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制药10 黄劲论文 初稿 玉林师范学院本科生毕业论文（设计）千斤拔对环磷酰胺致小鼠生殖系统损伤的保护Preventive effectsof Philippine flemingia rooton Cyclophosphamide-induced reproduceSystem damagein Mice院系_生命科学与技术学院专业制药工程学生班级_xx级_姓名黄劲_学号xx06407116指导教师单位生命科学与技术学院指导教师姓名陈晓白_指导教师职称教授_院系生命科学与技术学院专业制药工程千斤拔对环磷酰胺致小鼠生殖系统损伤的保护制药工程（生物制药方向）xx级黄劲指导老师陈晓白摘要摘要目的探究千斤拔对环磷酰胺致小鼠生殖系统损伤的保护作用。 方法将40只小鼠随机分成5组阴性对照组（生理盐水组）、阳性对照组（环磷酰胺组）、千斤拔高剂量组（A组）（20g/kg）、千斤拔中剂量组（B组）（10g/kg）、千斤拔低剂量组（5g/kg）（C组）。 三天适应喂养后，阴性对照组和阳性对照组每只每天灌胃0.4ml的生理盐水。 千斤拔高、中、低剂量组每天灌胃0.4ml相应剂量的千斤拔提取液。 每天上午9点开始灌胃，每组连续灌胃14天，第13天给药后，除阴性对照组外，各组小鼠每天腹腔注射40mg/kg环磷酰胺造模。 末次给环磷酰胺24小时后，立即将小鼠处死，取其睾丸，观察睾丸组织切片；观察睾丸细胞微核数；观察精子畸形数。 结果 （1）对组织切片观察，与阴性对照组相比，阳性对照组、千斤拔剂量组小鼠睾丸组织结构都出现了病理改变。 而千斤拔剂量组与阳性对照组相比，阳性对照组出现了明显的病理改变，随着千斤拔剂量的减少，病理改变愈加严重。 （2）与阴性对照组相比，阳性对照组、千斤拔剂量组小鼠睾丸细胞诱发微核率、精子畸形率均高于阴性对照组（P0.01）；与阳性对照组相比，千斤拔剂量组小鼠的睾丸细胞诱发微核率、精子畸形率均低于阳性对照组（P0.01），且随着给药剂量的增加，微核率以及精子畸形率均降低。 结论在一定剂量下，千斤拔提取液对环磷酰胺致小鼠生殖系统损伤有不同程度的保护作用。 关键词千斤拔，环磷酰胺，组织切片，微核，精子畸形率Preventive effectsof Philippine flemingia rooton Cyclophosphamide-induced reproduceSystem damagein Micepharmaceutical engineeringGradexxhuangjin Director:ChenXiaobai AbstractObjective:To studypreventive effectof Philippine flemingia rooton Cyclophosphamide-induced reproduceSystem damagein Mice.Method:40mice weredivided intofive groupsfreely andeach contained8mice,that isto saynegative control group(Physiological salinegroup),positive control group(Cyclophosphamide group),high(A)(20g/kg)、middle(B)(10g/kg)、low(C)(5g/kg)Philippine flemingia root groups.Then everyday everymice ofthe negative control group and positive control group were stomachedsaline0.4ml,mice inPhilippine flemingia root high,middle andlow dose groupwerestomached correspondingdoses of Philippine flemingia root extract0.4ml for14days,the positivegroupandPhilippine flemingia root