Ⅰ期非小细胞肺癌中侵袭与转移相关蛋白的表达及其预后意义(一).docx

期非小细胞肺癌中侵袭与转移相关蛋白的表达及其预后意义(一)【摘要】目的：研究期非小细胞肺癌（NSCLC）中侵袭与转移相关蛋白Cd44v6,癌胚抗原（CEA）,钙粘连蛋白（Ecadherin）,基质金属蛋白酶2(MMP2),MMP9,连环素（Catenin）的表达及其与预后的关系.方法：用组织芯片结合免疫组织化学法检测80例期非小细胞肺癌患者石蜡标本中Cd44v6，CEA，Ecadherin，MMP2，MMP9，Catenin的表达，对表达强度进行6级评分，结合临床病理数据分析各标志物的表达与预后的关系.结果：本组80例期NSCLC的5a生存率为68%.单因素分析中，仅MMP2有预后意义（Logranktest,P=0.046）.在包括Cd44v6，CEA，Ecadherin，MMP2，MMP9，Catenin，年龄，性别，病理类型的多因素分析中，也仅有MMP2是影响预后的独立因子，MMP2高表达者预后较差（P=0.003）.结论：在6种侵袭与转移相关蛋白中，只有MMP2可作为期NSCLC的预后因子，MMP2高表达者预后较差.【关键词】癌,非小细胞肺；预后；组织芯片,生物学标记【Abstract】AIM:ToinvestigatetheexpressionsofCd44v6,carcinoembryonicantigen(CEA),Ecadherin,matrixmetalloproteinase2(MMP2),MMP9,Catenininstagenonsmallcelllungcancer(NSCLC)andtheirprognosticvalues.METHODS:Theexpressionsofthesixproteinswereevaluatedbyimmunohistochemistrywithtissuechipinparaffinembeddedspecimensfrom80consecutiveNSCLCpatients.Clinicopathologicaldatawereemployedtoinvestigatetheexpressionrulesandtheirprognosticvalues.RESULTS:The5yearsurvivalrateofthese80stageNSCLCpatientswas68%.Amongthe6proteins,onlyMMP2wasofprognosticvalueinLogranktest（P=0.046）.InCoxmultivariateanalysiswhichemployedthesixbiomarkers,includingCd44v6,CEA,Ecadherin,MMP2,MMP9,Catenin,age,sex,andpathologicalsubtype,MMP2remainedtheonlyindependentprognosticfactor（P=0.003）.CONCLUSION:Amongthesixproteinsrelatedtocancerinvasionandmetastasis,MMP2istheonlybiomarkerwhichhasprognosticvalueinstageNSCLC.【Keywords】carcinoma,nonsmallcelllung;prognosis；tissuechip,biologicalmarkers0引言对于期或者期的早期非小细胞肺癌(nonsmallcelllungcancer,NSCLC)患者，目前的主要治疗手段是外科手术，但即使是IA期的患者术后仍有约30%遭遇复发或转移.近几年来NSCLC辅助化疗（包括新辅助化疗和术后辅助化疗）和靶向治疗发展迅猛，但对于如何确定同一肿瘤淋巴结转移（tumornodemetastasis，TNM）分期中的患者，特别是I期的NSCLC患者是否需要辅助治疗的问题仍然悬而未决，也就是说还存在“过度治疗”或“治疗不足”的问题.肿瘤细胞对细胞间连接复合体的破坏以及对细胞外基质的降解是肿瘤转移发生过程中的重要步骤.癌胚抗原（carcinoembryonicantigen,CEA），基质金属蛋白酶2(matrixmetalloproteinase2，MMP2)，MMP9，钙粘连蛋白（Ecadherin），连环素（Catenin）等是参与这一过程的重要成员.本研究利用组织芯片技术，通过免疫组化方法，检测了期NSCLC组织中与恶性肿瘤侵袭和转移相关的蛋白MMP2等蛋白的表达情况，探讨它们对期NSCLC预后的影响，以期发现有助于界定高危患者的分子生物学指标.1对象和方法1.1对象198912/200012中山大学肿瘤防治中心收治期NSCLC患者80（男60，女20）例，年龄1672（中位55）岁.TNM分期：A期（T1N0M0）10例，B期（T2N0M0）70例.病理类型：鳞癌28例，腺癌52例.所有患者当时未进行术后辅助化疗.1.2方法1.2.1组织芯片的制备和免疫组化检测利用存档的石蜡标本，参考Kononen等1的方法在陕西超英生物科技有限公司实验室制作完成组织芯片.免疫组化染色步骤按试剂盒说明进行.阳性对照采用已知阳性标本，PBS代替一抗作阴性对照.1.2.2结果判断根据阳性细胞占全部细胞的比例，将无阳性细胞者记录为“0”；阳性细胞数10%记录为“”；阳性细胞数10%25%记录为“”；阳性细胞数26%50%记录为“”；阳性细胞数50%75%记录为“”；阳性细胞数75%记录为“”.两位病理学专家独立阅片，确定免疫组化结果，不一致处协商后取得共识.1.2.3随访患者资料随访收集方式包括：定期门诊复查、信访登记、电话随访等.生存时间按天计算，对死亡患者，生存时间为手术日期至患者死亡日期的天数；对生存患者，生存时间为手术日期至最后一次随访日期的天数.统计学处理：采用SPSS11.0统计软件进行数据处理.单因素生存分析用KaplanMeier法；用Cox比例风险模型进行多因素分析，P0.05为有统计学差异.2结果80例患者随访至20060431(53/80)，随访率100%.随访时间为1505392(中位2539)d.随访期间53例生存，死亡27例，其中死于肿瘤者26例，死于脑溢血1例,5a生存率为68%.Cd44v6和Catenin的阳性表达位于细胞浆和细胞膜，CEA，MMP2，MMP9，ECadherin的阳性表达位于细胞质.经单因素分析，各生物学标志物中，仅MMP2的表达水平与预后相关（P=0.046,表1）.MMP9，CEA和cd44v6的表达水平与期NSCLC的预后无显著关系（表1）.另外ECadherin和Catenin亦与期NSCLC的预后无关（P值分别为0.942和0.888）.将Cd44v6，CEA，Ecadherin，MMP2，MMP9，Catenin，性别，