家蝇幼虫蝇油的提取及其抗衰老作用研究

家蝇幼虫蝇油的提取及其抗衰老作用研究摘要：目的对家蝇幼虫蝇油的提取进行优选，研究家蝇蝇油的抗衰老作用和体外抑菌效果，为化妆品的开发提供理论依据；方法通过设计正交试验优选出家蝇幼虫蝇油的提取工艺；皮下注射D-半乳糖和紫外灯照射小鼠背部皮肤造成皮肤衰老模型，同时设空白对照和模型组研究蝇油的抗衰老作用；蝇油的体外抗菌效果；结果70、2.5h，1:10料液比为最佳提取工艺；蝇油有一定的抗衰老作用；蝇油对大肠杆菌、金色葡萄球菌和枯草杆菌均有一定的抑菌效果；结论超声联合浸提法适合从家蝇幼虫中快速有效提取蝇油，蝇油有一定的抗衰老效果和抗菌作用。关键词：家蝇幼虫；蝇油；抗衰老；抗菌ITheextractionofthegreasefromMuscadomesticaandthestudyoftheeffectinanti-agingAbstract:ObjectiveTooptimizethebestwayoftheextractionofthegreasefromMuscadomestica,itseffectonanti-agingandexploretheeffectoftheantibacterialability,whichprovidesthetheoreticalbasisforthedevelopmentinmusmetic.MethodThroughdesigntheorthognaltesttooptimizethewayoftheextractionofthegreasefromMuscadomestica,producetheagedmodelbysubcutaneousinjectionwithD-galactoseandshinethebackinmicewithUVlight,andprojectingblankcontrolandmodlesettostudythegreasefromMuscadomesticaandtheresultoftheantibacterialinthemeantime.ResultTheoptimalconditionwaspetroleumetherastheextractionsolvent,temperature70,extractiontime2.5hours,andsolventvolume12ml/g.Thegreasecantakeeffectinanti-agingandantibacterialabilityamongescherichia,staphylococcusaureusandbacillussubtilis.ConclusionTheultrasoundcombinedextractioncanbeusedintheextractionofthegreasefromeffciently.Andthegreaseiseffectiveonanti-agingandantibacterialability.Keywords:Muscadomestica;thegreasefromMyscadomestica;anti-aging;antibacterial目录摘要.I1前言.12仪器、试剂与材料.22.1仪器.22.2试剂.22.3材料.23实验方法.33.1蝇油的提取.33.2蝇油理化常数的测定.43.3药用软膏的制备.53.4蝇油软膏的抗衰老研究.63.5蝇油的抑菌实验.74结果与分析.84.1家蝇幼虫蝇油的提取方法.84.2工艺验证试验.94.3蝇油理化性质的测定.94.4软膏的性状鉴别.104.5软膏的稳定性检查.104.6小鼠日常活动状态和皮肤变化.104.7体外抑菌实验.115讨论.13参考文献.15综述.17致谢.2301前言昆虫，具有生物量巨大，其繁殖速度快，分布范围广泛，同时又富含油脂等脂质类物质，脂肪含量丰富，并且其脂肪酸组成合理。大量研究表明，昆虫油脂的肪酸组成受饲料、发育、种类等条件影响，但总的说来，许多昆虫不仅含有大量的不饱和脂肪酸l-4，而且其脂肪酸组成更接近于鱼油，对人体有良好的保健作用。