血清总蛋白(TP)的测定及常规实验技术多媒体教学软件的学习

血清总蛋白 TP 的测定及常规实验技术多媒体教学软件的学习 一 原理二 测定方法三 参考值四 临床意义五 方法学评价六 注意事项 分光光度测定技术 光线的本质是电磁波的一种 有与电磁波和X线类同的性质 光线有不同的波长 肉眼可见彩色光称为可见光 波长范围在400 750nm 小于400nm的光线称为紫外线 大于750nm的光线称为红外线 当光线通过透明溶液介质时 其辐射能量有部分被吸收 一部分被透过 所以光线射出溶液介质之后光能被减少 例如 可见光透过有色溶液介质之后 或红外线通过多种气体后 均被吸收部分光能 这种光能的吸收的和透过可用于某些物质的定性定量分析 一般应用范围可在测定浓度的千万分之一至百分之一 分光分析所依据的定律是Lambert氏和Beer氏定律 Lambert氏定律一束单色光通过透明同业介质时 光能被吸收一部分 被吸收光能的量与溶液介质厚度有一定比例关系 见图1 1 即 式中K为吸光系数 I0为入射光强度 I为通过溶液介质后的光强度 L为溶液介质的厚度 Beer氏定律的溶液介质浓度变化代替溶液介质厚度的改变 光能的吸收与厚度改变有类同的关系 即一束单色光通过溶液介质时光能被溶液介质吸收一部分 吸收多少与溶液介质浓度有一定比例关系 依据Lambert氏定律中同样的推导 可得出下式 式中C为溶液介质的浓度 Lambert氏定律和Beer氏定律合并 即 和 式合并为 令则A KCL A LgT式中A为光密度 又称吸光度 T为透光度 式为Lambert Beer氏定律的物理表示式 其含义为 一束单色光通过溶液介质后 光能被吸收一部分 吸收多少与溶液的浓度和厚度成正比 此式为分光分析法的基本计算式 当a b为两种不同浓度同种溶液时即 Aa KaCaLaAb KbCbLb且Ka KbLa Lb故 分光光度法的计算式 T6新世纪紫外可见分光光度计吸光度测定操作规程1 将空白液 测定液 标准液分别倒入比色皿中 2 3液量 2 在主菜单中 光度测量功能扩展系统应用 选择 光度测量 按 ENTER 进入 光度测量 光度测量 Absnm 界面 3 在 光度测量 界面按GOTO 进入光度测量波长界面 按数字输入波长 按 ENTER 确认 4 在 光度测量 光度测量 Absnm 界面 按SET键进入光度方式界面 选择 光度方式 按 ENTER 至Abs 按下键选试样池菜单 按 ENTER 进入试样室界面 选择试样室后按 ENTER 确认 五连池 按下键选择样池数 以 ENTER 至数码 3或2 按下键选 空白溶液校正 按 ENTER 选 是 5 按 RETURN 返回至 光度测量 Abs设定的波长nm界面 按ZERO键消除 bs为0 000后 按START STOP键 两次 测定并读取各管吸光度 血清总蛋白 TP 的测定一 原理 血清中蛋白质分子的肽键与双缩脲试剂中的Cu 结合形成紫色化合物 其色度与总蛋白的浓度成正比 在546波长下进行比色测定 实际上凡是分子内含有两个氨基甲酰基 CONH2 的化合物 不论直接相连或是通过一个氮或碳原子间接连接 均能与双缩脲试剂发生反应 蛋白质分子内含有许多肽键 CONH2 因此可用双缩脲法作比色测定 但应注意的是不仅仅是 CONH2 凡含 CSNH2 C NH NH2或 CH2NH2等基团而具有累似结构的化合物对双缩脲试验亦呈阳性 所以本反应并非为蛋白质所特有 但在体液中 除蛋白质外实际上不存在可与双缩脲试剂显色的物质 各种血浆蛋白质 包括病理的和正常的 呈色的程度基本相同 因此在血浆蛋白的比色测定中 双缩脲反应是比较理想的方法 二 测定方法1 加样 各管补充蒸馏水3ml后充分混匀置37水浴6分钟 室温冷却测定 2 分光光度计测定方法 波长546nm空白管调零 测定标准管和样品管吸光度值 按公式计算测定结果 计算公式 70g L 三 参考值 总蛋白 60 85g L白蛋白 38 48g L球蛋白 22 32g L白蛋白 球蛋白 1 5 2 5 1 四 临床意义 1 白蛋白 球蛋白 1 5 2 5 1 通过计算其比值可以判定肝脏的功能情况 2 总蛋白升高 脱水 皮肤大面积烧伤 发烧 腹泻 呕吐 3 总蛋白降低 大量输液将机体血浆稀释 某些水肿性疾病 长期营养不良和消耗性疾病 4 球蛋白大量降低 机体免疫功能降低 五 方法学评价 1 线性范围 0 0 100 0g L 2 精密度 批内CV 2 8 批间相对极差 3 3 3