甾体激素类药物鉴别

甾体激素类药物的鉴别 演讲者 史颖超048012126 鉴别 what why 鉴别试验 是根据药物的分子结构 理化性质 采用物理 化学或生物学方法来判断药物的真伪 是药检工作中的首项任务 只有在药物鉴别无误的情况下 才能进行药物的杂质检查 含量测定 A B C D 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 基本结构 甾体激素类药物均具有环戊烷骈多氢菲母核 鉴别方法 制备衍生物测熔点 光谱法 色谱法 呈色反应官能团反应 化学鉴别法 UVIR TLCHPLC 一 与强酸的呈色反应 硫酸呈色反应应用最广1 操作简便2 反应灵敏3 操作条件不易掌握 某些甾体激素药物与硫酸 乙醇或硫酸 甲醇作用而呈色 如甲睾酮 甾体激素类药物 呈色 H2SO4H3PO4HClO4HCl 荧光 甾体母核 1 C17 醇酮基 还原性 能与碱性酒石酸铜试液 斐林试液 氨制AgNO3试液 多伦试液 四氮唑盐反应呈色 其中以四氮唑盐的显色反应最为常用 不但可用作层析法的显色剂 还可用于含量测定 适用 肾上腺皮质激素 二 官能团的反应 H2O CH3COOH OH 醋酸泼尼松 深红色的三苯甲鐕 四氮唑盐 2 C3 酮基和C20 酮基 与羰基试剂2 4 二硝基苯肼 异烟肼 硫酸苯肼反应生成腙 HCl 黄色 3 20 双腙 室温下长时间加热 适用 具有甲酮基的甾体激素类药物 3 C17 甲酮基的呈色反应 能与亚硝基铁氰化钠 间二硝基酚 芳香醛反应呈色 孕激素 黄体酮专属性反应 称为 碱性硝普钠反应 黄体酮 其他甾体 亚硝基铁氰化钠 蓝紫色 淡橙色或不显色 适用 雌激素类药物 4 酚羟基的呈色反应 能与重氮苯磺酸发生偶合反应 生成红色偶氮染料 苯甲酸雌二醇 H 红色 5 乙炔基沉淀反应 适用 含炔基的甾体激素类药物 炔雌醇 炔诺酮 机理 HNO3 NaOH滴定 电位法指示终点 原理 一些甾体激素类药物具有醋酸酯 戊酸酯及已酸酯的结构 可先行水解 根据水解产物来鉴别 6 水解产物的反应 适用 本类药物C3 C17或C21位上羟基的酯 香 戊酸 己酸酯类药物 有特臭 醋酸酯类药物 有机氟 F 有机破坏 有机氯 7 卤元素的呈色反应 茜素氟蓝 硝酸亚铈 硝酸 硝酸银 呈蓝紫色 Cl AgCl 卤素在母核上 氧瓶燃烧法破坏如地塞米松磷酸钠 卤素在侧链上 加热水解法破坏如丙酸倍氯他索 总结 制备衍生物测定其熔点 原理 1 甾醇 甾酮类药物可与一些试剂反应生成酯 肟 缩氨脲 测定其熔点进行鉴别 2 利用醇制碱液水解甾体酯类生成相应的母体 测定其熔点进行鉴别 特点 繁琐费时 但专属性强 目前仍为一些国家药典采用 炔雌醇 m p 201 紫外分光光度法 原理 具有C C C O共轭系统 3 酮 240nm和C C C C共轭系统 苯环 B带 280nm K带 220nm 1 可用规定波长处的吸收度鉴别如 曲安西龙2 吸收度的比值法 如 丙酸倍氯米松 3 酮 240nm 红外分光光度法 必要性 1 许多重要的甾体激素药物紫外光谱非常相似 紫外光谱鉴别缺乏专属性 2 甾体激素药物化学结构上仅有微小的差异 也难以用化学鉴别法来区分 红外分光光度法的优势 1 对样品无破坏 样品用量较少2 特征性极强 信息量丰富 每种化合物都有红外吸收 从红外光谱可以得到大量信息 官能团区的吸收反映了化合物中官能团的特征 而指纹区的吸收对于指认分子提供了可靠的依据 1505cm 1 3505cm 1 3300cm 1 1590cm 1 3610cm 1 酚羟基 醇羟基 1616cm 1 苯环的骨架振动 亚甲基 角甲基吸收带 CH 苯环指纹区 黄体酮 薄层色谱法 特点 简便 快速 分离效能高 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别ChP很多甾体激素制剂均用该法鉴别 应用范围 甾体激素制剂的鉴别 纯度检查以及含量测定前的分离和制剂稳定性的研究 方法 对照品法1 供试品点样通常需做前处理 如有机溶剂提取 消除注射液 片剂及软膏剂等辅料的干扰 2 要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同 显色方法 多用荧光显色法或荧光淬灭法荧光显色 高效液相色谱法 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别方法 对照品法一般在含量测定的同时进行鉴别 要求在含量测定项下记录的色谱图中 供试品峰的tR与对照品峰的tR一致 紫外光谱褶合变换可视化指纹谱鉴别 拓展 袁丽霞 张中湖 甾体激素的紫外光谱褶合变换可视化指纹谱鉴别研究 J 药学实践杂志 2007 25 1 褶合变换 是根据正交分析理论 对于任意一条光谱曲线 在某个邻域内 即其中的某一小段曲线 可以用正交多项式任意逼近 对于阶次相同的正交分量 可以通过改变变换窗口的大小获得不同的光谱 从而在不同阶次上可以得到一系列褶合变换光谱 相应的褶合光谱是同阶次的导数光谱的线性组 科学计算可视化技术 是数值计算中最直观最形象的方法 它从大量的原始数据中提取有效数据开始 通过映射生成绘制图像的几何原语 随之利用交互控制对几何原语选定帧合成 色彩 纹理及阴影等参数完成图像的绘制 最终显示出绘制的图像 研究方法 选取地塞米松等23种结构相近甾体激素 运用褶合变换挖掘紫外光谱的特征信息并通过科学计算可视化技术获取相应指纹谱的表征 并利用夹角余弦法计算指纹谱之间的相似系数 并考察方法的效能指标 袁丽霞 张中湖 甾体激素的紫外光谱褶合变换可视化指纹谱鉴别研究 J 药学实践杂志 2007 25 1 结果 本文所选23种甾体激素紫外光谱形状相似 最大吸收波长多在239 242nm 其中黄体酮 甲睾酮与其他皮质激素类药的相似系数均小于0 895 说明不同类的甾体激素之间相似系数有较大差异 同属于皮质激素类的哈西奈德与地塞米松 醋酸地塞米松 倍他米松 泼尼松 丙酸倍氯米松之间的相似系数最大为0 726 而地塞米松 醋酸地塞米松 倍他米松 泼尼松 丙酸倍氯米松相互之间的相似系数最小为0 907 这是因为哈西奈德中的不饱和共轭结构为4 烯 3 酮 其他五种皮质激素为1 4 烯 3 酮 说明少了位烯键对相似系数的影响非常大 地塞米松 醋酸地塞米松 倍他米松相互之间的最小相似系数为0 998 这是因为醋酸地塞米松只是地塞米松21 羟基醋酸酯化 地塞米松与倍他米松只是16 甲基的 之别 这说明母核相同侧链不同或者与酸成酯对相似系数的影响非常小 但是仍然可以区分 精密度 所选5种药物各自的相似系数的日内精密度均小于0 17 日间精密度均小于0 21 耐用性 所选药物不同浓度溶液的光谱相似系数都大于0 993重复性 在不同仪器