药物分析-第四章-4

,第四章 药物的杂质检查,第四节 质检特殊杂查,一、特殊杂质概念二、检查方法的特点三、特殊杂质检查方法类型,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,一、特殊杂质概念 一般是某药物在生产和储存过程中引入的原料、副产物、中间体、分解产物等有机物质,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,二、检查方法的特点 1.杂质与药物结构相似，故理化性质相近，需选择杂质 特异性检查方法； 2.在无杂质特异性方法时，可采用先分离，后检查的方法 ，故色谱法是常用的杂质检查方法,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,三、常用检查方法类型（一）利用药物与杂质在物理性质方面的差异 如乙醇中的杂质杂醇油（二）颜色的差异（三）溶解行为差异（四）旋光性质的差异,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,（五）光吸收性质的差异 1.紫外光吸收性质差异检查肾上腺素中的酮体,酮体,肾上腺素,肾上腺素的盐酸溶液（2mg/ml）在310nm处的吸光度不得过0.05。已知酮体在该波长处的吸收系数 为453，计算出酮体的限量。,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,2原子吸收分光光度法 原子吸收分光光度法主要用于金属元素的测定。,供试液 a,供试液限量的对照液 b,b-aa : 合格b-aa : 不合格,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,3红外分光光度法红外分光光度法在杂质检查中主要用于药物中无效或低效晶型的检查 （六）吸附或分配性质的差异 色谱法可以利用药物与杂质吸附或分配性质的差异，实现共存物分离后测定，在杂质检查中广泛应用。常用的色谱方法有薄层色谱法、纸色谱法、高效液相色谱法和气相色谱法等,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,1薄层色谱法（1）选用实际存在的待检杂质对照品法 例1.枸橼酸乙胺嗪中检查N甲基哌嗪 供试品50mg/ml的甲醇溶液，N甲基哌嗪对照品50g/ml的甲醇溶液，各取10l分别点加于同一硅胶G薄层板上，展开剂展开后，晾干，显色，供试品溶液如果在与对照品溶液的主斑点相同的Rf处显示杂质斑点，则杂质斑点的颜色不得深于对照品溶液的主斑点（0.1)。,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,（2）选用可能存在的某种物质作为杂质对照品例2.对乙酰氨基酚中有关物质检查 供试液：1.0g供试品，加乙醚5ml，得到供试品溶液对照液：对氯苯乙酰胺 50ug/ml的乙醇溶液照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液200l与对照溶液40l，分别点于同一硅胶GF254 薄层板上。展开后，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视，供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。计算限量。,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,1,2,3,在中国药典（2010年版）中，该项检查已采用高效液相色谱法,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,（3）高低浓度对比法 当杂质的结构不能确定，或无杂质的对照品时，可采用此法。 将供试品溶液按限量要求稀释至一定浓度作为对照溶液，与供试品溶液分别点加于同一薄层板上，展开后，供试品溶液所显杂质斑点不得深于对照溶液所显主斑点颜色。 采用本法时应注意供试品与所检杂质对显色剂所显的颜色应相同，显色灵敏度也应相同或相近,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,例3. 西咪替丁中有关物质检查，对照液为西咪替丁供试液（20mg/ml）稀释至0.1mg/ml所得。取10ul，点样，要求供试液杂质斑点不得深于对照液主斑点,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,（4）在检查条件下，不允许有杂质斑点 本法所检杂质的限量为其在检查条件下参与显色反应的灵敏度。例4.盐酸阿米替林有关物质的检查 供试品溶液（10mg/ml），在硅胶G板上点样5l，以三氯甲烷甲苯（1：1）展开后，晾干，喷以甲醛溶液硫酸（4：96）使显色，立即在紫外灯（365nm）下检视，除主斑点外，不得显其他斑点。,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,当无适合的杂质对照品或杂质斑点颜色与主成分斑点的颜色不同，或显色灵敏度不同时，可选用与供试品相同的合格药物作为对照品。如检查氢溴酸加兰他敏中的其他生物碱，方法为取供试品溶液与用合格的氢溴酸加兰他敏配制的对照溶液分别点加于同一薄层板上，经展开显色后，供试品如显杂质斑点，不得多于对照品，颜色也不得更深。,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,2.高效液相色谱法 本法分离效能高，灵敏度强，结果准确，应用范围广。高效液相色谱法检查杂质的方法有以下几种：（1）内标法加校正因子测定供试品中某个杂质含量 (2) 外标法测定供试品中某个杂质含量 (3) 加校正因子的主成分自身对照法（4）不加校正因子的主成分自身对照法 (5 )面积归一化法,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,（1）内标法加校正因子测定供试品中某个杂质含量 测定校正因子 精密称（量）取对照品和内标物质，配成校正因子测定用的对照溶液。