复方白芍保肝颗粒生产工艺研究

0摘要化学性肝损伤,是由化学性肝毒性物质所造成的肝损伤。大自然和人类工业生产过程中均存在一些对肝脏有毒性的物质，可引起不同程度的肝细胞坏死、脂肪变形、肝硬化和肝癌。对治疗化学性肝损伤的药物研究很多,但多为单方药物。本文以白芍为主要原材料，以葛根、甘草、五味子、丹参为辅料，在传统中医药配方的基础上严格按照保健食品开发的相关要求及法律法规加以合理调整，进而研发制作对抗化学性肝损伤的保健食品，复方白芍保肝颗粒。文章主要通过正交实验，对提取剂浓度、提取时间、提取温度、提取剂用量、提取次数等因素进行比较，并采用紫外分光光度法，以芍药苷，五味子醇甲，葛根素的回收率为主要参考指标筛选最佳提取工艺。实验得出的最佳醇提工艺：提取剂为75%乙醇，提取三次，提取时间分别为1h，料液比分别为1:4。实验得水提最佳工艺为：提取三次，每次料液比1:6，每次时间分别为1.5h，醇沉工艺以70%乙醇效果最佳。最后经最佳提取工艺测得，五味子醇甲收率为，1.62%；葛根素收率为，3.69%；芍药苷收率为，2.52%。回收率均在70%以上。关键词：保肝；白芍；五味子；正交试验1AbstractChemicalliverinjury,iscomposedofchemicallivertoxicliverinjurycausedby.Natureandhumanindustrialproductionprocesstherearesomeonhepatictoxicsubstances,cancausevaryingdegreesofnecrosisoflivercells,fatdeformation,livercirrhosisandhepatocellularcarcinoma.Onthetreatmentofchemicalliverinjuryofmany,butforthesingledrug.Thewhitepeonyrootasmainrawmaterials,usingtherootofkudzuvine,licorice,Schisandra,Salviamiltiorrhizaasauxiliarymaterial,inthetraditionalChinesemedicineformulaonthebasisofthedevelopmentofhealthfoodinstrictaccordancewiththerelevantrequirementsandlawsandregulationstoadjust,andR&Dproductionagainstchemicalliverinjuryofhealthfoodproducts,compoundwhitepeonyliverparticles.Thisarticlemainlythroughtheorthogonalexperiment,theextractingagentconcentration,extractiontime,extractiontemperature,extractionagent,extractiontimesandotherfactorswerecompared,andtheultravioletspectrophotometry,thepaeoniflorin,schisandrin,HoneSorecoveryrateasthemainreferenceindexforscreeningthebestextractionprocess.Experimentresultsshowthattheoptimalalcoholextractionprocessofextractingagent:75%ethanol,extractingforthreetimes,extractiontimewere1H,solid-liquidratioare1:4.Experimentofwaterextractionprocessforextractingforthreetimes,eachtime:liquidratio1:6,eachtimearerespectively1.5h,alcoholprecipitationprocesswith70%ethanoleffectisbest.Finally,theoptimumextractionprocessofSchizandrolAmeasured,yield,1.62%;puerarinyield,3.69%;paeoniflorinyield,2.52%.Therecoveryrateswereallover70%.Keywords:Protectionoftheliver；Whitepeonyroot；Schisandrin；Processformula2目录摘要.1Abstract.2前言.5第一章文献综述.61.1化学性肝损伤.61.1.1化学性肝损伤简介.61.1.2国内外研究现状.61.1.3市场现有产品及使用方法.81.2复方白芍保肝颗粒.91.2.1原材料简介.91.2.2原料功效成分及作用.101.2.3产品归属及作用.111.2.4配方依据.111.3功效成分提取方法及检测.121.3.1功效成分提取.121.3.2提取目标要求.121.4本文研究内容及意义.12第二章实验部分.142.1实验原料与设备.142.1.1实验材料.142.1.2实验设备.152.2试验方法.152.2.1工艺流程图.152.2.2工艺条件选择方法.172.2.3浸膏中标志性成分检验.172.2.4实验结果分析.182.3工艺部分.192.3.1配方选择.192.3.2醇提工艺选择.192.3.3水提工艺选择.232.3.3.1水提工艺.232.3.4水提醇沉工艺研究.28第三章结果与讨论.283.1结果总结.283.2工艺说明.313.2.1原辅料质量检验.313.2.2提取工艺说明.313.2.3制剂.31前景展望.32致谢.33参考文献.3434前言化学性肝损伤,是由化学性肝毒性物质所造成的肝损伤。这些化学物质包括酒精、环境中的化学毒物及某些药物。大自然和人类工业生产过程中均存在一些对肝脏有毒性的物质，可引起不同程度的肝细胞坏死、脂肪变形、肝硬化和肝癌。对治疗化学性肝损伤的研究很多,但多为单方药物。近些年对复方白芍保肝颗粒配方中所用的白芍、五味子、甘草、葛根、丹参五味药，在缓解化学性肝损伤方面的研究报道较多，经查证复方中药对化学性肝损伤在功效及安全性上优于单方中药。而目前我国保健品市场空前发展，因此复方白芍保肝颗粒的开发，有相当大的潜在市场。有养血柔肝、缓中止痛、敛阴收汗的功能1。白芍提取物对D-半乳糖胺所致肝损伤和SGPT升高有明显的对抗作用，能使SGPT降低，并使病变和坏死的肝细胞恢复正常2。白芍的乙醇提取物能使黄曲霉素B1引起的大鼠急性肝损伤所表现出来的乳酸脱氢酶及同功酶的总活性升高得以降低。白芍总苷可抑制四氯化碳所致小鼠血浆GPT和乳酸脱氢酶升高。有人认为，四氯化碳所致的肝损伤是因细胞膜结构发生过氧化作用而破坏，使血中谷丙转氨酶和乳酸脱氢酶升高，白芍总苷可能对肝细胞损伤具有保护作用，因此可使转氨酶降低。滇南本草:“泻脾热，止腹疼，止水泻，收肝气逆疼，调养心肝脾经血，舒经降气，止肝气疼。”医学启源:”安脾经，治腹痛，收胃气，止泻利，和血，固腠理，泻肝，补脾胃。”张山雷:“仲圣之法，实即秦、汉以前历圣相传之法。说者每谓酸痛是肝木凌脾，芍能助脾土而克肝木，故为腹痛之主药。要知肝秉刚强之性，非藉阴液以涵濡之，则暴戾恣瞄，一发而不可制，当其冲者，实惟脾土先蒙其害，凡心胃痛、腹满痛、胸胁刺痛、支撑胀闷，无一非刚木凌脾之病。宋、元以来，治此者多尚香燥气药，以刚济刚，气行而通则不痛。非不暂图目前之效，然愈燥而阴愈耗，肝愈横，频发加剧，卒至肝脾之阴两竭，而燥药且不可复施，此行气伐肝，适以变本加厉，非徒无益，而又害之矣。仲圣以芍药治腹痛，一以益脾阴而摄纳至阴耗散之气，一以养肝阴而柔刚木桀骜之威，与行气之药，直折肝家悍气者，截然两途，此泻肝与柔肝之辨。而芍药所以能治腹痛胀满、心胃刺痛、胸胁胀痛者，其全体大用，即此是法，必不可与伐肝之剂作一例观也。”（本草正义）考虑到复方白芍保肝颗粒的开发属厂家委托，原料白芍产地优势，因此配方以白芍为君药，其它四味药为臣药。