groupswere injectedCyclophosphamide(0.4g/kg)after stomachedat thethirteenth day.At theend ofthe timefor24h aftercyclophosphamide,immediately executedin mice.Take the testicular cells,to observethetesticularbiopsy;Observation testicularmicronucleus number;To observethe sperm deformity.Results: （1）For tissue slice observation,pared withnegative controlgroup,positive controlgroup,Philippine flemingiaroot dose group mice testicular tissuestructure appearedpathological changes.And Philippine flemingiaroot dose grouppared withpositive controlgroup,positive controlgroup thereis anobvious pathological changes,with Philippine flemingiarootdoses ofpull down,pathologicalchangesmore andmore serious. （2）Compared withnegativecontrolgroup,positive controlgroup,Philippine flemingiarootdose group micetesticular cells induce micronucleus rate,sperm deformityrate arehigher thanthe negativecontrolgroup(P0.01).Compared withpositivecontrolgroup,Philippine flemingiaroot ofdosegroupmicetesticularcellsinducemicronucleusrate,sperm deformityrate islower thanthe positivecontrolgroup(P0.01),and withthe increaseof drugdelivery dosage,rate ofmicronucleus andspermdeformityrate weredecreased.Conclusion:at theappropriate dose,Philippineflemingiaroot havesome protectingeffects forCyclophosphamide-induced reproduceSystem damagein Mice.Key wordsPhilippineflemingiaroot,cyclophosphamide,tissueslice,micronucleus,Sperm malformationrate目录 为豆科千斤拔属植物千斤拔，入药部分为根。 春、秋采挖，洗净切片晒干，可鲜用。 主要分布于福建、台湾、湖北、湖南、广东、海南、广西、贵州、云南等地。 具有蔓性半灌木形态，高12米。 粗锥形根，不易拔出。 三出复叶互生。 秋季叶腋抽出总状花序，有红紫色的蝶形花冠。 荚果呈矩圆形，为浅黄色，长约8毫米，有黑色球形种子2粒。 有祛风湿，强腰膝的功效。 1.1千斤拔的基本特征1.1.1植物形态蔓性千斤拔直立或披散亚灌木，高12米。 向下直伸根系，长1米许。 幼枝有棱角，披白柔毛。 叶互生；3出复叶；托叶2片，三角状，长约1厘米，具疏茸毛；叶柄长23厘米，被长茸毛；小叶矩圆形至卵状披针形，长49厘米，宽24厘米，先端略钝，有时具小锐尖，全缘，基部在叶背边缘密被茸毛，上面被稀疏的短茸毛，下面密生长茸毛；小托叶2片，线形。 