部分昆虫所含油脂的饱和、单不饱和与多不饱和脂肪酸的比例趋近于当今营养学家们推荐的人体食用最佳脂肪酸比例，具有较合理的脂肪酸组成，可作为天然的优质营养保健调和食用油。有报道称，昆虫油脂能减缓机体衰老,使人延年益寿5-8。昆虫，作为地球上最大的生物资源，可在工业、农业、医药卫生、食品保健、环境保护等许多领域服务于人类社会，因此，其具有巨大的开发前景。家蝇(Muscadomestica)属昆虫纲、双翅目、环裂亚目、家蝇科，是我国大部分地区最常见、数量最多的一种，虽然其生命周期短，但是具有强大的繁殖能力，繁殖过程由卵发育到幼虫，又称蝇蛆9。家蝇幼虫具有很高的营养价值，其体内含有丰富的蛋白质，营养价值甚至高于鱼类，甚至被广泛应用于一些由于氨基酸缺乏而引起的疾病的治疗。有研究表明，从家蝇幼虫体内可提取到几丁质，几丁质具有辅助降血脂作用10，家蝇幼虫干粉的脂肪含量在12%左右，低于一般的动物性食物而高于一般的植物性食物，脂肪含量适中，而且脂肪酸中不饱和脂肪酸（68.2%）和必需脂肪酸（36%）的含量较高，其组成接近植物油与鱼油11，所以，家蝇幼虫蝇油具有巨大的药用潜能。对于蝇油的提取，传统工艺以索氏提取法、浸提法、超声提取法为主，索氏提取法虽然提取的效率较高，但多适用于一般实验室的少量油脂提取；而超声法大大缩短时间，但其提取效率较低；而浸出法不仅提取效率高，其提取的油脂通过碱炼、脱色、脱臭等化工过程进行精炼，去除油脂中杂质，可使之符合国家标准，成为可食用或用于化妆品等工艺的成品油12，但其具有较大的时间成本，不利于实验室快速提取。本实验首次采用超声联合浸提法提取家蝇幼虫的蝇油，并且对此方法进行正交试验优选提取条件，利用自身专业课知识将蝇油制作成外用膏剂以便探究1其抗衰老作用并且研究了蝇蛆油的体外抑菌效果。2仪器、试剂与材料2.1仪器2.2试剂无水乙醇（天津市百世化工有限公司）；硬脂酸（天津市富晨化学试剂厂）；白凡士林（天津市科密欧化学试剂有限公司）；司盘-60（天津市富晨化学试剂厂）；尼泊金乙酯（天津市科密欧化学试剂有限公司）；吐温-80（天津市大茂化学试剂厂）；二甲苯（天津市富宇精细化工有限公司）以上均为分析纯；L-B（广东环凯生物科技有限公司）；琼脂（广东环凯生物科技有限公司）；单硬脂酸甘油酯（天津市百世化工有限公司）；维生素E胶囊（青岛双鲸药业有限公司）青霉素（哈药集团制药A080506813）；链霉素（大连美罗大药厂65080605）名称型号厂家电子天平BL-220HShimadzuCorporatzonJapan万分之一天平FA2104A上海精天电子仪器有限公司旋转蒸发仪重庆市永生实验仪器厂电热恒温水浴锅江苏金坛宏华仪器厂气浴恒温振荡器ZD-85A江苏金坛市宏华仪器厂超净工作台ZHJH-C1209C上海智诚分析仪器制造有限公司数显电热培养箱HPX-9162MBE上海博迅实业有限公司医疗设备厂红外线电热鼓风干燥箱CS101-3ABNR重庆市永生实验仪器厂高压灭菌锅上海申安医疗器械厂三用紫外仪ZF-2型上海市安亭仪器厂培养皿江苏金坛市宏华仪器厂涂布器江苏金坛市宏华仪器厂接种环重庆市永生实验仪器厂微量加样器重庆市永生实验仪器厂22.3材料家蝇幼虫（由广东省疾病预防控制中心提供本实验室传代培养）；小白鼠（由广州中医药大学实验动物中心提供,合格证号:SCXK(粤)2008-0020。）；伤寒杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌（均由广东药学院中山校区实验中心提供），经分离培养，没污染；青霉素（哈药集团制药A080506813）3实验方法3.1蝇油的提取本文主要采用的是超声联合浸提法对家蝇幼虫蝇油进行提取，采用正交试验对提取条件进行优化筛选。3.1.1幼虫干品的制备收集三龄幼虫经清理去杂后，放入干燥箱中干燥24-48h，干燥箱温度控制在60左右。3.1.2油脂的提取步骤取家蝇幼虫干燥虫体，研磨成粉状，置于锥形瓶，按照一定的料液比溶剂的体积(mL)与家蝇幼虫干燥后粉末质量(g)之比缓慢倒入溶剂，盖上筛子于一定温度条件下超声浸提一定时间，过滤，重复提取3次，收集滤液，置于旋转蒸发仪中浓缩，得到蝇油，算出提取率。