取一定量注入仪器，记录色谱图。测量对照品和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算校正因子：,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,As：内标物质的峰面积或峰高； Ar：对照品的峰面积或峰高； Cs：内标物质的浓度； Cr ：对照品的浓度。,对照品峰,内标物峰,6min 8min,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,样品测定 取含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图，测量供试品中待测成分（或其杂质）和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量: Ax：供试品（或其杂质）峰面积或峰高； As：内标物质的峰面积或峰高；Cx：供试品（或其杂质）的浓度； Cs ：内标物质的浓度； F：校正因子。,内标物峰,杂质峰,4min 6min 8min,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,(2)外标法测定供试品中某个杂质含量 精密称（量）取对照品和供试品，配制成溶液。分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品溶液和供试品溶液中待测成分的峰面积（或峰高），按下式计算含量：,微量注射器不易精确控制进样量，以定量环或自动进样器进样为宜。,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,(3)加校正因子的主成分自身对照法测定杂质校正因子： f 此校正因子可直接载入各品种项下，用于校正杂质的实测峰面积,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,计算杂质的校正峰面积 A校 fA杂 ,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,限量检查 供试品溶液稀释成与杂质限度相当的溶液作为对照溶液，进样，对照溶液的主成分色谱峰的峰高约达满量程的1025或其峰面积能准确积分。 分别取供试品溶液和对照品溶液进样，供试品溶液的记录时间一般应为主成分色谱峰保留时间的2倍，测量供试品溶液色谱图上各杂质的峰面积，分别乘以相应的校正因子，与对照溶液主成分的峰面积比较，计算各杂质含量。,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,【实例分析】盐酸四环素中有关物质检查 取本品适量，用0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为供试品溶液。精密量取2ml,置100ml量瓶中，加0.01mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,10,10,1,2 3 4 5,2,1,3 4 5,盐酸四环素对照液,盐酸四环素供试液,1.盐酸四环素2.差向四环素3.差向脱水四环素4.金霉素5.脱水四环素,1.盐酸四环素2.差向四环素3.差向脱水四环素4.金霉素5.脱水四环素,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,（1）调节灵敏度 ，使对照液主成分色谱峰的峰高约为满量程 20；（2）测量峰面积 供试品溶液、对照溶液各10l进样，记录色谱图至主成分峰保留时间的2.5倍。土霉素、4-差向四环素、金霉素、脱水四环素、差向脱水四环素的校正因子f分别为1.0、1.42、1.39、0.48和0.62 ，其峰面积分别不得大于对照液主峰面积的0.25倍。假设上述杂质的峰面积分别为472、2864、926、1748、879，对照液主成分峰面积为6144。,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,中国药典（2010年版）规定：土霉素、4-差向四环素、金霉素、脱水四环素、差向脱水四环素校正后的峰面积分别不得大于对照液主峰面积的0.25倍、1.5倍、0.5倍、0.25倍、0.25倍A. 土霉素：Af4=4721.04 =1888 6144 故， 土霉素含量低于限量，合格,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,B. 4-差向四环素：Af0.528641.42 4067 509761441.5，合格C.金霉素：Af9261.39 1287 61440.53072 20283072, 合格D. 脱水四环素：Af17480.48 839 61440.2515368391536 ，合格,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,E. 差向脱水四环素：Af8790.62 545 61440.25 1536 5451536 ，合格有关物质限量合格。,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,（4）不加校正因子的主成分自身对照法 没有杂质对照品时，无法用内、外标法。如果杂质与主成分响应灵敏度相同，相对主成分的校正因子在0.91.1范围内，可采用本法。 本法注意事项： 调节检测灵敏度 记录时间应为主成分色谱峰保留时间的2倍 供试品所含杂质不包括溶剂峰，应除去溶剂峰面积,第四章 药物的杂质检查,第四节 特殊杂质检查,(5)面积归一化法 取供试品溶液，进样分离后，测定杂质峰面积及其总和占总峰面积的百分率，不得过限量。 由于各杂质与药物在色谱峰信号响应的灵敏度可能存在差异，而且当杂质限量较低时，杂质量与主成分量不一定在同一线性范围内，面积积分精度和准确度不相同等都会使测定误差加大，本法通常只能粗略考察供试品中的杂质含量。除另有