花两性，腋生，短总状花序稠密；花梗长11.5厘米；花苞2裂；萼5裂，披针形，在最下面的1片最长；翼瓣基部白色，有柄，前端紫色；龙骨瓣2片，基部浅白色，前部互相包着雌雄蕊；雄蕊10，两体，花药黄色，圆形；雌蕊1，子房上位。 荚果长810毫米，径约5毫米。 种子2枚，圆形。 花期89月。 果期10月。 生长于山坡草丛中。 分布福建、台湾、广西、广东、湖北、贵州、江西等地。 1.1.2功能主治祛风利湿，消淤解毒。 可治慢性肾炎，风湿痹痛，痈肿，喉蛾，跌打损伤。 1.1.3药材鉴别（药材鉴别 （1）性状鉴别性状鉴别根长圆柱形，上粗下渐细，极少分枝，长30-70cm，上部直千斤拔径1-2cm。 表面棕黄色、灰黄色至棕褐色，有稍突起的根长皮乱及细皱纹，近顶部常成圆肩膀状，下半部间见须根痕；气徽，味微甘、涩。 以根条粗长、除净芦茎及须根、断面发白色者为佳。 （ （2）显微鉴别黄劲千斤拔对环磷酰胺致小鼠生殖系统损伤的保护2韧皮部中韧皮射线明显，韧皮纤维较多，否含有草酸钙方晶及石细胞;木质部导管旁边有纤维，心材导管较少，木射线较宽，薄壁细胞中有少许的内含物。 1.1.4药材功效祛风利湿，消瘀解毒。 治风湿痹痛，慢性肾炎，痈肿，喉蛾，跌打损伤。 1.2千斤拔的化学成分研究根中含有多种黄酮类化合物，已确定结构有蔓性千斤拔素（fliemiphilippinin）A、B、C、D，刺桐素（erythrinin）B，燃料木素（genistein）此外还含有5，7，3，4-四羟基-6，8-双异戊烯基异黄酮（5，7，34-tetrahydroxy-6，8-diprenly isoflavone），千斤拔素（Flemichin）D，羽扇豆醇（lupeol），-谷甾醇（-sitosterol）以及碳原子数为2230的正烷酸。 利用水蒸气蒸馏法提取挥发油，用GC-MS进行测定出39个化学成分，其中相对百分率含量大于4%的分别确定为a-雪松烯，7-雪松烯，雪松烯，8-愈创烯，halicene。 1.3千斤拔的药理作用1.3.1镇痛、抗炎作用陈一等1采用蔓性千斤拔乙醇提取物对小鼠进行热板试验，研究表明千斤拔乙醇提取物在热板法中显著提高小鼠痛阈，提示具有一定的镇痛作用。 试验又采用蔓性千斤拔乙醇提取物对小鼠足肿胀的影响和小鼠巴豆油耳部水肿的影响来证明其抗炎作用。 王俊芳等2探讨千斤拔抗炎的可能机制，同时探讨千斤拔、芬必得与时间之间是否具有交互效应。 结果显示千斤拔具有修复损伤神经的作用，可能是通过抗炎作用实现的，同时降低物质含量可能是其抗炎的机制之一。 且两者具有正交互作用（联合作用）。 1.3.2对周围神经损伤的保护作用袁建新等3以Wistar大鼠坐骨神经挤压为动物模型，用千斤拔给Wistar大鼠灌胃，于周围神经损伤后的不同时期检测感觉神经传导速度（SCV）、运动神经远段端潜伏期（ML）、坐骨神经功能指数（SFI）。 结果千斤拔能促进Wistar大鼠坐骨神经损伤后有髓神经再生，能促进感觉、运动纤维的恢复。 1.3.3对脑组织及血脑屏障的保护作用玉林师范学院本科生毕业论文（设计）3赵节绪等4在家兔口服千斤拔浸出液后，采用视神经孔注入无肝素化自身动脉血的方法建立急性蛛网膜下腔出血（SAH）模型，造成家兔血脑屏障损害，结果表明千斤拔对实验组家兔脑波频率和振幅的恢复有明显的促进作用，显微镜下可见脑组织也有极少量荧光现象。 1.3.4抑菌作用王明煜5用蔓性千斤拔提取物对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌及白色念珠菌等四种临床常见致病菌的抑制作用，阳性对照药物妇炎康颗粒。 结果表明，与阳性对照比较，蔓性千斤拔两种提取物对上述四种致病菌均有较好的抑制作用。 1.3.5抗血栓作用张明秋等6研究探索了千斤拔黄酮抑制血栓形成及机制，结果表明千斤拔黄酮高剂量组血小板聚集率明显降低。 说明千斤拔黄酮具有抑制血栓形成作用，其机制为主要抑制血小板活化和促进纤溶作用。 1.3.6类雌激素和抗雌激素活性作用类雌激素和抗雌激素活性作用韦丽君等7研究壮药千斤拔饮对去卵巢大鼠免疫内分泌的影响。 观察各组大鼠血清E、FSH、LH及IL的变化、子宫重量及子宫组织学改变。 壮药千斤拔饮高剂量组能够明显增加去势大鼠的子宫重量指数，但子宫内膜并无明显增厚；明显升高去势大鼠血清E、IL水平，降低去势大鼠血清FSH、LH的水平。 