3.1.3正交实验设计以料液比、提取温度和提取时间作为考察因素，设计正交试验并进行最佳条件的优选。以油脂提取率为试验指标，列出实验考察的因素及水平（表1）。表1：正交试验因素水平因素水平A提取时间（h）B提取温度（）C料液比3（g：v）12.0501：1022.5601：1233.0701：143.1.4数据分析分析（1）家蝇蝇油提取率(%)=W1/W2100%式中：W1所提取家蝇蝇油质量（g）；W2所提取家蝇蝇油质量（g）（2）正交试验数据采用统计软件SPSS19.0进行分析（3）工艺验证：取家蝇幼虫干燥体5g三份，以3.1.3正交优选结果为提取条件，重复提取3次，计算其提取率。3.2蝇油理化常数的测定3.2.1溶液的配制（1）0.1mol/L氢氧化钠溶液：取4g氢氧化钠溶于蒸馏水中，并用容量瓶定容到1000ml。（2）10%碘化钾溶液：取10gKI在烧杯中溶解在100ml容量瓶。（3）1%淀粉溶液：可溶性淀粉0.5g，加5ml水搅拌均匀后，缓慢倒入100ml沸水中，一边加一边搅拌，继续煮沸2分钟，冷却，吸取上清液，即完成配制。（需临用时新鲜配制）（4）酚酞指示液：1.0g酚酞，溶解在100ml无水乙醇中。（5）乙醇-乙醚混合液：体积比1:1，临用前滴加3滴酚酞滴定液。（6）0.5mol/L盐酸：90%浓盐酸45ml，加蒸馏水定容到1000ml。（7）0.5mol/L乙醇制氢氧化钾溶液：取35g氢氧化钾固体，倒入锥形瓶，加适量无水乙醇溶解并稀释到1000ml，塞紧橡皮塞后，静置24小时，迅速倾取出上清液，保存在棕色瓶。（8）0.1mol/L硫代硫酸钠溶液：25g硫代硫酸钠，溶于经煮沸冷却后得蒸馏水，加碳酸钠0.2g，加水稀释到1000ml。3.2.2蝇油酸值的测定4用50ml乙醇-乙醚（1:1）混合物溶剂溶解油脂5g，振摇使样品溶解，并加入酚酞3滴，再用0.1mol/L氢氧化钾溶液滴定，同时摇动至出现微红色（30s内不褪色），记录碱液消耗的体积，平行测定三次。3.2.3蝇油碘值的测定准确取蝇油0.5g至干燥的碘量瓶中，加氯仿10ml，轻轻摇动，使样品全部溶解，准确加入溴化钾溶液，立即塞好瓶塞，同时在瓶塞与瓶口处加10%碘化钾封闭缝隙，防止因碘挥发而产生误差，置于20-30暗处，30分钟后打开瓶塞，使瓶塞旁的碘化钾溶液缓慢流入碘量瓶中，并加入10ml10%碘化钾溶液和100ml蒸馏水，将瓶塞和颈部的液体冲入瓶内，摇匀后用0.1mol/L硫代硫酸钠溶液滴定至浅黄色，加入1ml1%淀粉指示液，继续滴定接近终点时用力振荡，使碘能从氯仿中全部进入水中，再滴定至蓝色刚好褪去，记录硫代硫酸钠的消耗量，平行测定三次并做空白对照。3.2.4蝇油皂化值的测定取2.0g蝇油于锥形瓶中，加入0.5mol/L乙醇制氢氧化钾溶液25ml，水浴煮沸回流一小时，待溶液变清澈透明后，加入无水乙醇10ml冲洗冷凝器的内壁和瓶塞的下部，滴加少许酚酞指示液使溶液呈粉红色，0.5ml用盐酸滴定余下氢氧化钾，至粉红色恰好消失后，记录盐酸消耗的体积，平行测定3次并做空白对照。3.2.5数据分析（1）物理性质：蝇油的颜色、状态及其气味。（2）酸值=VC56.1/m，式中V-消耗的氢氧化钾溶液体积，ml；C-氢氧化钾溶液的浓度，mol/L；m-试样的质量，g；56.1-氢氧化钾的摩尔质量，g/mol（3）皂化值=（V1-V2）C56.1/m，式中V1-空白试样中所消耗的氢氧化钾溶液的体积，ml；V2-实验消耗的氢氧化钾溶液体积，ml；C-氢氧化钾溶液的浓度，mol/L；m-试样的质量，g；56.1-氢氧化钾的摩尔质量，g/mol（4）碘值=（V1-V2）C12.69/m，式中V1-空白试样中所消耗的硫代硫酸钠溶液的体积，ml；V2-实验消耗的硫代硫酸钠溶液体积，ml；C-硫代硫酸钠溶5液的浓度，mol/L；m-试样的质量，g；12.69-每克当量硫代硫酸钠相对于碘的克数。3.3药用软膏的制备3.3.1蝇油软膏的制备取硬脂酸7.5g、单硬脂酸甘油酯5g、白凡士林5g、水浴上加热熔融，保温与70左右，加入1g司盘-60和尼泊金乙酯0.05g使溶解，作为油相；另准确量取蒸馏水23.95ml加热到80，加入吐温-802.5g溶解混匀，作为水相；将15g蝇油与油相混匀，再将油相缓慢加入水相中，边加边搅拌至冷凝，即可得到药物与基质比例为1：3的软膏。