本文在已有中医理论基础上做了适当调整，根据保健食品原材料的选择要求将五味子、葛根、甘草、丹参进行合理的搭配，通过正交实验获得最佳提取工艺，按照安全、节能、节水等要求，以五味子醇甲、芍药苷、葛根素的收率为主要指标筛选水煎醇沉，醇提热回流，浓缩等的最佳工艺，并配以适当的甜味剂白砂糖、包埋剂麦芽糊精进行制粒，制得复方白芍保肝颗粒。5第一章文献综述1.1化学性肝损伤1.1.1化学性肝损伤简介化学性肝损伤,是由化学性肝毒性物质所造成的肝损伤。这些化学物质包括酒精、环境中的化学毒物及某些药物。作为人体的重要解毒器官的肝脏，具有肝动脉和肝静脉双重血液供应。化学物质可通过胃肠道门静脉或体循环进入肝脏进行转化，因此肝脏容易受到化学物中的毒性物质损害。大自然和人类工业生产过程中均存在一些对肝脏有毒性的物质，称为“亲肝毒物”，这些毒物在人群中普遍易感，潜伏期短，病变的过程与感染的剂量直接相关，可引起肝脏不同程度的肝细胞坏死、脂肪变形、肝硬化和肝癌。根据毒性的强弱，亲肝毒物可分为三类：剧毒类：包括磷、三硝基甲苯、四氯化碳、氯奈、丙烯醛等。高毒类：砷、汞、锑、苯胺、氯仿、砷化氢、二甲基甲酰胺等。低毒类二硝基酚、乙醛、有机磷、丙烯晴、铅等。一些亲肝毒物与其他非毒性化学物质结合，可增加毒性，如脂肪醇类（甲醇、乙醇、异丙醇等）能增强卤代烃类（四氯化碳、氯仿等）的毒性。这些亲肝毒物的致病机理：脂肪变性。四氯化碳、黄磷等可干扰脂蛋白的合成与转运，形成脂肪肝。脂质过氧化反应。这是中毒性肝损伤的特殊表现形式，如四氯化碳在体内代谢产生一种氧化能力很强的中间产物，导致生物膜上的脂质过氧化，破坏膜的磷脂，改变细胞的结构与功能。胆汁郁积反应。这主要与肝细胞膜和微绒毛受损，引起胆汁酸排泄障碍有关。1.1.2国内外研究现状关于化学性肝损伤国内外研究主要是围绕酒精肝及排毒解毒为主题，其中作为药物原料的甘草，葛根，五味子的研究比较多。甘草苷是甘草中主要的活性成分，为白色或淡黄色结晶型粉末，无臭，有特殊甜味，其甜度约为蔗糖的250倍。易溶于热水和热的稀乙醇，不溶于无水乙醇和乙醚。分子式为C42H62O16，分子量为822.93，熔点220。甘草苷具有抗炎、抗病毒和保肝解毒及增强免疫功能等作用。甘草苷具有肾6上腺皮质激素样作用，能抑制毛细血管通透性，减轻过敏性休克的症状。可以降低高血压病人的血清胆醇。由于甘草苷有糖皮质激素样药理作用而无严重不良反应，在临床中被广泛用于治疗各种急慢性肝炎、支气管炎和艾滋病。还具有抗癌防癌、干扰素诱生剂及细胞免疫调节剂等功能。无论通过静脉注射或口服给予甘草苷，甘草酸在体内代谢成甘草次酸而发挥作用，这一转化过程依赖肠道正常菌群水解，缓慢进行。静脉注射的甘草酸首先在肝细胞内由溶酶体中-D-葡萄甘酸酶代谢成3-单-葡萄甘酸甘草次酸，后者在肝脏中进一步代谢，随胆汁排入肠内，由肠内细菌代谢成甘草次酸，再吸收入血。甘草次酸在体外的活性较甘草酸强36倍，在体内强1015倍。毒性小，对重要脏器无明显损害。少数患者服药后可出现浮肿，个别可出现胸闷、口渴、低血钾、轻度血压升高、头痛等不良反应，也有一例用药后引起精神症状的报道。以上症状停药后均可消失。五味子素为木兰科植物五味子果实的提取物，主要有效成分为木脂素类如五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子丙素、五味子酯甲等。五味子素为棕色粉末，溶于氯仿、甲醇、丙酮、环己烷、正己烷等，不溶于水。五味子甲素(SchisandrinA)的分子式为C24H32O6，分子量416.51。五味子乙素分子式为C23H28O6，分子量为400.46。五味子醇甲的分子式为C24H32O7，分子量为432.51，五味子素主要用于治疗肝炎、神经衰弱等症。具有抗氧化、保肝抗肝损伤、降低转氨酶及解毒作用。还具有收敛固涩，益气生津，补肾宁心的作用。研究显示，五味子素有保护肝脏的作用。在中了四氯化碳毒的动物中，五味子素在改善肝脏功能方面起了很大的作用。促进肝脏细胞再生：在1992年，Kubo等学者指出动物在被切除部份肝脏后，五味子可以刺激肝脏的細胞再生。这是由于在早期的肝脏再生过程中，ODC这种酵素会参与其中，而五味子素正能增加ODC的活跃度，因而可以刺激肝脏的细胞再生。五味子素能直接刺激在脑部的呼吸控制中心，从而增加呼吸的深度及次数。