GC法同时测定痤疮散中3种成分的含量

GC法同时测定痤疮散中3种成分的含量摘要：目的建立毛细管气相色谱法同时测定痤疮散中百秋李醇、薄荷脑和冰片的含量。方法采用气相色谱法，DB-FFAP（30m0.32mm0.25um)毛细管色谱柱分离测定，FID检测器。进样口温度为250，检测器温度为280，载气为氮气，流速1.24mLmin-1。色谱柱采用程序升温，初始温度100，保持5min，再以5min-1的升温速率升至250。分流比10:1，进样量1L，以水杨酸甲酯为内标进行定量。结果百秋李醇、薄荷脑、冰片（龙脑和异龙脑）在同一色谱条件下获得分离，均在测定范围内呈良好的线性关系，加样回收率分别为102.03%、103.15%、100.10%，RSD分别为0.73%、0.52%、2.66%（n=6），均符合要求。结论该法简便、准确、灵敏度高，重现性好，适用于痤疮散的质量控制。关键词：气相色谱法；痤疮散；百秋李醇；薄荷脑；冰片；含量测定ISimultaneousDeterminationoftheContentof3ComponentsinCuoChuangpowderbyGCAbstract：ObjectiveToestablishamethodforthecontentdeterminationofpatchoulialcohol，methodandsyntheticborneolinCuoChuangpowder.MethodsGCwasappliedtoquantitativeanalysis.FIDasdetectorandnitrogenascarriergas，theexperimentedcolumnwasDB-FFAP(30m0.32mm0.25um)polarcapillarycolumnwithsplitinjectionattheflowrateof1.24mLmin-1.Theinjectortemperaturewas250anddetectortemperaturewas280.Usingtemperatureprogrammed，initialtemperaturewas100，andmaintainedaround5minutes，thenheatedto250atrateof5min-1.Splitratiowas10:1，andinjectionvolumewas1L.Methylsalicylateasinternalstandard.ResultsThelinearrangesofcamphor，patchoulialcohol，method，syntheticborneol(isoborneolandborneol)wererespectively.Theaveragerecoverieswere102.03%(RSD=0.73%，n=6)，103.15%(RSD=0.52%，n=6)and100.10%(RSD=2.66%，n=6)，respectively.ConclusionItisanaccurate，simple，rapid，qualitativemethodwithgoodreproducibilityforthedeterminationofmentholinCuoChuangpowderbyGCmethod.Keywords：GC，CuoChuangpowder，Patchoulialcohol，method，syntheticborneol，Intermediatetesting2目录摘要III1前言32材料与仪器52.1仪器52.2药品与试剂53方法与结果53.1溶液的制备53.2色谱条件63.3专属性试验63.4线性关系考察93.5色谱柱考察113.6重复性试验133.7稳定性考察153.8加样回收率试验153.9样品含量测定174讨论17参考文献20综述22致谢31附录3231前言气相色谱（gaschromatography，GC）是二十世纪五十年代出现的一项重大科学技术成就。这是一种新的分离、分析技术，它在工业、农业、国防、建设、科学研究中都得到了广应用。GC色谱的发展与下面两个方面的发展是密不可分的。一是气相色谱分离技术的发展，二是其他学科和技术的发展。气相色谱法具有以下几个突出的优点：（1）应用范围广，能分析气体、液体和固体。（2）灵敏度高，可测的痕量物质，可进行mg级的定量分析，进样量可在1mg以下。（3）分析速度快，仅用几分钟至几十分钟就可完成一次分析，操作简单。（4）选择性高，可分离性能相近物质和多组分混合物。另外，还有操作稍有失误不会损伤仪器、试样分析费用低等特点。所以，气相色谱法在环境监测中得到广泛的应用。痤疮散为深圳市中医院的医院制剂，标准号：粤ZB20111564（Z）。