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文档简介

蛋白质连接技术 蛋白质交联系指将小分子物质 如药物 半抗原等 或大分子物质 如酶 蛋白毒素等 以共价键的方式连接于蛋白质分子 以制备人工抗原 酶标抗体 载体释放药物 抗体导向药物和免疫毒素等 交联方法 游离氨基游离羧基苯基酚基巯基羟基咪唑基吲哚基胍基 重氮化法 蛋白质连接分子酚羟基的邻位 咪唑环 吲哚环含芳香胺的化合物 副反应多 故一般限于人工抗原的制备 戊二醛法 连接两个伯胺 最温和的交联反应之一 可在4 40 温度范围 pH6 0 8 0的缓冲水溶液中进行 但是缓冲组份中不得含有氨基化合物 本交联方法易形成相同蛋白间的连接 产物的均二性较差 因此 多用于酶标抗体的制备 过碘酸盐氧化法 蛋白质连接分子氨基邻二醇 比较温和 可在常温和中性pH的条件下进行 混合酸酐法 蛋白质连接分子伯氨基羧基 碳二亚胺法 蛋白质连接分子伯氨基羧基 由于碳二亚胺的缩合反应没有选择性 易形成蛋白分子间的自身聚合 产生非均一性产物 先将含羧基的药物或半抗原分子与EDC反应 活化羧基后 再加入蛋白反应物 可以减少蛋白分子交联 活泼酯法 蛋白质连接分子伯氨基羧基 多元酸酐法 蛋白质连接分子伯氨基氨基 羟基 二异氰酸酯法 蛋白质连接分子伯氨基氨基 偶氮苯甲酸法 蛋白质连接分子伯氨基苯基 O 羧甲基羟胺法 蛋白质连接分子伯氨基酮基 对 肼基苯甲酸法 叠氮化法 蛋白质连接分子伯氨基羧酸甲酯衍生物 氯乙酸钠法 蛋白质连接分子伯氨基羟基 亚胺酸酯法 蛋白质连接分子伯氨基氨基 卤代硝基苯法 蛋白质连接分子氨基 羟基 巯基氨基 羟基 巯基 Mannich反应法 蛋白质连接分子伯氨基酮 酚类 苯醌法 蛋白质连接分子氨基 羟基 巯基氨基 羟基 巯基 E11man试剂法 两分子蛋白的连接 E11man试剂即5 5 二硫 2 2 双硝基苯甲酸 DTNB 该试剂可以与巯基作用 马来酰亚胺基类活泼酯法 蛋白质连接分子伯氨基巯基 SPDP试剂法 异型双功能交联剂N 羟基琥珀亚胺基 3 2 吡啶基二硫 丙酸酯 SPDP 蛋白质连接分子伯氨基巯基 氨基 苯丁酸氮芥衍生物法 蛋白质连接分子伯氨基氨基 卤代乙酰衍生物法 连接基团 氨基 巯基 双马来酰亚胺试剂法 连接两个巯基 三氯三嗪试剂法 蛋白质连接分子伯氨基羟基 必须注意 第一个分子中不能含有氨基及巯基等亲核性较强的基团 否
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