五味子素可直接改善神经系统。五味子素可以增强人的思考能力；在有神经衰弱问题(如疲倦、焦虑等)的动物身上，五味子可以使这些神经细胞正常化，从而改善神经衰弱的问题。对循环系统，可以增强心脏肌肉收缩及血管舒张。对消化系统，可以调节胃液的分泌。对女性生殖系统，能够刺激子宫的收缩。五味子可说是不带毒性的。在不同的临床测试中，五味子素都显示其极佳的耐药力。在实验中，即使老鼠服用大剂量(5g/kg)也不会致命。而如果连续10天让老鼠口服大剂量的五味子酒精抽取液(5g/kg)，也只是实验鼠身上发现轻微的中毒反应，如：减少活动量；但实验鼠的所有重要器官都沒有受到明显的影响。7葛根素（puerarin）别名普乐林、葛根黄素、黄豆甙元8-C-葡萄糖甙，是葛根的主要有效成份之一和标志成分。化学名为：8-D-葡萄吡喃糖-4,7一二羟基异黄酮。分子式C21H20O9，分子量为416.39。低含量时为棕色粉末，高含量为白色针状结晶粉末，熔点187188，溶于甲醇，微溶于乙醇、水，不溶氯仿和乙醚。葛根素是葛根中含量最高的主要有效成分，因此成为评估葛根类保健食品中的重要指标。具有增强心肌收缩力，保护心肌细胞作用。能扩张血管、降低血压、改善微循环。保护红细胞的变形能力，增强造血系统功能。具有抗血小板聚集，增加纤溶活性，降低血粘度作用。对肾炎、肾病肾衰竭均有保护作用。对非特异性免疫、体液免疫、细胞免疫有明显的调节作用。可促进正常人和肿瘤病人的淋巴细胞转化率，增强自然素作用。对于干扰系统有明显的刺激和诱生作用。其主要化学成份为皂苷类化合物葛根黄酮。此外，葛根素对肝组织免疫损害具有保护作用，对突发性耳聋患者的甲皱微循环有改善作用，对缺氧心肌具有保护作用等功效。动物实验表明，随着给药剂量的增加（35mg/kg、75mg/kg、370mg/kg），药物的消除半衰期明显降低（分别为11.8h、10.4h、4.7h）。体内分布以肝、肾、心脏和血浆中较多，睾丸、肌肉、脾脏次之，并可通过血脑屏障进入中枢。葛根素消除较快，在体内不易蓄积。小鼠静脉注射葛根素，LD50为634.3mg/kg，腹腔注射LD50为1412.2mg/kg。大鼠腹腔注射葛根素150mg/kg、100mg/kg，50mg/kg连续5周，无积蓄性毒性，对心、肝、肺、脾、肾、肾上腺及肠等脏器无明显毒性。犬静脉注射葛根素，每日50mg/kg、30mg/kg、15mg/kg连续5周，再观察70天，对大小便常规、血常规、SGPT，BUN、血糖均无明显影响。健康成年SD大鼠实验，剂量为50、150mg/kg，对雌性大鼠胚胎及雄性大鼠生殖细胞均无致畸作用。致突变试验表明，葛根素没有潜在的致癌和致突变危险性。少数病人在用药开始时出现暂时性腹胀、恶心等反应，继续用药可自行消失。极少数病人用药后有皮疹、发热等过敏现象，立即停药或对症治疗后，可恢复正常。严重肝、肾损害，心衰及其他严重器质性疾病者禁用。有出血倾向者慎用。对葛根素有过敏或过敏体质者禁用。1.1.3市场现有产品及使用方法目前治疗化学性肝损伤的药品种类很多，而保健食品虽不多但潜在市场很大。因为药品对肝的伤害作用是不可避免的，因此副作用一直是消费者在购买治疗化8学性肝损伤药品时所顾忌的一方面。目前主要是以下几种药品。肌醇：能促进肝中脂肪代谢，可用于脂肪肝的防治，常用片剂0.25g/片，剂量为0.51g，一日三次。肝泰乐：可能降低肝淀粉酶的活动，阻止糖原分解，使肝糖原量增加，脂肪贮量减少，可用于急、慢性肝炎，肝硬化等。此外，本品可和多种药物、毒物结合成无毒的葡萄糖醛酸结合物随尿排出。用法：口服0.10.2g，一日3次，或肌肉或静脉注射0.10.2g，一日12次。辅酶A：为体内乙酰化反应的辅酶，对糖、脂肪及蛋白质的代谢起重要作用，和体内乙酰胆碱合成、肝糖原积存、胆固醇量的降低及血浆脂肪含量的调节等有关，但对其疗效尚有争议。用法：静滴，一日12次，或隔日1次，每次50U，用生理盐水或510葡萄糖500ml稀释。肌注，一日1次，每次50U，以生理盐水溶解后注射，一般以714日为一疗程。GIK：在10葡萄糖溶液1000ml中，加入10氯化钾10ml，正规胰岛素812U，缓慢静脉滴注，一日1次。肝乐：40mg口服，一日3次；或4060mg肌注，一日1次。