痤疮散属于中药复方制剂，处方包括白芷、防风、广藿香、大黄、冰片、薄荷、密陀僧、硫磺、黄连等9味中药。其中广藿香为唇形科刺蕊草属植物广藿香Pogostemoncablin(Blanco)Benth.的干燥地上部分。原产于菲律宾，现分布于广东海南、广西、台湾、云南等省区，均为栽培。为芳香化湿中药，功能主治：芳香化湿；和胃止呕；祛暑解表。主湿阻中焦之脘腹痞闵；食欲不振；呕吐；泄泻；外感暑湿之寒热头痛；湿温初起的发热身困；胸闵恶心；鼻渊；手足癣。挥发油为广藿香的主要活性成分，关于其化学成分的报道很多，其主要成分有百秋李醇、广藿香酮、丁香烯、广藿香烯、愈创木烯等1。薄荷为唇形科薄荷属植物薄荷MenthahaplocalyxBriq.的干燥全草。是中华常用中药之一。它是辛凉性发汗解热药，治流行性感冒、头疼、目赤、身热、咽喉、牙床肿痛等症状。外用可治神经痛、皮肤瘙痒、皮疹和湿疹等。薄荷脑4（Menthol）又称薄荷冰是一种化学药剂，薄荷脑系由薄荷的叶和茎中所提取，白色晶体，分子式C10H20，为薄荷和欧薄荷精油中的主要成分，是从薄荷油中提取的一种饱和的环状醇。薄荷脑能刺激人们皮肤或黏膜产生清凉感以减轻不适之痛。对深部血管也可以引起收缩而产生治疗作用。目前在中药成方制剂中应用较广，常入散剂、片剂、丸剂、胶囊剂和橡胶膏软胶囊剂等。因此，为保证产品质量，有必要对中药成方制剂中薄荷脑含量进行质量控制，建立准确、可靠的检验方法。薄荷脑的测定方法，目前较多使用分光光度计、旋光法和气相色谱法等2-5。冰片为龙脑香科植物龙脑香DryobalanopsaromaticaGaerth.f.树脂的加工品，分为天然冰片和合成冰片，主要成分为龙脑、异龙脑和樟脑等6。是常用中药，历史悠久，具有开窍醒神、清热止痛等功效，用于热病神昏，痉厥，中风痰厥，气郁暴厥，中恶昏迷，目赤，口疮，咽喉肿痛，耳道流脓。不少名贵中成药都将其作为主要组成药物之一，因其具有挥发性、易升华，含量易受生产条件、包装、运输、贮存条件的影响，很多含有冰片的中成药都未对此制定明确的质量检测方法和标准。痤疮散的原标准仅收载了黄连、大黄、防风显微鉴别，未收载对广藿香、薄荷、冰片等药味进行质量控制的检测方法。目前，其他制剂中采用GC法测定百秋李醇、薄荷脑和冰片的含量已有文献报道。本试验用毛细管气相色谱（GC）法测定痤疮散中3种成分的含量，能有较好的分离度和较高的理论塔板数。本方法操作简单、快速，结果准确，可用于痤疮散的质量控制7。原药材在制成饮片、储存及制备工艺（提取、混合）过程中不可避免存在损失，油粒混合的均匀程度也存在差别，挥发油含量过低能否达到理论临床效果值得思考，中成药在我国临床用药占据重要地位，成分复杂，有效成分不明确8-9。中药质量标准分析方法验证的目的是证明采用的方法是否适合于相应检测要求。在建立中药质量标准时，分析方需经验证；在处方、工艺等变更或改变原分析方法时，也需对分析方法进行验证。方法验证过程和结果均应记载在药品质量标准起草说明或修订说明中。需验证的分析项目有：鉴别试验、限量检查和含量测定，以及其他需控制5部分（如残留物、添加剂等）的测定。中药制剂溶出度、释放度等检查中，其溶出量等检测方法也应作必要验证。验证内容有：准确度、精密度（包括重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。应视具体方法拟订验证的内容10。2材料与仪器2.1仪器气相色谱仪：GC-2010Plus（日本岛津），包括FID检测器和GC-2010色谱工作站（日本岛津）。色谱柱：（1）DB-FFAP（30m0.32mm0.25um)毛细管柱；（2）DB-WAX(30m0.32mm0.25um)毛细管柱；（3）CP-WAX52CB(25mm0.32mm1.20um)毛细管柱。天平：XS205(瑞士梅特勒)。2.2药品与试剂试剂：乙酸乙酯等均为分析纯；试验用水为超纯水。试药：水杨酸甲酯对照品（批号：110707-201011），百秋李醇对照品（批号：110772-201206），薄荷脑对照品（批号：110728-200506），冰片对照品（批号：110743-200905）均购于中国食品药品检定研究院。收集深圳市中医院生产的3批样品供研究用，批号分别为20131024，20131025，20131028。3方法与结果3.1溶液的制备3.1.1内标溶液6精密量取水杨酸甲酯对照品50L，置50mL容量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，制成1LmL-1的内标液。3.1.2对照品溶液精密称取百秋李醇对照品、薄荷脑对照品、冰片对照品适量，加乙酸乙酯分别制成0.1mgmL-1、0.025mgmL-1和0.05mgmL-1的溶液，即得。