日本学者曾对千斤拔的提取物进行雌激素活性指导分离，从中分离得到几个活性类黄酮化合物，其中（，二甲烯丙基）染料木黄酮活性最强，连续给药对卵巢切除大鼠的子宫亦具有明显的增重作用。 抗雌激素活性试验显示，四羟基，异戊二烯基异黄酮活性最强。 1.3.7其他作用曾春兰等8观察大叶千斤拔的抗炎镇痛、抗肝损伤、抗凝血、抗疲劳作用及毒性情况，结果说明大叶千斤拔能减轻小鼠耳廓肿胀，减少小鼠扭体次数；降低肝损伤小鼠转氨酶活性，延长凝血时间和小鼠游泳时间。 急性毒性试验表明，大叶千斤拔的小鼠最大给药量为160.1生药kg，药物毒性很小。 祁晓晨等9观察大叶千斤拔水煮液对纳洛酮引起的吗啡依赖离体豚鼠回肠戒断性收缩作用及它对乙酰胆碱引起的正常离体豚鼠回肠平滑肌收缩的影响。 结果显示，大叶千斤拔对以上两种情况均有抑制黄劲千斤拔对环磷酰胺致小鼠生殖系统损伤的保护4作用。 饶伟文等10利用昆明小白鼠，对蔓性千斤拔、大叶千斤拔、宽叶千斤拔的水煎液做了急性毒性与药效学比较，结果表明，种千斤拔均属无毒类；与蒸馏水对照组相比，除镇痛、抗炎作用外，免疫增强作用、抗疲劳、抗缺氧等指标均有增强趋向。 1.4本课题研究的背景及意义根据所查阅的文献,已对千斤拔做了一些研究,但研究内容还存在一定的局限。 如千斤拔的化学成分研究比较少,有效成分的作用机制未能揭示,在千斤拔药理活性物质研究这一块，研究结果尚不明确。 这些都有待今后深入研究。 目前对千斤拔的研究和利用主要集中在蔓性千斤拔上,其它种类的研究比较少。 蔓性千斤拔由于长期遭受大量采挖,资源已经相当匮乏,今后应该加大对其它千斤拔种类的研究,寻找新的药源或发现新的有效成分,将会使千斤拔的利用和开发前景更加广阔。 环磷酰胺(cyclophosphamide，CP)是一种抗癌药物，现已在临床上广泛应用，同时也是常用的细胞毒化疗药物，它能杀死有丝分裂和进入循环周期的细胞，具有较强的免疫抑制作用，科研实验中主要用于免疫抑制动物模型的建立、生殖毒理阳性药物。 实验表明，千斤拔提取物可能对机体抗突变能力的提高，减少生精细胞凋亡11，降低环磷酰胺对生殖系统的损伤，促进生殖功能的恢复12有一定的作用。 但其作用机制还得进行进一步的研究。 为了更合理、更广泛、更科学使用这种丰富的中草药资源，本文以千斤拔的提取物为研究对象，采用微核实验等研究千斤拔对环磷酰胺致小鼠生殖系统损伤的影响，观察千斤拔是否具有抗突变作用。 通过此研究，旨在拓宽千斤拔的用途，并为千斤拔的临床用药软件提供更多、更合理、更可靠的理论和证实依据。 2实验部分2.1实验材料与设备2.1.1实验动物昆明种小鼠（SFP级），体重（20-30g？），雄性，40只，购于广西医科大学实验动物中心。 （合格证号SCXK桂xx-0002）。 2.1.2实验主要药品及试剂千斤拔（购于广西玉林市药材市场）、环磷酰胺（江苏恒瑞医药股份有限公司）、氢氧化钠（广东光华科技股份有限公司）、无水甲醇（西陇化工股份有限公司，生产玉林师范学院本科生毕业论文（设计）5批号1303051）、无水乙醇（广东光华化学厂有限公司，生产批号xx0630）、丙酮（南京化学试剂有限公司，生产批号11071210826）、硫酸（廉江市爱廉化试剂有限公司，生产批号09080122）、蒽酮（国药集团化学试剂有限公司，生产批号xx0319）、氯化钠（NaCl，西陇化工股份有限公司）、Na2HPO4（国药集团化学试剂有限公司）、香柏油(天津市光复精细化工研究所)、Giemsa（国药集团化学试剂有限公司，生产批号Fxx0806）、改良的石炭酸品红染液等。 2.1.3主要仪器组织切片的仪器？观察微核、畸形率的设备？HH-2智能数显恒温水浴锅（巩义市予华仪器有限责任公司）、奥林巴斯正置荧光相差生物显微镜（OLYMPUS公司，型号BX51R-32FB3F01）、电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）、KQ-500DV型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）、L420台式低速自动平衡离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司生产）、日立牌冷冻冷藏电冰箱等。 