茵陈制剂、水飞蓟制剂、田基黄针等中药。较重病例,可使用糖皮质激素，根据病情，调整剂量及疗程，但要注意其副作用，特别注意预防上消化道出血。1.2复方白芍保肝颗粒1.2.1原材料简介白芍为毛莨科植物芍药的干燥根。呈圆柱状，平直或稍弯曲，两端平截，长518cm，直径12.5cm。表面类白色或淡棕红色，光洁或有纵皱纹及细根痕，偶有残存的棕褐色外皮。质坚实，不易折断，断面较平坦，类白色或微带红棕色，形成层环明显，射线放射状。气微，味微苦、酸。五味子不规则球形或扁球形直径58mm。表面红色、紫红色或暗红色，皱缩，显油润；有的表面棕黄色，有光泽，种皮薄而脆。果肉气微，味酸；种子破碎后，有香气，味辛微苦1。丹参根茎短粗，顶端有时残留茎基。根数条，长圆柱形，略弯曲，有的分枝并具须状根，长1020cm，直径0.31cm，表面棕红色或暗棕红色，粗糙，具纵皱纹。老根外皮疏松，多显紫棕色常成鳞片状剥落。质硬而脆，断面疏松，有裂隙或略平整而致密，皮部棕红色，木部灰黄色或灰黄色或紫褐色，导管束黄白色，呈放射状排列。气微，味道微苦涩1。9葛根呈终切的长方形厚片或小方块，长535cm，厚0.51cm。外皮淡棕色，有纵皱纹，粗糙。切面黄白色，纹理不明显。质韧，纤维性强。气微甜1。甘草呈圆柱形，长25100cm，直径0.63.5cm，外皮松紧不一。表面红棕色或灰棕色，具想著的纵皱纹、沟纹、皮孔及稀疏的细根痕。质坚实，断面略显纤维性，黄白色，粉性，形成层环明显，射线放射装，有的有裂隙。根茎呈圆柱形，表面有芽痕，断面中部有髓。气微，味甜而特殊1。1.2.2原料功效成分及作用白芍有益气、养血、止痹、通络的作用，是风湿免疫性疾病、肝炎、肝硬化等疾病治疗的重要组方之一。其药效成分主要为一组糖苷类物质，包括芍药苷、羟基芍药苷、芍药花苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷等，统称为白芍总苷（Totalglu-cosidesofpeony,TGP），其中芍药苷占总苷量的90%以上，分子式为C23H28O112。五味子中五味子素（schizandrin）、去氧五味子（de-oxyschizandrin）、新五味子素（neoschizandrin）、可以保护人体五脏-心、肝、脾、肺、肾。五味子能促进肝脏的解毒过程、保护肝脏免受毒害，并能再生因滥用酒精、药物或肝炎而受损的肝脏组织。五味子亦能有效地降低不断升高的转胺酶丙胺酸转胺酶（SGPT/ALT-20天内降低75%）和甲型胎儿球蛋白（AFP-最广泛用于生化血液检验以检测肝癌）水平，比起广为人知的水飞蓟素（取自奶蓟），其效用更安全。醋胺酚（一种常用的退热镇痛药）足以降低肝脏的谷胱甘肽（GSH）水平，可能造成肝脏受损，而五味子能加速醋胺酚的代谢率及减低GSH耗损，帮助保护肝脏。3葛根含多种黄酮类成分，主要活性成分为大豆素(daidzein）、大豆甙（daidzin）、葛根素（puerarin）、葛根素-7-木糖甙（puerarin-7-xyloside）等提高肝细胞的再生能力，恢复正常肝脏机能，促进胆汁分泌，防止脂肪在肝脏堆积4，促进新陈代谢，加强肝脏解毒功能，防止酒精对肝脏的损伤。对高血脂形成的冠状动脉硬化，通过改善心肌缺血状态，防治冠心病、心绞痛、心肌梗塞等心血管疾病。对高血脂形成的脑动脉硬化，通过改善脑缺血状态，防治脑梗塞、偏瘫、血管性痴呆等脑血管疾病。强化肝胆细胞自身免疫功能，抵抗病毒入侵。甘草中甘草酸（glycyrrhizicacid），又称甘草甜素，一种三萜衍生物，分子式C42H62O16，为甘草次酸的二葡萄糖醛苷（见苷），是甘草的甜味成份，存在于甘草属植物中，在乙酸中结成片状或棱柱状晶体。在220分解，溶于水。甘草次酸分子式C30H46O4。有两种同质异晶体。熔点分别为300304和287293，比旋光D+163，溶于乙醇。甘草浸膏及甘草甜素对某些药物中毒、食物中毒、体内代谢产物中毒都有一定的解毒能力。解毒作用的有效成份为甘草甜素，解毒机制为10甘草甜素对毒物有吸附作用，甘草甜素水解产物葡萄糖醛酸能与毒物结合，以及甘草甜素有肾上腺皮质激素样作用，增强肝脏的解毒能力等方面因素综合作用的结果。