3.1.3供试品溶液取痤疮散10g，精密称定，置500mL圆底烧瓶中，照挥发油测定法（中国药典2010年版一部附录D）试验，自测定器上端加水至充满刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，再加乙酸乙酯4mL，连接回流冷凝管，加热并保持微沸5小时，放冷，待溶液分层清晰后，分取乙酸乙酯液，置10mL量瓶中，用少量乙酸乙酯分次洗涤挥发油提取器内壁，乙酸乙酯洗液并同一量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，摇匀，即得。3.1.4阴性对照样品溶液按处方及制法，制成分别缺广藿香、薄荷和冰片的阴性对照样品。取10g，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液，按“3.1.3”项下方法制成阴性对照溶液。3.2色谱条件色谱柱：DB-FFAP（30m0.32mm0.25um)毛细管色谱柱；柱温：采用程序升温，初始温度100，保留5min，再以5min-1升至250；检测器：FID检测器，进样口温度为250，检测器温度为280；载气为氮气，流速1.24mLmin-1；氢气流速为50mLmin-1；空气流速为500mLmin-1；进样方式：分流进样，分流比10:1；进样量：1L。73.3专属性试验阴性对照品溶液的制备：取按拟订处方和制法制备分别缺广藿香、薄荷和冰片阴性对照样品，照拟订供试液制备方法同法制备分别缺广藿香、薄荷和冰片的阴性对照溶液。精密吸取对照品溶液、阴性对照品溶液、供试品溶液各1L，注入气相色谱仪，按拟订方法测定。结果表明缺广藿香、薄荷和冰片阴性对照溶液色谱在与相应的对照品色谱相同保留时间处无色谱峰，无干扰，符合要求（见表1、图1）。表1专属性试验结果成分保留时间（min）峰面积理论塔板数对照品25.3291377773866381.757供试品25.329542225884700.503百秋李醇阴性对照品-对照品13.005540448273942.594供试品13.018131325216292.575薄荷脑阴性对照品-对照品14.587522792340759.413供试品14.600224556333921.581冰片阴性对照品-图1-1专属性试验百秋李醇对照品气相色谱图8图1-2专属性试验薄荷脑对照品气相色谱图图1-3专属性试验冰片对照品气相色谱图图1-4专属性试验广藿香阴性对照品气相色谱图9图1-5专属性试验薄荷脑阴性对照品气相色谱图图1-6专属性试验冰片阴性对照品气相色谱图图1-7专属性试验供试品气相色谱图3.4线性关系考察分别精密称定百秋李醇对照品、薄荷脑对照品、冰片对照品各40mg、20mg、10mg于同一10mL容量瓶中，加乙酸乙酯至稀释刻度，制成混合对照品溶液，将其逐级稀释（每次稀释后质量浓度约为前一溶液质量浓度的10一半），精密加入水杨酸甲酯内标溶液1mL后，定容，配置成不同质量浓度的系列溶液，按“3.2”项下色谱条件进样。分别记录百秋李醇、薄荷脑、冰片与水杨酸甲酯的峰面积响应值，并分别以百秋李醇、薄荷脑、冰片与水杨酸甲酯的峰面积响应值的比值（y）为纵坐标，以百秋李醇、薄荷脑、冰片与水杨酸甲酯的浓度比值（x）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程分别为：百秋李醇：y=6.448x+5.427，R2=0.9999；薄荷脑：y=7.428x+2.382，R2=0.9997；冰片：y=7.384x+2.958，R2=0.9998。由结果表明，百秋李醇浓度在0.02mgmL-10.8mgmL-1的范围内、薄荷脑浓度在0.01mgmL-10.4mgmL-1的范围内、冰片浓度在0.005mgmL-10.2mgmL-1的范围内，进样量与峰面积的比值均呈良好的线性关系（见表2、图2）。表2百秋李醇、薄荷脑、冰片进样量与峰面积的关系成分进样量g（X）峰面积水杨酸甲酯峰面积比值（Y）0.000199900493219620.2800.0003981719963095160.5560.0007973429403056751.1280.0019918931743037592.940百秋李醇0.007966373712130422412.2840.000073289873219620.0900.000147548313095160.1770.0002931087103056750.3560.0007332789263037590.918薄荷脑0.00293411944553042243.9260.000099399393219620.1240.000199759243095160.2450.0003971493833056750.4890.0009943822673037591.258冰片0.00397516289093042245.354（气相色谱图10张见附录A）11图2-1线性试验百秋李醇对照品标准曲线图图2-2线性试验薄荷脑对照品标准曲线图图2-3线性试验冰片对照品标准曲线图123.5色谱柱考察取同批（2020131028批号）痤疮散内容物三份，按“3.1.3”项下方法提取挥发油，精密加入1mL内标液后，加乙酸乙酯至刻度制成供试品溶液。