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发育生物学实验 2016年 一 拟南芥简介二 实验技术 农杆菌介导拟南芥转化 实验1拟南芥室内培养观察及农杆菌转化拟南芥 农杆菌介导拟南芥的转化 实验目的 1 学习真核生物的转基因技术及农杆菌介导的转化原理2 掌握农杆菌介导转化拟南芥的实验方法3 了解拟南芥的生理特点及在基因工程实验中应用 实验材料 农杆菌GV3101重组菌株 重组双元表达载体pCAMBIA1300 拟南芥 实验试剂 LB液体培养基 Kan 卡那霉素 Rif 利福平 转化介质 MS培养基 5 蔗糖 0 03 SilwetL 77 KOH调pH5 7 实验原理 农杆菌介导拟南芥的转化 实验原理 农杆菌介导拟南芥的转化 农杆菌的感染与生存 技术应用 一种方便 高效的植物转基因方法 多用于转化双子叶植物 经过改进后也逐渐用于单子叶植物的转化 实验原理 农杆菌介导拟南芥的转化 McKinneyetal2001 拟南芥转基因技术 InplantaAgrobacterium mediatedgenetransferbyinfiltrationofadultArabidopsisthalianaplants CRAcadSciSerIIISciVieLifeSci1 影响因素MSsalts hormone ODofbacteria vacuum etc 无影响Planthealth非常重要因素2 转化效率 1 3 转化步骤a GrowhealthyArabidopsisplantsuntiltheyareflowering 8 高压灭菌 1 MS培养基 121 C 15分钟 2 玻璃烧杯 200ml2个 500ml1个 50ml的三角瓶20个 培养皿8个 4培养皿装滤纸 6片 平皿 3 枪型镊子 剪刀各2把 4 1ml 200ul 20ul的tip头各1盒 5 无菌水500 700mL 2 拟南芥转基因技术 McKinneyetal2001 1 影响因素MSsalts hormone ODofbacteriaetc 2 3 4 作业预习 烟草叶片愈伤组织诱导和器官
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