3.3.2维生素E软膏的制备取硬脂酸7.5g、单硬脂酸甘油酯5g、白凡士林5g、水浴上加热熔融，保温与70左右，加入1g司盘-60和尼泊金乙酯0.05g使溶解，作为油相；另准确量取蒸馏水23.95ml加热到80，加入2.5g吐温-80溶解混匀，作为水相；将5g维生素E与油相混匀，再将油相缓慢加入水相中，边加边搅拌至冷凝，即可得到药物与基质比例为1：9的软膏。3.3.3软膏的性状鉴别3.3.4软膏的稳定性检查将软膏分别放置于55恒温6小时与-15恒温24小时进行耐热耐寒检查。3.4蝇油软膏的抗衰老研究3.4.1溶液配制8%硫化钠水溶液：硫化钠8g溶于100ml蒸馏水水内，配成8%硫化钠水溶液。0.1g/mlD-半乳糖溶液：取10gD-半乳糖溶于适量蒸馏水中并定容到100ml，临用前配制。63.4.2药理作用的研究3.4.2.1动物分组、给药及制作模型取小白鼠8只，依次编号并分组，1和2号为空白组，3和4号为模型组，5和6号为样品组，7和8号为阳性对照组。所有的小鼠都用8%硫化钠水溶液脱去背部的毛，模型组、样品组、阳性对照组的小鼠每天称重，并按1000mg/kgd的量皮下注射半乳糖，样品组、阳性对照组在紫外照射前分别涂抹蝇油软膏和维生素E软膏，模型组、样品组、阳性对照组每天进行紫外照射，第一周每天照射4小时，第二周每天照射6小时，第三周每天照射8小时，第四周每天照射10小时，第五周起每天照射12小时，以7天为一个周期，连续照射7周。并观察小鼠的日常活动状态和皮肤变化。3.5蝇油的抑菌实验3.5.1抑菌实验条件制备3.5.1.1培养基的制备在普通营养肉汤培养液中加入1.5%-2.5%琼脂粉，置于三角烧瓶中，按（2:100）加水，搅拌使营养肉汤琼脂粉完全溶解，配制成液体培养基。用pH试纸测试并用NaOH调整pH，用橡胶塞，牛皮纸包扎。置于高压蒸汽灭菌，条件为103.42kpa，12120min。灭菌完毕后，从灭菌器内取出培养基，等培养基冷至5060时，在超净工作台内，无菌操作将培养基倾注到无菌空培养皿内，直径90mm平皿倾注约20ml凝固后即成平板培养基。3.5.1.2细菌液的制备取5支种斜面细菌管和5支肉汤培养基管，用左手握持，菌种管斜面朝上位于左侧，肉汤培养基管位于右侧，右手持接种环，经火焰灭菌。以右手掌与小指，小指与无名指分别夹取培养基管与菌种管的棉塞，将试管口迅速通过火焰灭菌；将已灭菌的接种环伸入菌种试管，挑取斜面上的菌苔少许，取出接种环，迅速将菌种移种到肉汤培养基管；先将接种环的菌种挨着液面的试管壁上7轻轻研磨，然后直立试管，菌种即混合于肉汤中；取出接种环并在火焰上烧灼灭菌后放回原处，两试管口通过火焰灭菌后，将棉塞分别塞于原试管，在肉汤培养基试管上作如“菌名，接种时间”的标记。最后将培养基置于37恒温箱培养16h。（1）生理盐水的配制：取9g氯化钠，加适量蒸馏水溶解并定容到100ml。（2）样品含药纸片：取1支经灭菌后的试管，分别加入经灭菌的12张圆滤纸片和蝇油10ml，浸泡48h直至蝇油被完全吸收，纸片直径6mm，每张纸片吸取药液500l。（3）对照品含药纸片：取1支经灭菌后的试管，分别加入经灭菌的4张圆滤纸片和生理盐水10ml，浸泡48h直至药液被完全吸收，纸片直径6mm，每张纸片吸取药液500l。3.5.2体外抑菌试验用无菌微量加样器吸取100l细菌液织固体培养基上，用涂布棒涂抹均匀。镊子蘸取95%乙醇溶液后在火焰上灼烧灭菌，冷却后分别夹取经灭菌后吸取有不同药液的圆滤纸片（直径6mm，每片吸取蝇油500l，生理盐水500l）贴于琼脂平板表面(每夹取一个纸片后镊子都要灼烧灭菌)。在平皿背面相应的纸片后做好标记，记录好各标记所代表的溶液名称。将平皿倒置，送37恒温箱内培养18-24h。培养完成后用游标卡尺测量抑菌圈直径（精确到0.1mm），记录实验结果。