药物分析-第四章-3

,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查,一、氯化物检查法（一）检查原理 利用氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成的氯化银白色浑浊液，与一定量（限量）的标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银浑浊液比较，以判断供试品中的氯化物是否超过限量。 AgCl AgCl （白色） 主要是作为反映生产过程是否正常和产品纯度的“信号”杂质加以规定的。,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查,氯化物检查方法,对照液配制,供试液配制,氯化物含量比较,注意事项,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查,对照液配制,1. 称取在110干燥至恒重的氯化钠配制每1ml相 当于10g的Cl 。 2. 取规定量的标准氯化钠溶液，置一50ml纳氏比 色管中，加稀硝酸10ml，加水使成约40ml，摇 匀，即为对照溶液。,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查,取各药品项下规定量的供试品，置50ml纳氏比色管中，加水溶解使成约25ml。溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性，再加稀硝酸 10ml；溶液如不澄清，应用事先已洗净Cl的滤纸滤过；加水使成约40ml，摇匀，即得供试溶液。,供试液配制,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查,于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0ml，用水稀释使成50ml，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察所产生的浑浊，比较，即得。,氯化物含量比较,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查,注意事项,1.内消色法2.硝酸的作用3.氯化物的检测浓度范围4.温度对产生氯化银的浊度的影响5. 平行原则6.滤过时，对滤纸的要求8.有机氯的检查9.检查碘或溴化物中的氯化物,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查,内消色法,供试液1,供试液1,加AgNO3试液,滤过,滤液加标准NaCl,对照管,加AgNO3试液,样品管,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查,除去CO32、PO43、SO32-等杂质的干扰加速氯化银的生成产生较好的乳浊,HNO3的作用,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查,操作平行试剂平行纳氏比色管大小、粗细、颜色应一致,平行操作,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查,二、铁盐检查法 药物中的过量的Fe3是一种氧化剂，可氧化具有还原性的药物；Fe2、Fe3还可催化某些氧化还原反应的发生，故应控制药物中的Fe2、Fe3。中国药典（2010年版）采用硫氰酸盐法检查。,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查,（一）检查原理 铁盐在盐酸 酸性溶液中与硫氰酸盐成红色可溶性的硫氰酸铁配位离子，与一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色，以判断供试品中的铁盐是否超过限量。 Fe36SCN- Fe（SCN）63 （红色）,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查,（二）检查方法1.标准铁盐溶液配制 1. 硫酸铁铵FeNH4(SO4)212H2O 配制贮备液。 2. 临用前，贮备液加水稀释得标准液（每1ml相当于 10g的Fe）。,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查,供试液,对照液,稀盐酸,硫氰酸铵溶液,过硫酸铵,在白色背景下，比较两管的颜色,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查,（三）注意事项（1）标准铁贮备液的酸性可防止水解 （2）Fe3最佳比色浓度梯度范围（3）盐酸的作用（防止水解，消除干扰，增加灵敏度）（4）氧化剂过硫酸铵可使Fe2转变为Fe3，防止硫氰酸铁还原 或分解褪色，用HNO3时，应除尽氧化氮后，再加硫氰酸铵 （6）硫氰酸铵的过量加入，提高灵敏度（7）正丁醇提取后比色。提高显色反应灵敏度（8）某些有机药物需经炽灼破坏后检查,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查,三、 重金属检查法 重金属系指在一定的条件下，能与硫代乙酰胺（CH3CSNH2）试液或Na2S试液作用而显色的金属杂质，包括银、铅、汞、铜、镉、锑、锡、砷、锌与镍等离子。 重金属对人体有较大危害，影响药物的稳定性，应严格控制。