分别用3根不同规格的色谱柱测定百秋李醇、薄荷脑、冰片的含量。考察含量测定方法的耐用性，色谱柱型号如下。色谱柱：（1）DB-FFAP（30m0.32mm0.25um)毛细管柱；（2）DB-WAX(30m0.32mm0.25um)毛细管柱；（3）CP-WAX52CB(25mm0.32mm1.20um)毛细管柱。结果表明三根不同的色谱柱对百秋李醇、薄荷脑和冰片的测定结果RSD分别为1.34%、1.15%、0.92%，说明色谱柱对结果的影响较小（见表3）。表3三根不同规格的色谱柱测定结果（n=6）成分色谱柱取样量（g）供试品峰面积内标物峰面积含量（mg/g）平均含量（mg/g）RSD（%）1876831036290.117（1）1877791029660.1180.1175913983175560.120（2）5831163129100.1200.1205914593367400.117（3）10.2716001083349820.1200.1191699611044110.117（1）1706061039030.1180.1185212593151320.119（2）5183123170870.1170.1185001203224120.116百秋李醇（3）9.2044966593239850.1140.1151.34244681036290.017（1）244511029660.0170.017716923175560.017（2）707943129100.0170.017753193367400.016（3）10.271779353349820.0170.017217101044110.017（1）214751039030.0160.017645713151320.017（2）654863170870.0170.017654493224120.017薄荷脑（3）9.204661773239850.0170.0171.1513702931036290.050（1）704351029660.0500.0501961913175560.051（2）1891453129100.0500.0512189123367400.050（3）10.2712168313349820.0490.050639731044110.050（1）639021039030.0500.0501722263151320.051（2）1703443170870.0500.0501871353224120.050冰片（3）9.2041877393239850.0490.0490.92（附气相色谱图12张见附录B）3.6重复性试验精密称定痤疮散样品（20131028批号）6份，各10g，分别置500mL圆底烧瓶中，照挥发油测定法（中国药典2010年版一部附录D）试验，自测定器上端加水至充满刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，再加乙酸乙酯4mL，连接回流冷凝管，加热并保持微沸5小时，放冷，待溶液分层清晰后，分取乙酸乙酯液，置10mL量瓶中，用少量乙酸乙酯分次洗涤挥发油提取器内壁，乙酸乙酯洗液并同一量瓶中，精密加入1mL内标液后，加乙酸乙酯至刻度；按“3.2”项下色谱条件进样测定。记录百秋李醇、薄荷脑、冰片及水杨酸甲酯的峰面积响应值并计算RSD。记录百秋李醇、薄荷脑、冰片及水杨酸甲酯的峰面积响应值，以内标法计算本品中百秋李醇、薄荷脑和冰片的平均含量分别为0.11575mgg-1、0.01652mgg-1、0.04976mgg-1，RSD分别为2.03%、1.62%、1.26%。结果（见表4）表明该方法重复性良好。