丹参中丹参酮，A，B，隐丹参酮，丹参新醌B，二氢丹参酮，亚甲基丹参醌等8。丹参具有加强心肌收缩力、改善心脏功能，不增加心肌耗氧量、扩张冠脉，增加心肌血流量；扩张外周血管，血流增加；脑血流量下降；提高纤溶酶活性；延长出、凝血时间；抑制血小板聚集（提高血小板内cAMP水平抑制TXA2合成）；改善血液流变学特性（血粘度降低、红细胞电泳时间缩短）；促进组织的修复与再生，坏死心肌清除快；纤维母细胞分化、胶原纤维形成较明显；肉芽形成比较成熟。局部淤血减轻、血液循环改善，愈合时间缩短。对过度增生的纤维母细胞有抑制作用。改善肝微循环。丹参制剂中含有隐丹参酮、二氢丹参酮，对体外的葡萄球菌、大肠杆菌、变性杆菌有抑制作用。丹参能使主动脉粥样斑块形成面积明显减少，血清总胆固醇、甘油三酯、均有一定程度的降低。丹参可抑制高脂膳食家兔的血脂上升。通过研究发现丹参素还能抑制细胞内源性胆固醇的合成。1.2.3产品归属及作用复方白芍保肝颗粒属于保健食品，其功效声称是对化学肝损伤有辅助保护功能。严格按照根据保健食品检验与评价技术规范（中华人民共和国卫生部2003年版）规定的功能开发。1.2.4配方依据首先按照经典中医著作选取合适药材，再根据保肝清肝等处方及临床治疗的经验和国内外的研究报道，在此基础上进行合理适当调整。选取白芍、五味子、甘草、葛根与丹参为原料。同时由于原料产地及供应的特殊性选择白芍为君药其余为臣药。其次按照保健食品选材规定卫生部关于进一步规范保健食品原料管理的通知（卫法监发200251号)、中国食物成分表、营养强化剂卫生标准（GB14880）、关于印发等8个相关规定的通告、食品添加剂使用卫生标准（GB2760）等。其中按照卫生部关于进一步规范保健食品原料管理的通知（卫法监发200251号)中规定保健食品原料总个数为5没有超过规定的14个；附件1之外的动植物物品（或原料），个数为3个没有超过4个其中附录2里有丹参，五11味子，白芍三味药；使用附件1和附件2之外的动植物物品（或原料），个数不得超过1个，而配方中没有涉及，综上配方的选材是符合保健品开发要求的。1.3功效成分提取方法及检测1.3.1功效成分提取白芍主要以芍药苷的为目标功效成分，经查证其芍药苷为吸湿性无定形棕褐色粉末（90%为类白色粉末），可以选择醇提，也可选择水提，两者效果相近，再参考中国药典有关标志性成分提取方法，故得出醇提效果稍好，因此需要正交实验选择最佳提取工艺。五味子中以五味子醇甲为标志性成分，经查寻相关文献，可知其水溶性较好，故可选择水提工艺。丹参中以丹参酮A为标志性成分，易溶于乙醇，丙酮，乙醚，苯等有机溶剂，微溶于水故选择醇提工艺。葛根中的葛根素、甘草中的甘草苷水溶性较好，于是选择水提工艺。本实验检测指标选择每味中药目标成分得率为主，以节能节材为辅，选择混提最佳工艺条件。经过查证大量文献及研究报道，现拟定白芍与丹参采用醇提法进行混提，五味子、葛根、甘草采用水提。由于水提工艺以水为溶剂，加热煮沸提取，但相应地增加其他水溶性成分如蛋白质、多糖、鞣质等杂质，可用传统的醇沉法除去。醇沉过程中伴随吸附和包埋，致使功效成分有不同程度的损失。提取水提液中功效成分时，选择一个合适的醇浓度，能够提高醇沉的效率。1.3.2提取目标要求对各药材目标成分检测，参照中华人民共和国药典2010版，每味药材的所选择的目标成分含量最低值分别为：芍药苷1.2%；葛根素2.4%；五味子醇甲0.4%，经过提取工艺后功效成分的转移率分别不得小于50%。1.4本文研究内容及意义肝是人体非常重要的脏器之一，具有调节蛋白质、糖、脂肪代谢；生成、排泄胆汁，帮助脂肪的消化和吸收；解毒；凝血；调节血容量、水、电解质等功能。中医认为，肝是藏血之脏，既能贮藏血液，又能调节血量，与人体的活力密12不可分；肝同时影响脾胃运化，如果肝有病证，脾胃功能也会失调；再者，肝主情志，如果生气、愤怒就会引起肝气郁结、肝阳上亢等，反过来，肝病患者情绪易激动、心情郁闷、脾气较大。自古我国中医就有季节养生的传统。中医认为，春节万物生发，树木生长，五行为木，而肝脏中医五行同属木，春季宜养肝。本文旨在研究白芍、五味子、丹参、葛根、甘草五味中药的最佳提取工艺，本着功效成分最大程度提取，能源资源最大节约，安全简便的原则，进行实验。