常以铅为重金属的代表，作重金属的限量控制。,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查,（一）检查原理 药物中重金属离子在pH3.5条件下与CH3CSNH2的分解产物H2S反应，或在碱性条件下与Na2S反应，生成黄色至棕黑色的硫化物均匀混悬液，与一定量的标准Pb2在相同条件下反应生成的有色混悬液比色，以判断供试品中的重金属是否超过限量。,第四章 药物的杂质检查,(二)方法中国药典（2005年版）重金属检查分为四种方法。第一法（硫代乙酰胺法）第二法（炽灼破坏后检查重金属）第三法（硫化钠法）第四法（微孔滤膜法）,第三节 一般杂质检查,第四章 药物的杂质检查,第一法（硫代乙酰胺法） 本法适用于无需有机破坏，在酸性条件下可溶解的，无色的药物的重金属检查。 注意点: 1. 用醋酸盐缓冲液控制显色反应的pH 2.供试液与对照液在加硫代乙酰胺试液前颜色应一致。可用内或外消色法,第三节 一般杂质检查,第四章 药物的杂质检查,第二法（炽灼破坏后检查重金属） 本法适用于含芳香环、杂环以及不溶于水稀酸及乙醇的有机药物的重金属检查。 注意点： 1.对照与供试液平行 2.炽灼的温度500 600,第三节 一般杂质检查,第四章 药物的杂质检查,第三法（硫化钠法） 本法适用于溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物。第四法（微孔滤膜法） 本法适用于含25g重金属杂质及有色供试液的检查。,第三节 一般杂质检查,第四章 药物的杂质检查,四、砷盐检查法 砷盐对人体有剧毒。许多药物质量控制中要求检查砷盐。各国药典所采用的方法大致有以下几种：古蔡氏法（较为常用）、二乙基二硫代氨基甲酸银法、白田道夫法、契列法。中国药典（2005年版）采用古蔡氏法和二乙基二硫代氨基甲酸银法。,第三节 一般杂质检查,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查,（一）古蔡氏法 1.检查原理 金属锌与盐酸作用产生新生态氢，与供试品中微量亚砷酸盐反应生成挥发性的砷化氢，砷化氢的量与溴化汞试纸产生黄色、棕色或黑棕色的砷斑，与同一条件下标准砷溶液所产生的砷斑比较，以判断供试品中的砷盐是否超过限量。,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查,锌粒、盐酸、碘化钾、酸性氯化亚锡、,醋酸铅棉花,溴化汞试纸,AsH3,砷斑,2.方法,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查,3.注意事项 供试品需经有机破坏后再行检砷的，对照管应取标准 砷溶液代替供试品，同法处理制备标准砷斑 KI与SnCl2的作用 （加快反应，防止锑斑形成） 标准砷液制备及用量,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查, 醋酸铅棉花作用 实验仪器和试剂均不应生成砷斑 环状有机结构共价结合的砷的炽灼破坏温度 标准砷液配制,（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法1.检查原理 金属锌与酸作用产生新生态氢，与供试品中微量亚砷酸盐反应生成具有挥发性的砷化氢，砷化氢还原二乙基二硫代氨基甲酸银生成红色的胶态银，与同一条件下一定量标准砷溶液所产生的色度进行目视颜色深浅的比较或比较510nm波长处吸光度大小，以判断供试品中的砷盐是否超过限量。,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查,第三节 一般杂质检查,第四章 药物的杂质检查,锌粒、盐酸、碘化钾、酸性氯化亚锡、,AsH3,红色胶态银，可目视比色或在510nm比较A,醋酸铅棉花,第三节 一般杂质检查,第四章 药物的杂质检查,五、干燥失重（一）检查原理 系指药品在规定的条件下，经干燥减失的重量，主要是指水分，也包括其他挥发性的物质，如乙醇等。,第三节 一般杂质检查,第四章 药物的杂质检查,恒温干燥,干燥器干燥,(二）干燥方法类型,恒温常压干燥,恒温减压干燥,干燥器常压干燥,干燥器减压干燥,第三节 一般杂质检查,第四章 药物的杂质检查,恒温常压干燥,供试品置同样条件下已干燥至恒重的称量瓶中，于烘箱内，在规定温度下干燥至恒重。 本法适用于受热较稳定的药物,恒温减压干燥,适用于热不稳定，水分较难除去的药物在减压条件（压力应在2.67kPa（20mmHg）以下），用较低的干燥温度和较短的干燥时间内干燥至恒重。,第三节 一般杂质检查,第四章 药物的杂质检查,干燥器干燥,供试品置干燥器内，利用器内的干燥剂吸收供试品中的水分，干燥至恒重。常用干燥剂有：五氧化二磷、硫酸和硅胶 等。根据需要，样品置于干燥器内，可采用常压或减压两种方式进行干燥。 本法适用于受热易分解或挥发的药物,第三节 一般杂质检查,第四章 药物的杂质检查,（三）干燥失重方法要点1.固体供试品应是2mm以下的小粒2.供试品在称量瓶中 厚度不可超过5mm，疏松物质厚度不 可超过10mm3.干燥时称量瓶盖敞开，称重时应盖严4.不同干燥剂吸水效力、吸水速度有差别5.硅胶干燥温度不能超过120 6.