14表4重复性试验结果（n=6）成分样品号取样量（g）供试品峰面积内标物峰面积含量（mg/g）平均含量（mg/g）总平均含量（mg/g）RSD（%）1876831036290.117110.2711877791029660.1180.1171699611044110.11729.2041706061039030.1180.1181713201048070.11639.3401714041039910.1170.1171738711026620.110410.172169092984410.1120.1111821181021600.115510.2721823141016520.1160.1151835851033520.116百秋李醇610.1801828311018610.1170.1160.1162.03244681036290.017110.271244511029660.0170.017217101044110.01729.204214751039030.0160.017216351048070.01639.340215281039910.0160.016241011026620.017410.17222855984410.0170.017232551021600.016510.272233951016520.0160.016236591033520.016薄荷脑610.180231371018610.0160.0160.0171.62702931036290.050110.271704351029660.0500.050639731044110.05029.204639021039030.0500.050638361048070.04939.340633311039910.0490.049706841026620.051410.17265962984410.0490.050690831021600.049510.272708781016520.0510.050695481033520.050冰片610.180688511018610.0500.0500.0501.26（附气相色谱图17张见附录C）153.7稳定性考察精密称取痤疮散样品（20131028批号），按“3.1.3”项下方法提取挥发油，精密加入1mL内标液后，加乙酸乙酯至刻度制成供试品溶液，分别于放置0、4、8、12及24小时进样，分别测定百秋李醇、薄荷脑、冰片峰面积并计算RSD。百秋李醇、薄荷脑、冰片的RSD分别为1.14%、1.39%、0.82%。结果表明供试品溶液在24小时内各成分的平均含量基本稳定（见表5）。表5稳定性考察结果（n=5）成分时间间隔（小时）取样量（g）供试品峰面积内标物峰面积含量（mg/g）RSD（%）01742751048070.10941794691091830.10881793581095490.108121929301196010.106百秋李醇241781051095340.1071.140200751048070.0144216041091830.0148215561095490.01412236971196010.014薄荷脑24216171095340.0141.390645191048070.0464667971091830.0458664081095490.04512727221196010.045冰片2410.081660171095340.0450.82（附气相色谱图5张见附录D）3.8加样回收率试验精密称定已知含量的痤疮散样品（20131028批号）6份，每份5g，编号为1616，分别精密加入1mL含百秋李醇0.7412mgmL-1、薄荷脑0.1056mgmL-1、冰片0.1843mgmL-1的对照品溶液，分别置500mL圆底烧瓶中，照挥发油测定法（中国药典2010年版一部附录D）试验，自测定器上端加水至充满刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，再加乙酸乙酯4mL，连接回流冷凝管，加热并保持微沸5小时，放冷，待溶液分层清晰后，分取乙酸乙酯液，置10mL量瓶中，用少量乙酸乙酯分次洗涤挥发油提取器内壁，乙酸乙酯洗液并同一量瓶中，精密加入1mL内标液后，加乙酸乙酯至刻度；按“3.2”项下色谱条件进样测定各成分的含量并计算加样回收率。由结果（见表6）可知，百秋李醇、薄荷脑和冰片的平均加样回收率均在95%105%的范围内。且加样回收率的相对标准偏差均2.66%，表明本方法准确度良好，适合本品的含量测定。