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文档简介

染色体的分带技术 目的要求 了解染色体C带 G带制备的基本原理 掌握染色体C带 G带的染色技术 C带显示的实验原理 DNA分子经酸 碱 盐处理可以发生不同的变化 酸处理可以使DNA分子脱嘌呤 碱处理可以使DNA变性及溶解 2 SSC溶液处理可以使DNA骨架断裂并使片断溶解 在C带显示过程中 染色体臂的DNA被酸 碱 盐选择性地破坏了 着色较浅 而结构性异染色质区哉DNA结构紧密 从而保护了C带区的异染色质免受酸 碱 盐的破坏 使其容易着色 从而产生C带 实验用品 1 器材 显微镜 恒温水浴箱 载玻片 染色缸等 2 试剂 0 2MHCl 5 Ba OH 2 2 SSC溶液 Giemsa染液 1 15M磷酸缓冲液等 3 材料 小鼠染色体标本 方法与步骤 取老化一周的染色体标本 室温条件下用0 2MHCl处理30分钟 DW冲洗三次后 转入50 5 Ba OH 2中保温10 15分钟 自来水冲洗3 5分钟 再用DW充分分冲洗掉玻片上附着的Ba OH 2 将标本放到65 2 SSC处理60分钟 DW冲洗 空气干燥 Giemsa染色10分钟 冲洗 镜检 结果显示 G带显示实验原理 由于构成染色体的DNA一级序列的差异 导致与之结合的蛋白质的状态也有所不同 如果染色体上某一区域DNA为重复序列 转录活性低 与之结合的蛋白质也较稳定 因此较利于染料的积累 从而显出暗带 相反 若某一区域的DNA富含转录活性的结构基因 包装它们的蛋白质也较松散 着色较浅 显明带 实验用品 1 器材 显微镜 恒温水浴箱 载玻片 染色缸等 2 试剂 0 25 胰蛋白酶 Giemsa染液 磷酸缓冲液等 3 材料 小鼠染色体标本 实验步骤 将老化七天的染色体标本放入60 温箱中烤片2小时以上 取出后放入0 25 的胰蛋白酶溶液中作用3 15秒 取出后 GKN溶液漂冼15秒 G
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