减压干燥时，先将活塞慢馒旋开使空气进人才能开盖， 应注意随时关闭活塞，以免干燥剂吸水,第三节 一般杂质检查,第四章 药物的杂质检查,六、炽灼残渣检查法 检查不含金属的有机药物中的无机金属杂质以及个别受热挥发或分解的无机药物，如氯化铵,第三节 一般杂质检查,第四章 药物的杂质检查,（一）检查原理 有机药物经高温加热分解或挥发后遗留下的不挥发的无机物（多为金属的氧化物或其盐类），经加硫酸并炽灼（700800 ）后所得的硫酸盐残渣,第三节 一般杂质检查,第四章 药物的杂质检查,炽灼至完全炭化,加硫酸，700800炽灼使完全灰化,第三节 一般杂质检查,第四章 药物的杂质检查,（三）注意事项1.取样量残渣限度来决定，一般残渣的量为12mg为宜。贵 重药品或样品量少时，可减少取样2.炭化时要缓慢炽灼，灰化要除尽蒸气，残渣为灰白色 3.残渣留做重金属检查，则炽灼温度必须控制在500600,4.坩埚称量顺序应与坩锅从高温炉取出的先后次序一致，以 保证各个坩埚放置时间大致相同 5.供试品中含有碱金属或氟元素时，应使用铂坩埚 6.高温坩埚不可迅速冷却，以免爆裂,第三节 一般杂质检查,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查,第四章 药物的杂质检查,七、易炭化物检查法 检查药品中夹杂的遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的有机杂质 方法：一定量的供试品分次缓缓加入到5ml硫酸中，溶解后， 除另有规定，静置15分钟，与中国药典（2010年版） 规定的各种色调色号的标准比色液同置白色背景前平 视观察，供试管所显颜色不得比对照管深。,第三节 一般杂质检查,第四章 药物的杂质检查,八、费休氏水分测定法 药物中水分的存在，可使某些药物发生水解，霉变等，故应当控制某些药物的水分含量。,第三节 一般杂质检查,第四章 药物的杂质检查,（一）测定原理 根据碘和二氧化硫在吡啶和甲醇溶液中能与水起定量氧化还原反应来测定水分。反应式如下：,第三节 一般杂质检查,第四章 药物的杂质检查,I2110g,无水吡啶160ml,无水甲醇300ml,SO2气体至增重72g,无水甲醇,冷却，碘溶解,冰浴冷却,1000ml,（二）测定方法,费休氏试液的制备,第三节 一般杂质检查,第四章 药物的杂质检查,费休氏试液的标定,精称重蒸馏水约30mg或空白,无水甲醇25ml,费休氏液滴定,终点,自身指示：浅黄 棕红,永停指示：电流不为零,第三节 一般杂质检查,第四章 药物的杂质检查,计算公式：,F 为每1ml费休氏试液相当于水的重量,mg； 为称取重蒸馏水的重量,mg； A 为滴定所消耗费休氏试液的容积，ml； B 为空白所消耗费休氏试液的容积，ml,第四章 药物的杂质检查,供试品测定,精称供试品适量或空白,无水甲醇25ml溶解样品,费休氏液滴定,终点（现象同标定）,第三节 一般杂质检查,第四章 药物的杂质检查,供试品中水分含量（）,A 为供试品所消耗费休氏试液的容积，ml B 为空白所消耗费休氏试液的容积,ml F 为每1ml费休氏试液相当于水的重量,mg 为供试品的重量，mg,第三节 一般杂质检查,第四章 药物的杂质检查,（三）注意事项（1）各种试剂控制水分在0.1以下，碘应置硫酸干燥器内干燥48小时以上，二氧化硫必要时做脱水处理；（2）费休氏试液应遮光，密封，置阴凉干燥处保存24小时以 上再标定。临用前应重新标定浓度；（3）碘和二氧化硫在所用仪器应干燥，并能避免空气中水分 的侵入；（4）阴雨天或湿度较大的环境尽量避免测定；（5）本法不适用于氧化剂、还原剂的水分测定。,第三节 一般杂质检查,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查,【实例分析】注射用普鲁卡因青霉素的水分检查 中国药典（2005年版）规定：注射用普鲁卡因青霉素的含水量不得过3.5。现有一批注射用普鲁卡因青霉素，经取样后，精密称取0.2616g，置干燥具塞玻瓶中，加无水甲醇5ml充分振摇后，用费休氏试液滴定至溶液由浅黄色变为红棕色，消耗费休氏试液2.32ml；另取甲醇5ml，同法滴定，消耗费休氏试液0.12ml，求本品的含水量（临用前标定费休氏试液，已知每1ml费休氏试液相当于3.43mg的水）,并判断此项是否合格（水分）。,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查,分析,该药实际含水量2.83.5的限度，故水分合格。,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查,九、残留溶剂测定法 药物中的残留溶剂系指在原料药或辅料的生产中，以及在制剂制备过程中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂,中国药典（2010年版）根据毒性大小将残留有机溶剂划分为四类。除另有规定外，第一、第二、第三类溶剂的残留限度应符合药典规定；第四类溶剂，应在保证安全、有效用药的前提下，根据生产工艺的特点制定相应的限度,第四章 药物的杂质检查,第三节 一般杂质检查,（一）残留溶剂测定的方法：气相色谱法 1. 色谱柱：毛细管柱或填充柱；根据固定液极性大小，可分为非极性色谱柱、极性色谱柱、中极性色谱柱及弱极性色谱柱 2. 系统适用性试验：毛细管柱理论板数不低于5000，填充柱理论板数不低于1000；待测物色谱峰与其相邻色谱峰的分离度应大于1.5；对照液连续5次进样后，内标法时待测物与内标物峰面积比的相对标准偏差不大于5%,外标法待测物峰面积的RSD不大于10%,3. 进样方式（1）顶空进样 除另有规定外，精密称取供试品0.11.0g，根据供试品和有机溶剂的溶解性，溶剂可用水或二甲基亚砜等。浓度满足定量测定需要（2）溶液直接进样,4. 供试品测定（1）对于未知的残留溶剂