84结果与分析4.1家蝇幼虫蝇油的提取方法表2：正交试验设计及结果注：A代表提取时间，B代表提取温度，C代表料液比表3：正交试验方差分析表因素偏差平方和自由度F值P时间0.04220.721温度0.08321.418料液比0.35125.9660.05误差0.598通过表3的均值分析可知，最佳提取条件是A2B3C2，即，提取时间2.5h，实验号ABC空白提取率%111116.24212226.48313336.63421236.68522315.89623126.64731326.56832136.67933216.47均值16.4506.4936.5176.200均值26.5676.3476.5436.560均值36.4036.5806.3606.660极差0.1640.2330.1830.4609提取温度70，料液比1:12，有表4可知，C因素具有显著性差异，即料液比对提取率有显著影响，在实验过程中，为减少时间成本和溶剂成本也可适当降低时间和减少溶剂。4.2工艺验证试验表4：工艺验证试验第一次第二次第三次提取率（%）6.676.696.67以正交试验的优选结果我提取条件，即：提取时间2.5h，提取温度70，料液比1:12重复提取三次，三次提取率分别是6.67%、6.69%、6.67%，与正交试验最高提取率相当，证明该提取工艺合理、可行。4.3蝇油理化性质的测定物理性质：本实验所提取到的蝇油为棕黄色，清澈透明，有点粘稠的液体，且伴有特殊的气味。表5：酸值、皂化值、碘值酸值（mgKOH/g）皂化值（mgKOH/g）碘值（gI2/100g）103.484.91166.827.69106.366.98由表4可知：蝇油碘值较高，说明不饱和程度比较高；酸值较一般油脂偏高，皂化值较一般植物、动物油脂稍低。4.4软膏的性状鉴别（1）含蝇油的软膏为棕黄色、均匀、细腻，具有适当的粘稠性，易涂布与皮肤上，且无刺激性，并无酸败、变色、变硬、融化、油水分离等变质现象，符合中国药典的质量标准。（2）含维生素E的软膏为乳白色、均匀、细腻，具有适当的粘稠性，易涂布与皮肤上，且无刺激性，并无酸败、变色、变硬、融化、油水分离等变质10现象，符合中国药典的质量标准。4.5软膏的稳定性检查含蝇油的软膏和含维生素E的软膏均不耐热，出现油分分离现象，但耐寒由于两种软膏的基质都属于W/O型乳剂，而W/O基质不耐热，常用38-40即有油分分离出，但其耐寒，所以两种软膏的现象属于正常现象，在室温下使用不会对实验造成不良影响。4.6小鼠日常活动状态和皮肤变化表6：小鼠的日常活动空白组模型组样品组阳性对照组第一周第二周第三周第四周第五周第六周第七周注：“”表示活动程度图1图2图3图4注：图1为空白组，图2为模型组，图3为蝇油组，图4为阳性对照组由本实验的结果可知：在活力方面，空白组的小鼠至始至终的活力旺盛，11没有明显变化，模型组的小鼠的活力从第二周开始有所下降，活动没第一周那么频繁，第五周下降非常明显，活动较少，样品组和阳性对照组的小鼠从第二周开始活动有所下降，但幅度不大，往后也没明显变化；从皮肤表面的观察可知，空白组小鼠的皮肤平整光滑有弹性；模型组小鼠的皮肤不平整，脱屑，增厚变粗糙；样品组小鼠的皮肤平整微有脱屑，无明显增厚变粗糙；阳性对照组小鼠皮肤平整微有脱屑，无明显增厚和变粗糙。结合两个结果可知，蝇油和维生素E对小鼠的皮肤有一定的抗衰老作用，虽然本实验还未在含药制剂的配比、用药量的多少这些方面做出探讨，有点不足，但也为接下来探究蝇油的抗衰老作用提供可能性。4.7体外抑菌实验图1:大肠杆菌纸片扩散法实验结果图2：伤寒杆菌纸片扩散法实验结果12图3：金葡萄球菌纸片扩散法实验结果图4：枯草杆菌纸片扩散法实验结果表7：体外抑菌结果阳性对照（cm）蝇油（cm）大肠杆菌1.290.020.740.02*伤寒杆菌0.980.030金色葡萄球菌4.310.040.630.01*13枯草杆菌1.750.020.510.02*注：与阳性对照比*P0.01；0表示没有抑菌圈出现由实验结果知，对对于大肠杆菌、金色葡萄球菌、枯草杆菌，样品组与阳性对照组相比具有显著差异（P0.01），说明蝇油对大肠杆菌、金色葡萄球菌和枯草杆菌均有抑菌效果，但由实验现象可知，其抑菌效果不是很显著，而对于伤寒杆菌，蝇油没有出现抑菌效果，这对以后蝇油在外用制剂的开发有参考性价值。145.