其中包括，原药材检验，提取工艺选择及最佳提取方法，浓缩制浸膏，颗粒剂制作等主要过程，其中提取工艺的选择则是本实验的重点。通过合理的实验探究，使得研究结果能为大规模生产提供重要技术参数和质量指标。13第二章实验部分2.1实验原料与设备2.1.1实验材料2.1.1.1原药材白芍、五味子、甘草、葛根、丹参饮片，购于北京同仁堂大药房长春店。麦芽糊精、白砂糖购于欧亚超市。2.1.1.2实验试剂甘草苷标准品，中国药品生物质检所；五味子醇甲标准品，中国药品生物质检所；葛根素标准品，中国药品生物质检所；丹酚酸B标准品，飞宇生物科技有限公司；苯甲酸标准品，飞宇生物科技有限公司；丹参酮A标准品，飞宇生物科技有限公司；乙醚，北京化工厂；三氯甲烷，北京化工厂；石油醚，北京化学试剂公司；甲醇，北京化工厂；乙醇，北京化工厂；香草醛，沈阳市试剂五厂；浓硫酸，北京化学试剂公司；甲苯，北京化工厂；乙酸乙酯，北京化工厂；纯化水，工业大学生物楼实验室；正丁醇，北京化工厂；95%乙醇，天津富宇精细化工有限公司；香草醛，天津市光复精细化工研究所；甲酸，天津市光复精细化工研究所；142.1.2实验设备DK-8D型电热恒温水槽，上海医用恒温设备厂；分析天平：感量0.0001g，北京赛多利斯天平有限公司；LYYF-GYM-86实验型粉碎机，浙江丰利粉碎设备有限公司；101-A点热鼓风干燥箱，上海医用恒温设备厂；DLI型万用电炉，北京中兴伟业仪器公司；低温电冰箱，中国海尔集团有限公司；紫外分光光度仪（UV1102），上海天美科学仪器公司；RE-52C旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂；DF-101S磁力搅拌器，金坛市科析仪器有限公司；电饭锅，九阳股份有限公司；索氏提取器，中西远大有限公司；2.2试验方法2.2.1工艺流程图2.2.1.1提取工艺流程图综合以上试验所得最佳工艺，将醇提工艺与水提工艺综合：白芍300g、丹参150g，乙醇浓度为75%，提取三次，料液比分别为1:4；提取时间每次为1h。合并三次滤液减压回收乙醇，回收条件为60，-0.06Mpa，得到浓缩液。继续加热浓缩温度控制在80左右，以防功效成分分解影响实验结果。当浓缩至相对密度1.251.30(60)时停止浓缩。葛根250g、五味子150g、甘草250g，料液比1:6；提取时间为每次1.5h进行提取，将三次提取液过滤后合并，然后进行加热浓缩，使浓缩液密度达到相对密度1.251.30(60)，停止浓缩，放冷，称重并测量体积，加入95%乙醇，乙醇量要使加入的乙醇浓度达到70%。封口并放入冷藏室24h。将得到的浸膏与醇提工艺所得浸膏混合，60烘干，研磨成粉末。15以下为提取工艺的生产工艺流程图。图2-1提取工艺流程图2.2.1.2制剂工艺流程图减压浓缩（60，-0.08Mpa）至相对密度1.251.30(60)葛根250g、五味子150g、甘草250g提取3次；料液比1:6；提取时间每次1.5h滤液减压浓缩（60，-0.08Mpa）至相对密度1.251.30(60)浸膏白芍300g丹参150g乙醇浓度为75%，提取三次，料液比分别为1:4；提取时间每次为1h滤液减压回收乙醇（60，-0.06Mpa）浓缩液浸膏加热浓缩使浸膏浓度在1.1-1.5范围之内醇沉后浸膏70%乙醇进行醇沉，放置冰箱24h冷藏60烘干，研碎混合16制剂工艺流程图见图2-2。图2-2制剂工艺2.2.2工艺条件选择方法本文所用的试验方法中，最为重要的是提取工艺，由于提取工艺涉及醇提和水提，而且每一种提取方法都有很多因素在左右实验结果，因此本实验选择以正交实验为手段，选择最佳的工艺条件。2.2.3浸膏中标志性成分检验2.2.3.1芍药苷定量检测芍药苷：取5g烘干后的浸膏粉末放入圆底烧瓶中，85%乙醇100ml，加热回流2h，过滤，滤液浓缩，水溶解，用石油醚除去脂类，85%乙醇定容至10ml容量瓶。取苯甲酸标品适量，用85%乙醇制备100ug/ml的苯甲酸溶液。分别吸取上述溶液用85%乙醇配成5.00、4.00、3.00、2.00、1.00、0.5ug/ml的溶液，以85%乙醇为粉碎过筛（80目）摇摆颗粒机20目制粒白芍、丹参、甘草、五味子、葛根提取浸膏成品分装（装量5g/袋）白砂糖、麦芽糊精外包装复合膜先混合15分钟，再用90%乙醇配制调和干燥（5060）,整粒（10目、40目）软材湿颗粒颗粒17空白对照，进行紫外检测。