表6加样回收率试验结果（n=6）成分取样量（g）已含有量（mg）加入量（mg）实测量（mg）回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）5.1530.5960.7411.356102.545.1850.6000.7411.362102.755.1500.5960.7411.375101.425.1800.5990.7411.359102.425.1610.5970.7411.345100.82百秋李醇5.1910.6010.7411.358102.20102.030.735.1530.0850.1060.194102.835.1850.0860.1060.195103.525.1500.0850.1060.194102.675.1800.0860.1060.195103.945.1610.0850.1060.194102.58薄荷脑5.1910.0860.1060.195103.37103.150.525.1530.2560.1840.43898.315.1850.2580.1840.448103.285.1500.2560.1840.43697.735.1800.2560.1840.447102.455.1610.2570.1840.43697.18冰片5.1910.2580.1840.446101.65100.102.66（附气相色谱图18张见附录E）173.9样品含量测定取3批痤疮散各适量，分别按按“3.1.3”项下方法提取挥发油，精密加入1mL内标液后，加乙酸乙酯至刻度制成供试品溶液，按“3.2”项下色谱条件进样测定，并按“3.6重复性试验”项下方法分别计算百秋李醇、薄荷脑、冰片的含量（见表7）。表7样品含量测定结果（单位：mg/g）批号百秋李醇平均含量薄荷脑平均含量冰片平均含量0.1140.0210.070201310240.1150.1140.0210.0210.0710.0700.1050.0200.066201310250.1070.1060.0200.0200.0670.0660.1220.0210.056201310280.1220.1220.0210.0210.0570.057（附气相色谱图12张见附录F）4讨论GC因其具有高灵敏度和高分离度的特点而受到广泛应用，尤其适合于测定挥发性成分的定性、定量分析，很多含有百秋李醇、薄荷脑、冰片的制剂或其他复杂样品均采用GC测定其含量11-12。本课题依据中药质量标准分析方法对气相色谱法测定痤疮散中百秋李醇、薄荷脑、冰片含量的研究进行了考察。4.1色谱条件的确定由于挥发油成分的热稳定性，以及样品中挥发油的含量较高(0.997%)，进样质量浓度约为1gL-1，故采用分流进样方式。经试验，采用10：1分流比，既符合氢焰离子化检测器的检测限要求，又能得到较好的峰形，满足了气相色谱法关于理论板数、分离度、拖尾因子等要求。因此，采用气相色谱法测定痤18疮散中百秋李醇、薄荷脑、冰片的含量，方法简便、快速、准确，可用于制剂质量控制。4.2柱温的选择当柱温低时，苯酚的保留时间太长；当柱温高时，百秋李醇、薄荷脑、冰片与溶剂峰不能有效分离。经过摸索和优化，采用色谱柱程序升温测定，既有较好的分离效果，又有较合适的分析时间。在考察柱温时，笔者尝试了两种方法，第1种是初始温度100，保留5min，再以5min-1的速率升温至250；第2种是初始温度100，以5min-1的速率升温至250。结果显示，在第1种柱温和升温速率条件下，百秋李醇、薄荷脑、冰片之间分离度好，且与其他未知成分的分离度符合要求；在第2种柱温和升温速率条件下，百秋李醇、薄荷脑、冰片之间的分离度较前者差，且与其他未知成分的分离度很差，有些要测定的峰与相邻的峰分不开。由于分离度越大测定得到的各成分峰面积越精确，所以本试验选择了第1种柱温和升温速率。4.3色谱柱的选择在考察色谱柱时，分别用极性柱、中性柱、非极性柱测定痤疮散中百秋李醇、薄荷脑、冰片的含量。试验结果显示，极性柱的分离度比中性柱、非极性柱的分离度好，中性柱和非极性柱峰与峰之间分离度相对较差，所以本试验选择了极性较高的毛细管色谱柱。4.4取样量的确定在考察取样量时，本试验分别取10g、20g、50g的痤疮散加热回流，按“3.2”项下色谱条件进样测定。结果显示，10g痤疮散中百秋李醇、薄荷脑、冰片的响应值已经完全能满足测定需求，所以本试验的取样量为10g。但是在加样回收率试验中，考虑到添加对照品后各组分将相应增加，参照中国药典（2010年版）等资料，并结合一起检测信号的灵敏度，为确保加样回收后各组分浓度与测试浓度接近，以便获得可靠的数据，故每份样品的取样量为5g。4.5定量方法的确定因为百秋李醇、薄荷脑、冰片均属于易挥发性物质，为了抵消进样时挥发所带来的误差，所以采用内标法测定其含量。且内标法具有以下优点：在色谱柱不超载的范围内，定量结果与进样量重复性无关；只要被测物质和内标19物出峰，且能完全分离就可定量，与其他组份无关。4.6内标物的确定内标物的选择测定薄荷脑用的内标物有萘13、环己醇14、水杨酸甲酯15及丁香酚16等。本次研究中，我们参考文献10，选择用水杨酸甲酯作为内标物质对百秋李醇、薄荷脑、冰片进行含量测定，结果痤疮散中无此成分，阴性无干扰，内标物峰与样品峰能很好分离，能很好满足内标物的要求。