讨论本实验通过设计正交试验，最后优选出超声联合浸提法提取蝇油的提取工艺，然后通过皮下注射D-半乳糖和紫外灯（UVA=365.0nm，UVB=253.7nm）照射脱毛小鼠背部皮肤构造皮肤衰老模型，将蝇油制成软膏增加皮肤对其吸收，用维生素E制成软膏做阳性对照，不做任何处理作空白对照和只皮下注射D-半乳糖和紫外照射作阴性对照构成对照实验；以小鼠的日常活动状态和皮肤变化为指标研究蝇油的抗衰老作用，并且通过蝇油、生理盐水和青霉素、链霉素作对照实验研究蝇油的体外抗菌效果。(1)通过设计正交试验和分析最终优选工艺为A2B3C2，即提取温度为70，提取时间为2.5h，料液比为1:12为最佳的提取条件。目前，超声波提取作为一种新型的分离技术,在天然产物提取方面得到了广泛的应用，是一种具有发展潜力的利用外力场强化提取新技术13，但在油脂提取方面的应用尚处初级阶段14，超声波提取具有被浸提的活性物质活性不被破坏,提取时间短,条件温和等优点15，溶液浸出法具有产量大,出油率高，蛋白质不变性的优点，但是品中的溶剂残留较难控制,并且萃取的纯度不高16，而且传统的浸提法时间成本比较大，本实验首次采用超声联合浸提的方法对家蝇蝇蛆油进行提取，既能保证较高提取率又可以缩短提取时间，为家蝇蝇蛆油在提取工艺方面有参考价值。(2)为研究皮肤衰老,人们建立了许多衰老动物模型,其中D-半乳糖所致的亚急性衰老模型17和皮肤/光老化0模型18应用较多,而D-半乳糖模型为全身性衰老模型，对皮肤致衰老作用不突出，而皮肤/光老化0模型则耗时较长，需连续造模半年以上才会有组织学改变。根据人体皮肤衰老是内源性生理衰老和外源性环境因素共同作用的结果，本实验采用D-半乳糖连续皮下造成小鼠皮肤细胞内源性衰老,同时用紫外线照射造成小鼠皮肤的光损伤,进一步加重皮肤的衰老，同时将蝇油制成软膏增加皮肤对其吸收，用维生素E制成软膏做阳性对照，结果发现模型组的小鼠的活力从第二周开始有所下降，活动没第一周那么频繁，第五周下降非常明显，活动较少，并且皮肤不平整，脱屑，增厚变粗糙，样品组和阳性对照组的小鼠从第二周开始活动有所下降，但幅度不大，往后也没明显变化，并且样品组小鼠的皮肤平整微有脱屑，无明显增厚变粗糙；阳性15对照组小鼠皮肤平整微有脱屑，无明显增厚和变粗糙，说明蝇油有抗衰老的效果，为蝇油的抗衰老方面的开发和利用有参考价值。(3)以生理盐水为空白对照，以青霉素、链霉素为阳性对照体外抗菌实验，实验结果表明，蝇油对大肠杆菌、金色葡萄球菌、枯草杆菌，有抑菌效果，但由实验现象可知，但其抑菌效果不是很显著，而对于伤寒杆菌，蝇油没有抑菌效果。而在临床中，特别是在烫伤临床中，伤口的感染极为常见,感染不但不利于伤口的恢复，而且常常使病情加重，给治疗增加难度；从广泛的创面组织学与细菌学调查中发现：烧伤创面附近的活组织内有大量的细菌侵入，感染多数是由于革氏阴性杆菌所致19，本实验对蝇油进行部分菌的抑菌研究这对以后蝇油在外用制剂的开发有参考性价值。16参考文献1刘晓庚,鞠兴荣,汪海峰等.昆虫油脂及其营养评价J.中国粮油学报.2003,18(6):H-15.2周琼,张健,等.昆虫功能性油脂的研究J.粮油加工与食品机械.2003,(l):37-39.3HFub,BrnoL.和omega-3脂肪酸摄入与女性发生冠状动脉性心脏病的危险J.美国医学会杂志:中文版.2002,21(6):335-335.4G.Bee,王丹莉.日粮中添加能量和脂肪对猪脂肪酸含量J.瘦肉率和脂肪生成的影响J.养殖与饲料.2004,(11):45-46.5吴时敏.功能性油脂J.2001:371一382.6Innis.S.M.Sprecher.H.Hachev.D.et.al.NeonatalpolyunsaturatedfattyacidmetablismJ.Lipid.1999.34（2）：139-1497Clarke.S.D.Jump.D.B.PplyunsaturatedfattyacidregulationofhepaticgenetranscriptionJ.Lipids,1996.31(SupplS-1-S-):78Kang.J.X.Leaf.A.TheCardiacAntiarrhythmicEffectsofPolyunsaturaatedFattyAcidJ.Lipids.1996.319贺继东，夏文水.