC 1300 A B3生物安全柜 工作窗口吸入风速为 0 5m s 灭菌锅 培养箱 25 度和 32 度各一个 5 2 测试工作菌种 大肠埃希菌 CMCC B 44102 菌种斜面 金黄色葡萄球菌 CMCC B 26003 菌种斜面 白色念珠菌 CMCC98001 菌种斜面 环境菌种科氏葡萄球菌斜面 六 九 十月环境检测沉降菌平板上连续检出科 氏葡萄球菌 特选此菌为环境菌种 需验证的消毒剂应质量合格并在有效期即将结束时开始验证试验 实验所用的仪器设备均 在校正合格期限内 5 3 实验程序 5 3 1 消毒剂的配置 消毒剂按照相关的程序进行稀释 配置好的消毒剂溶液储存在实际操作时使用 的喷壶中 在有效期内 7 天 每天模拟日常使用方法使用 第 8 天开始验证试 验 消毒剂配置方法及消毒反应时间见表 2 5 3 2 材质的准备 所需的材质均是在实际操作中消毒剂所消毒的表面材质 准备的材质需为无菌 材质 在实验过程中 每个实验组需 3 块同种材质同时进行 表 2 消毒剂配置方法及消毒反应时间 消毒剂消毒剂稀释比例稀释比例反应时间反应时间菌种菌种 Comment s1 多少时间 Process LpHse 酸性1 256 v v 3 5 10minutes 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 白色念珠菌 科氏葡萄球菌 Process Vesphene se 碱性 1 128 v v 3 5 10minutes 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 白色念珠菌 科氏葡萄球菌 Ethanol 酒精溶液75 2 3 5minutes 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 白色念珠菌 科氏葡萄球菌 快活溶液1 10 v v 3 5 10minutes 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 白色念珠菌 科氏葡萄球菌 5 3 3 菌悬液的制备 取大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 白色念珠菌及环境菌种科氏葡萄球菌的营养 琼脂斜面培养物 接种至营养琼脂斜面上 在 35 37 培养 20 22 小时 再接 种上述菌种的新鲜培养物至营养肉汤培养基中 在 35 37 培养 18 24 小时 上述营养肉汤培养物用 0 9 无菌生理盐水溶液逐级 10 倍稀释 制成每 0 1 ml 含菌落数 104 105CFU 的菌悬液 5 3 4 实验操作 准备 3 块待测表面材质于生物安全柜内 分别吸取 0 1 ml 104 105CFU 接种于 3 块待测表面材质上 让其在生物安全柜中自然风干后待测 将配置好的的消毒 装入喷壶中 均匀地喷洒在材质的表面后立即开始计时 按表 2 等计时结束后 迅速把该材质放入 100ml 的 D E 中和液中 充分振荡 1min 后经 0 45 微米的滤 膜过滤 用 100ml 次的 D E 中和液冲洗 3 次 取滤膜放在 D E 中和琼脂平板上 培养 培养条件 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 白色念珠菌及 环境菌种科氏 葡萄球菌在 30 35 至少 3 天 重复以上实验操作 3 次 完成验证实验 5 3 5 阴性控制实验 100ml 的 D E 中和液经 0 45 micron 的滤膜后 取滤膜放在 D E 中和琼脂平板上 培养 培养条件 细菌 30 35 至少 3 天 5 3 6 阳性控制实验 准备 3 块无菌的待测表面材质于生物安全柜内 分别吸取 0 1 ml 10 100CFU 阳 性菌接种于 3 块待测表面材质上 让其在生物安全柜中自然风干后 将每种带 菌的材质放入 100ml 无菌的缓冲溶液中 充分振荡 1min 经 0 45 微米的滤膜过 滤 用 100ml 次的 D E 中和液冲洗 3 次 取滤膜放置于 D E 中和琼脂平板上培 养 培养条件 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 白色念珠菌及环境菌种科氏葡 萄球菌在 30 35 至少 3 天 6 接受标准接受标准 6 1 消毒效力接受标准 计算 Log Reduction 评价该种消毒剂对该菌种的杀灭效果 Log Reduction Log Average of Organisms in Control Plates Log Average of Organisms in Test Plates 接受标准 Log Reduction 3 6 2 中和效力控制及其接受标准 吸 5ml 已配制好的消毒剂 经 0 45 微米的滤膜过滤后 用 100ml 次中和液冲洗 3 次 加入 1ml 菌悬液 10 100cfu 置滤膜上 用 100ml 次中和液冲洗 1 次 取滤膜放在 D E 中和琼脂平板上培养 计数 每种菌重复做 3 份样品 分别取 上述菌悬液 1ml 10 100cfu