2.2.3.2葛根素定量检测葛根素：取5g干膏粉末放入圆底烧瓶，用30%乙醇加热回流提取1.5h，过滤，蒸干，用30%乙醇定容至10ml容量瓶。取葛根素标品适量，用30%乙醇制备100ug/ml的葛根素溶液。分别吸取上述溶液用30%乙醇配成10.00、8.00、6.00、4.00、2.00、1ug/ml的溶液，以30%乙醇为空白对照，进行紫外检测。2.2.3.3五味子醇甲定量检测五味子醇甲：取干膏粉末2g，采用索氏提取法，提取剂甲醇-氯仿混合液（3:1），溶剂量60ml，提取三次，每次1.5h，过滤，合并滤液，浓缩至干，残留物用甲醇溶净定容至25ml容量瓶。取五味子醇甲标品适量，用甲醇制备0.5mg/ml的五味子醇甲溶液。分别吸取上述溶液用甲醇配成5.00、4.00、3.00、2.00、1.00、0.5ug/ml的溶液，以甲醇醇为空白对照，进行紫外检测。2.2.3.4丹参定性检测丹参酮A进行定性实验，取干膏1g加乙醚5ml，振摇，放置1h，滤过，虑液挥干，残渣乙酸乙酯溶解，取标准液，点硅胶G板，薄层分析。丹酚酸B75%回流提取1.5h，得出样品，在GF254板上进行薄层分析13。2.2.3.5甘草苷定性检测取干膏3g，加40ml乙醚，加热回流提取1h，滤过，醚液倒出，加30ml甲醇690C回流1h，滤过蒸干，残渣加水40ml，放入分液漏斗，用正丁醇蒸干，渣用甲醇溶解待用，硅胶G板薄层分析。2.2.4实验结果分析首先在进行正交实验之前对原药材进行了检测。采用紫外分光光度法测得芍药苷含量为2.52%，五味子醇甲含量为1.57%，葛根素含量为4.49%。丹参酮A、丹酚酸B、甘草苷在硅胶板上与标准品在同一位置显同形状、相同颜色斑点，由此得出所购药品合格。然后再按照试验方案进行正交试验，依据上述对实验所得浸膏中标志性成分的18检测方法检测，进而得出各指标成分的收率。通过选定的实验指标来选择最佳工艺条件。2.3工艺部分2.3.1配方选择白芍300g、五味子150g、甘草250g、丹参150g、葛根250g，麦芽糊精和白砂糖适量，按配方制粒得到500g成品。2.3.2醇提工艺选择2.3.2.1醇提工艺丹参与白芍进行混合醇提，以芍药苷回收率为主要指标同时考虑浸膏得率，以乙醇为提取剂时,提取效率主要受到料液比、醇浓度、提取时间，提取次数14四个因素影响，针对这几个因素，安排正交实验，实验水平与因素如表2-1：表2-1醇提工艺因素水平表2.3.2.2指标成分的测定对白芍中目标成分芍药苷进行定量检测，丹参功效成分丹酚酸B、丹参酮A进行定性检测17，检测方法如表2-2所示。表2-2标准曲线绘制项目方法芍药苷取苯甲酸标品适量，用85%乙醇制备100ug/ml的苯甲酸溶液。分别吸取上述溶液用85%乙醇配成5.00、4.00、3.00、2.00、1.00、0.5ug/ml的溶液，以85%乙醇为空白对照，进行紫外检测。因素水平A醇浓度（%）B料液比C提取时间（h）D提取次数1501:60.512651:5123751:41.5319图2-3芍药苷标准曲线表2-3浸膏目标成分处理方法项目方法芍药苷取5g烘干后的浸膏粉末放入圆底烧瓶中，85%乙醇100ml，加热回流2h，过滤，滤液浓缩，水溶解，用石油醚除去脂类，85%乙醇定容至10ml容量瓶。丹参酮A取0.2g干膏粉末，加入15ml乙醚，加热回流1h，滤过，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml溶解，放入容量瓶待用。丹酚酸B取0.2g干膏粉末放入圆底烧瓶中，加入25ml75%甲醇，加热回流1h，放冷，滤过，滤液浓缩至1ml，放入容量瓶。由标准曲线可得回归方程：y=0.0598x+0.0015（R2=0.9998）（公式2.1）y：标准曲线中纵轴代表浓度，ug/ml；x：标准曲线横轴代表吸光度；所取浸膏样品中芍药苷量计算：芍药苷量=V0C（公式2.2）V0：芍药苷样液总体积，ml；C：芍药苷样液浓度，ug/ml；芍药苷收率计算：芍