工程蝇蛆的开发利用和深度加工J.食品业科技,2002,12:90-92.10黄文,周兴苗,张长禹,雷朝亮.蝇蛆几丁低聚糖咀嚼片的调节血脂作用J.昆虫学报,2005,48(2):314-318.11张廷军.蝇蛆的经济价值及其在动物饲料上的应用J.中国动物保健,2002,12:34-35.12ClarkeSD,JumpDB.PolyunsaturatedfattyacidregulationofhepaticgenetranscriptionJ.Lioids,1996,31(04):1-713胡爱军,丘泰球.物理场强化萃取技术7J.安徽化工,2002(1):26-27.14李林强,李建科,刘迎利.超声波处理提取华山松籽油的研究s.西北农林科17技大学学报(自然科学版),2003,31(5):115一11715郑敏燕.超声波法提取紫丁香中丁香油的研究J.青海师范大学学报(自然科学版),2003,3:32一3316莫文敏,曾庆孝.超临界流体萃取技术在提取功能性油脂中的应用J.广州食品工业科技,2000,16(4):53一5617龚国清.小鼠衰老模型研究J.中国药科大学学报,1991,22(2):101.18KathrynJ,JohnstonMD,AarneI,eta1.Ultavioletradiation-in-ducedconnectivetissuechangesintheskinofhairlessmiceJ.JInvestDermatol,1984,82(6):587-588.19戴冰.邓顺珍.烫伤膏促进创面愈合作用的实验研究J.中国中医药科技,2000,7(3):147-14818综述家蝇幼虫的研究进展1概述家蝇(Muscadomestica)属昆虫纲、双翅目、环裂亚目、家蝇科，是我国大部分地区最常见、数量最多的一种，虽然其生命周期短，但是具有强大的繁殖能力，繁殖过程由卵发育到幼虫即蝇蛆1。家蝇幼虫具有很高的营养价值，如：其体内含有丰富的蛋白质，营养价值甚至高于鱼类，甚至被广泛应用于一些由于氨基酸缺乏而引起的疾病的治疗。有研究表明，从家蝇幼虫体内可提取到几丁质，几丁质具有辅助降血脂作用2，幼虫干粉的脂肪含量在12%左右，低于一般的动物性食物而高于一般的植物性食物，脂肪含量适中，而且脂肪酸中不饱和脂肪酸和必需脂肪酸的含量较高，其组成接近植物油与鱼油3。虽然家蝇幼虫蝇油具有巨大的药用潜能。但对于蝇油的提取，传统工艺以索氏提取法、浸提法、超声提取法为主，索氏提取法虽然提取的效率较高，但多适用于一般实验室的少量油脂提取；而超声法大大缩短时间，但其提取效率较低；而浸出法不仅提取效率高，其提取的油脂通过碱炼、脱色、脱臭等化工过程进行精炼，去除油脂中杂质，可使之符合国家标准，成为可食用或用于化妆品等工艺的成品油4，但其具有较大的时间成本，不利于实验室快速提取。因此，家蝇幼虫具有巨大的药用研究价值。2家蝇幼虫成分的开发与利用2.1蛋白质的开发与利用家蝇幼虫富含蛋白质，提取后可用于食品工业、发酵工业、橡胶工业等。家蝇幼虫蛋白质的提取通常通过清洗、研磨、盐提、酸沉淀、透析这些步骤，19在此基础上，通过水解蛋白质还可以制得氨基酸，并且所制得的蛋白质和氨基酸不仅可以用于食品还可以用于药品，如具有强烈杀菌作用的“抗菌活性蛋白”,这种活性蛋白只要1/10000浓度就足以杀灭入侵的病菌，同时其血淋巴中含有具抗癌作用的凝集素，家蝇幼虫体内还含有一种粪产碱菌，能抑制皮肤脓疮的多种病菌，并能促进表皮的生成和疮伤的愈合5，或治疗一些由于氨基酸缺乏而引起的疾病,目前国内市场销售的“力诺活性排毒素”和“福来康”产品都是利用家蝇幼虫活性粉所制得。2.2几丁质的开发与利用几丁质是一种天然高分子聚合物，属于氨基多糖，由于其具有天然、无毒和良好的生物相溶性、可降解性以及独特的分子结构和物理、化学、生物性质，因此它被广泛应用于在医学、药物制剂学、化工、食品等方面，现在已经被国内外科学界、医学界、企业界所重视。当前，几丁质的生产原料主要是虾蟹壳，而所用虾蟹壳原料80%是从冷藏加工厂收购的，但仅占可利用虾蟹壳原料的20%左右，其利用率非常低，然而家蝇幼虫可大规模养殖，而且其主要利用工农业下脚料作为养殖饲料，养殖成本较低，为提取几丁质提供了充足的廉价原料。