4.7溶剂的选择提取溶媒的选择根据百秋李醇、薄荷脑、冰片和水杨酸甲酯的理化性质，参考了中华人民共和国2010版药典。书中关于百秋李醇、薄荷脑、冰片提取的溶剂有正已烷、乙酸乙酯、丙酮、三氯甲烷等。这几种溶剂对所测成分与内标物都有良好的溶解性，内标峰和百秋李醇、薄荷脑、冰片峰及其他杂质峰分离得好。但从节能环保的角度考虑，采用乙酸乙酯作为溶剂更优。4.8小结建立同时百秋李醇、薄荷脑、冰片含量测定方法的意义：百秋李醇、薄荷脑、冰片等挥发性物质作为制剂的有效成分，由于其易挥发性的理化性质，在生产、储存与运输过程中均会引起其含量下降，从而影响制剂的疗效，故对制剂中百秋李醇、薄荷脑、冰片等挥发性物质制定含量测定指标是必要的，在能保证药品质量的同时，尚可建议厂家在生产过程中对挥发性物质的包合技术的开发与应用。综上所述，本方法重复性好、灵敏度高、结果准确，可用于痤疮散的质量控制。20参考文献1王俊华广藿香挥发油化学成分气质联用技术分析J时珍国医国药2000,11(7)5792钱小平,赵远征,李珠华气相色谱法测定第一冷巴布贴剂中的樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯和麝香草酸J色谱,2000,18(3)：267-2703张正康旋光度法测定薄荷脑的成分含量J时珍国药国医,2001,12(11)：9954阎正,刘鹏岩,张建中气相色谱法测定冠心病膏中樟脑、薄荷脑、异龙脑、龙脑含量J色谱,1998,16(5)：4115刘振,潘诗海,段夏利气相色谱法测定薄荷脑止痒酊中薄荷脑含量J中国临床药学杂志,2004,12(1)：326王箴化工辞典M北京:化学工业出版社,19697吴红,郭军,等气相色谱法测定健康人含服速效救心丸后冰片的血药浓J中国药房,2003,14(7):4148高冠喜,董宙中药质量标准化与中药现代化发展的探讨J中国医药导报，2010,7(2):76-779莫迎,黄艳群中成药基本药物质量标准与控制分析J中国当代医药,2011,18(21):67-6810中华人民共和国药典2010年版(一部)S.北京:中国医药科技出版社,2010.附录13011NozalMJ,BernalJL,BernalJJExtractionofthymol,eucalyptol,menthol,andcamphorresiduesfromhoneyandbeeswax,determinationbygaschromatographywithflameionizationdetectionJJChromatogrA,2002,954(1-2):20712ValdezJS,MartinDK,MayersohnMSensitiveandselectivegaschromatographymethodsforthequantiationofcamphor,mentholandmethyl21salicylatefromhumanplasnmaJJChrometogrBBiomedSci,1999,729(1-2):16313杨晶晶,郭坚固,刘献阳等GC法测定麝香祛风湿膏中薄荷脑、丁香酚等组分的含量J食品与药品,2008，10(9):51-5214杜凯,胡文兵,王辉气相色谱法对驱风油中四种有效成分的含量测定研究J时针国医国药,2009,20(10):2592-259315张雪,邵燕虹,张慧敏气相色谱法法测定苍耳子鼻炎胶囊中薄荷脑和龙脑的报告J医学综述,2008,14(20):3197-319816任婧昱,曹飞,姜文红气相色谱法测定脑安片中冰片、薄荷脑的含量J黑龙江医药,2008,21(1):13-1422综述中药材中挥发油的研究现状1概述中药挥发油的应用有着悠久的历史，许多中药挥发油的有效性早为古人所知。根据现代中药的化学研究，含挥发油的中药材数量众多，涉及几乎所有功效类别的中药，在以前认为无挥发油的中药如三七、首乌、骨碎补、紫菀、郁金、姜黄等药材中也发现有挥发油的存在15。特别是在治疗外感热病的中药中，挥发油发挥了重要的作用，如薄荷，柴胡，藿香，香薷，荆芥，防风，紫苏挥发油等610。中药挥发油所含的化学成分比较复杂，可由十几种到一百多种成分组成，来源不同的挥发油所含的化学成分也不一致11。挥发油在常温下较易挥发，往往含有多种不稳定的基团，易发生理化反应，其稳定性不佳12。根据中药挥发油的理化性质不同，可将挥发油分为不同的类别，如以挥发油比重不同，分为重油和轻油；以挥发油在水中的溶解度大小分类，分为溶解度大的挥发油和溶解度小的挥发油；以在中药材中的存在状态不同分为游离态挥发油和结合态挥发油等。不同理化性质的挥发油需要采用不同的提取、浓缩方法和制剂工艺。