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分解纤维素的微生物的分离 纤维素酶纤维素酶是一种复合酶 一般认为它至少包括三种组分 即C1酶 外切酶 CX酶 内切酶 和葡萄糖苷酶 前两种酶使纤维素分解成纤维二糖 第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖 取二支20mL的试管 实验 纤维素酶分解纤维素的实验 各加入一张滤纸条 各加入pH4 8 物质量为0 1mol L的醋酸 醋酸钠缓冲液11ml和10ml 甲乙 在乙试管中加入1mL纤维素酶 两支试管固定在锥形瓶中 放在140r min的摇床上振荡1h 结果 乙试管的滤纸条消失 讨论 乙试管的滤纸条为什么会消失 甲试管的作用是什么 提示 本实验的自变量是纤维素酶的有无自变量的操纵方法是 在一支试管中添加适量 1mL 的纤维素酶溶液 另一支试管不添加纤维素酶 但需加入等量的缓冲液 不能加入蒸馏水 否则会影响溶液的pH 实验分析 P27的小实验是如何构成对照的 可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌 培养基成分分析 将细菌涂布在只有尿素做氮源的选择培养基上 将细菌涂布在只有纤维素粉做碳源的选择培养基上 固体培养基 液体培养基 筛选菌株 选择培养 思考 本实验的流程与课题2中的实验流程有哪些异同 课题2是将土样制成的菌悬液直接涂布在以尿素为唯一氮源的选择性培养基上 直接分离得到菌落 本课题通过选择培养 使纤维素分解菌得到增殖后 再将菌液涂布在选择培养基上 其他步骤基本一致 按照课题1的稀释操作方法 将选择培养后的培养基进行等比稀释101 107倍 3 梯度稀释 4 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 1 制备鉴别培养基 2 涂布平板 将稀释度为104 106的菌悬液各取0 1ml涂布到平板培养基上 30 倒置培养 鉴别纤维素分解菌的培养基 水溶性羧甲基纤维素钠 方法一 先 再加入刚果红进行颜色反应 方法二 在时就加入刚果红 培养微生物 倒平板 5 刚果红染色法 挑选产生透明圈的菌落 一般即为分解纤维素的菌落 这两种方法各有哪些优点与不足 颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用 操作繁琐刚果红会使菌落之间发生混杂 操作简便不存在菌落混杂问题 1 产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈2 有些微生物能降解色素 形成明显的透明圈 在细菌分解尿素的化学反应中 细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨 氨会使培养基的碱性增强 pH升高 在培养基中加入酚红指示剂 如果pH升高指示剂会变红 刚果红可以与纤维素形成红色复合物 当纤维素被纤维素酶催化分解后红色复合物无法形成 培养基上就会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈 观察菌落周围是否有着色的环带出现来鉴定尿素分解菌 观察菌落周围是否出现透明圈来筛选纤维素分解菌 脲酶检测法 刚果红染色法 在产生明显的透明圈的菌落 挑取并接种到纤维素分解菌的选择培养基上 在300C 370C培养 可获得纯化培养 6 纯化培养 为了确定分离得到的是纤维素分解菌 还需要进行 实验 纤维素酶的发酵方法有 发酵和
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