此外,有研究表明几丁质还具有辅助降血脂作用。2.3抗菌物质的开发与利用家蝇抗菌物质主要存在于家蝇的血淋巴中，其产生或合成是外界因素诱导作用下发生的生物效应。抗菌物质主要是近中性和碱性蛋白，由5种组分构成，其中碱性最强的一种抑菌活性最大。家蝇抗菌物质具有较稳定的理化特性，而且具有广谱抗菌活性，如对大肠杆菌、金黄色葡葡球菌、软腐病菌、黑腐病黄色单胞菌、苏云金杆菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯氏菌、B-溶血性链球菌、鼠伤寒沙门氏菌、黄单胞菌等都具有一定的抑菌作用。家蝇的抗菌物质可通过致病性细菌直接感染，也可以是一些不造成感染的物理或化学的因素，如超声波、射线、生理盐水、聚肌胞核苷等来诱导产生，诱导产生的抗菌物质可通过提取血淋巴分离获得。2.4凝集素的开发与利用20家蝇幼虫体内含有凝集素，凝集素是一类糖结合蛋白，能专一地与单糖或寡糖结合，具有凝集细胞的作用。许多研究证实，昆虫凝集素在昆虫免疫中可能起着极其重要的作用，它很可能是昆虫识别外源的一类关键物质。另外，目前许多学者认为研究昆虫凝集素的主要意义在于抗肿瘤，已发现昆虫凝集素能介导鼠巨噬细胞、多核白细胞以及有巨噬细胞活性的细胞株溶解肿瘤细胞活性，还发现昆虫凝集素能治疗鼠体腔和实体瘤。用生物的、物理的诱导因子，均能诱导家蝇的血淋巴产生凝集素。凝集素的功能和它对糖作用的专一性关系十分密切，半乳糖和岩藻糖可与凝集素专一性结合。根据这一特性，可采用Sepharose4B进行亲和层析纯化获得凝集素。2.5油脂的开发与利用目前家蝇幼虫油脂的研究大部分集中在其化学组成上，目前已用气相色谱法分析了家蝇幼虫蝇油、蛹油、成蝇油中脂肪酸的组成和含量，并且共鉴定出10种脂肪酸，其中不饱和脂肪酸占64.5%，饱和脂肪酸占35.29%，同时，对于不同虫态，其脂肪酸的含量存在差异6。此外，有研究表明家蝇幼虫干粉的脂肪含量在12%左右，低于一般的动物性食物而高于一般的植物性食物，脂肪含量适中，而且脂肪酸中不饱和脂肪酸（68.2%）和必需脂肪酸（36%）的含量较高，其组成接近植物拍与鱼油7。在其他生物活性方面，顾亚凤研究了家蝇幼虫蝇油对实验动物皮肤的刺激性和过敏性，并对烫伤治疗的药效学进行了研究，研究结果指出家蝇幼虫蝇油对正常皮肤及破损皮肤均无刺激性作用，对皮肤也无过敏反应，同时，药效学试验表明，家蝇幼虫蝇油溶液对浓盐酸引起的化学致炎及烧伤具有明显的治疗作用8。更有报道称，昆虫油脂能减缓机体衰老，使人延年益寿9-12。3油脂提取方法3.1传统方法昆虫油脂提取的传统方法有浸出法和索氏提取法等。3.1.1索氏提取法21其方法是利用有机溶剂将被提取物质的油脂萃取、溶解，成为被提取物油与有机溶剂的混合物，然后利用被提取物油和溶剂的沸点不同，经蒸馏分离得粗脂肪（油），应用有机溶剂加热提取,需采用回流加热装置，以免溶剂挥发损失。操作时，可在平底烧瓶上连接回流冷凝器索氏提取器内装被提取物，溶剂浸过被提取物表面约1-2cm，在水浴中加热回流，一般保持沸腾约6-8h，减压蒸馏，回收溶剂。此法提取效率较浸出法高，适用于实验室少量提取，大量生产中多采用连续提取法。3.1.2浸出法该法在国内外广泛应用，运用化工原理，使用食用级溶剂从油料中抽提油脂，该方法选用与油脂能以任何比例互溶的有机溶剂（目前普遍采用6号溶剂油），对含油料胚进行浸泡、冲洗，油脂溶剂在有机溶剂中，得到溶剂与油脂的混合物，然后进行加热蒸发，使溶剂挥发，留下的便是制取的油脂，用浸出法制取的油脂，都需通过碱炼、脱色、脱臭等化工过程进行精炼，以去除油脂中杂质，才能使之符合国家标准，成为可食用的成品油。3.1.3高新技术工程在油脂萃取中的应用随着科学技术的发展!新技术的不断采用，食品工业尤其是油脂萃取已逐渐抛开传统落后的提取方法，采用高效、安全、卫生、方便、快捷、低耗的新技术，如超临界流体技术、挤压膨化技术、胶囊化技术、分子蒸馏技术、膜分离技术、超声波技术、微波和远红外技术等。新技术的采用可大大提高油脂产率和纯度，保持油脂的营养和降低生产的成本，但其最大的缺点设备昂贵，