中药挥发油的性质差异较大且性质不稳定，因此在目前的中药生产中是个难点。本文对相关问题进行归纳分类后从对挥发油的认识、影响中药材中挥发油含量的因素、挥发油的提取（分离）方法和挥发油的质控技术4方面进行探讨。2对挥发油的认识挥发油也称精油，是存在于植物体内的一类具有挥发性、能随着水蒸气蒸馏，以萜烯、倍半萜烯及其含氧衍生物为主要成分的油状液体。挥发油在水中溶解度很小，能完全溶于无水乙醇，在低浓度的乙醇中只能部分溶解，易溶于23石油醚、乙醚、氯仿、二硫化碳、油脂等有机溶剂；大多数为无色或淡黄色的透明液体，少数为其他颜色；有的在冷却时可结晶析出，析出物称为“脑”；在常温下涂在纸上经挥发后不留下持久性的油斑；对空气、日光及温度敏感，易氧化变质，使其颜色加深，密度增加，失去原有香味，并能形成树脂状物，也不能再随水蒸气蒸馏。故挥发油应置于棕色瓶内密闭，并于低温避光保存12,13,14。挥发油在植物来源的中药中分布非常广泛，已知我国有56科136属植物含有挥发油。挥发油具有多方面较强的生物活性，如止咳、平喘、祛痰、抗菌、消炎、驱风、健胃、解热、镇痛、解痉、杀虫、消毒、抗癌、利尿、降压、强心、抗过敏活性、酶抑制活性、抗突变活性、抗氧化等，为中药所含有的一类重要成分12,13,14。有人还把挥发油作为促透剂，用于透皮给药制剂。另外，挥发油还具有防腐作用。3影响中药材中挥发油含量的因素3.1药材质量对挥发油提取的影响中国药典2005版一部规定了薄荷、姜黄、石菖蒲等药材挥发油的含量，这些药材中，根茎类、种子类药材挥发油的含量通常都能符合药典规定的要求。但薄荷、荆芥等草质药材，由于质地柔软疏松，药材在加工、干燥、贮藏的过程中挥发油易散失，市场上很难购得挥发油含量合格的药材，药材不符合规定就更难保证挥发油的提取效果。此外中国药典对一些挥发油含量较高且药效肯定的中药材没有规定挥发油的含量，如川芎、当归、苍术等，市购这些药材挥发油的含量差异很大，从而也使挥发油提取的收率很不稳定15。3.2加工炮制3.2.1切制不当切制规格不合适，过于细碎，如薄荷、荆芥等切段过短，因增加了断面与空气的接触面积，在干燥及存放过程中就会加速挥发油的散失，或在切制时淋润时间过长，都是造成挥发油含量降低的原因16。24中国药典规定，测定用的供试品须预先粉碎，使能通过二至三号筛，但粉末不宜过细，粉碎过细，可能导致油室或油细胞破碎过多，在粉碎过程中造成挥发油散失过多17，而且过细的粉末加水加热时成糊状，容易引起焦化和暴沸现象18，因此样品预处理时应根据不同品种而异：对于质地较紧密的根、根茎、茎木等类药材，宜制成最粗粉，对于果实、种子等类药材，宜捣碎：对于质地轻泡的花、全草等类药材，宜切碎17。3.2.2干燥方法含挥发油药材自然干燥最理想，但自然干燥时间较长，又受天气的影响，且容易污染。人工干燥时间短且清洁卫生，但必须要控制好温度。温度过高，则挥发油含量损失太大。根据实验结果，5055干燥时，损失率为2.34%，70干燥时损失率为34.73%。因此，人工干燥含挥发油类药材时，温度最好控制在50左右，才能确保药材质量19。3.2.3火制时掌握不当挥发油随温度升高而挥发加速，高温则被分解破坏。含挥发油的中药炮制时一般不宜加热处理16。3.3调配、煎煮不当含挥发油成分的药物如调配不当，同样会使挥发油成分在煎煮过程中严重散失而影响疗效。因此，以挥发油为主要治疗成分且质地疏松的药物在煎煮时都应后下16。3.4贮存不当、存期过长由于药材所含挥发油成分在常温下能自行挥发和氧化，因此，贮存时间愈久，挥发油成分的含量越低，气味的散失就越严重，疗效也就越差16。3.5煎煮时间对挥发油含量的影响从测定结果来看，不论是单味药材，还是在复方汤剂中，煎煮时间在30min，汤剂中挥发油含量最高20。254挥发油的提取（分离）方法4.1蒸馏法该法是提取挥发油最常用的方法，一般将中药适当粉碎后，加水浸泡，然后可用共水蒸馏、水上蒸馏或水蒸气蒸馏法提取。前两种方法虽简单，但油受热温度较高，易引起药材焦化，及某些成分的分解；后一种方法提油，温度相对较低，但设备较前两种方法复杂。由于挥发油与水接触时间较长，温度较高，某些含有对热不稳定成分的挥发油容易产生相应成分的分解而影响挥发油的品质，因此对热不稳定的挥发油不能用此法提取。4.2溶剂提取法含挥发油的药材用低沸点有机溶剂连续回流提取或冷浸，常用的有机溶剂有石油醚、乙醚等。提取液经蒸馏或减压蒸馏除去溶剂，即可得到粗制挥发油。此法得到的挥发油含杂质较多，必须进一步精制提纯。其方法是将挥发油粗品加适量的浓乙醇浸渍，放置冷冻，滤除析出物后，再蒸馏除去乙醇；也可将挥发油粗品再行蒸馏，以获得较纯的挥发油。由于石油醚和乙醚对人体有害，因此笔者认为使用高浓度的酒精作为提取溶剂