2.2主要试剂的制备2.2.1千斤拔水提取液的制备称取干燥千斤拔，将其尽量粉碎，第一次用10倍体积的蒸馏水浸泡3小时，煮沸1小时（煮沸后开始计时），趁热过滤，取出提取液；第二次用6倍体积的蒸馏水煮沸1小时，趁热过滤，取出提取液；合并两次提取液并浓缩至相当于生药2gml（即1ml水提液中含有2g千斤拔），置于4冰箱内保存备用，用时加蒸馏水稀释至所需浓度即可。 2.2.2其他试剂的制备三个实验用到的主要试剂(其他试剂的制备三个实验用到的主要试剂(1）0.9%的生理盐水称取9g的NaCl，加蒸馏水溶解并定溶至1000ml，并于37保存待用。 ( (2)Giemsa原液取Giemsa粉末0.75g、甘油50ml、甲醇50ml，先在Giemsa粉末中加入少量甘油，用研钵研磨至糊状后将剩余的甘油全部加入并转移至烧杯中。 于60水溶2小黄劲千斤拔对环磷酰胺致小鼠生殖系统损伤的保护6时，不时搅拌，待冷却后将甲醇加入，用擦镜纸过滤后倒入棕色瓶中4保存，保存时间越长效果越好。 (3）磷酸缓冲液（PBS）的配制贮备液A0.2mol/L磷酸二氢钠，称取NaH2PO4?H2O31.2g定容至1000ml贮备液B0.2mol/L磷酸氢二钠，称取Na2HPO4?12H2O71.6g定容至1000ml用时按所需的PH混合。 PH=7.5:A液取16ml,B液取84ml,定容至200ml。 PH=6.8:A液取51ml,B液取49ml,定容至200ml。 （ （4）10%的甲醛溶液量取甲醛100ml，加蒸馏水至1000ml。 2.3实验方法字不多，不要分ABC组了，表格写全称将40只小鼠随机分成5组阴性对照组（生理盐水组）、阳性对照组（环磷酰胺组）、千斤拔高剂量组(A组）（20g/kg）、千斤拔中剂量组（B组）（10g/kg）、千斤拔低剂量组（C组）（5g/kg）。 三天适应喂养后，阴性对照组每只每天灌胃0.4ml的生理盐水。 同等条件下，千斤拔高、中、低剂量组每天灌胃0.4ml相应剂量的千斤拔提取液。 每天上午9点开始灌胃，每组连续灌胃14天，第13天给药后，除阴性对照组外，各组小鼠每天腹腔注射40mg/kg环磷酰胺造模，末次禁食不禁水，染毒24小时后处死小鼠，取出小鼠睾丸。 阳性组前面的时间没处理？2.3.1小鼠睾丸细胞微核实验小鼠睾丸生精细胞微核标本的制作取下睾丸，置10mlTm液中，除去被膜后剪碎，置于磁力搅拌器中低速搅拌15min后，以4层檫镜纸过滤2次，再离心5min（1000rmin），废弃上清液，加适量Tm液（0.5ml）重悬，取适量细胞悬液（2滴）涂片，自然干燥（放入通风橱中）。 （2)固定与染色归在上面一起写，不要另作一点甲醇固定10min，晾干，将固定晾干后的涂片、用Giemsa染液避光染色30min，然后冲洗掉玻片上的染色液，置晾片架上晾干。 （ （3）观察计数归在上面一起写，不要另作一点先选择用低倍镜进行观察，选择染色较好，分布均匀的区域，再用油镜进行观察玉林师范学院本科生毕业论文（设计）7并计数，PCE细胞呈灰蓝色，正染红细胞(NCE)呈橘黄色。 细胞中含有的微核多数呈圆形，边缘光滑整齐，嗜色性与核质一致，呈紫红色或蓝紫色。 一个细胞内可出现一个或多个微核。 计数1000个PCE中含微核的PCE数，并且计数200个细胞中PCE与NCE的比值。 2.3.2睾丸组织切片制备石蜡切片的制作参照陈业文13、戚晓利14及龚恚锦15的方法，并稍加改进。 （ （1）取材小鼠处死后，取睾丸组织，用10%甲醛固定，脱水后在睾丸器官上，取下组织块(一般厚度不超过0.5厘米)，用生理盐水清洗血液，投入预先配好的固定液中（Bouin氏液），固定48小时。 （ （2）冲水及脱水透明冲水24小时后，用水冲洗组织块颜色变淡，由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，将组织块中的水分逐渐脱去。 再将组织块置于既溶于石蜡，又溶于酒精的透明剂二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块的中酒精，才能浸蜡包埋。 （ （3）浸蜡包埋在脱水透明过程中，把各梯度的蜡（5254、5456、5658）充分溶解，后置于63或64的烘箱中过夜。 同时用牛皮纸或广告纸折一定数量的纸盒。 次日，将组织块放入充分溶解的蜡中，顺着石蜡从低到高的熔点梯度浸透各1小时。 然后倾入适量的5658的石蜡于纸盒中，夹入浸透好的相应的组织块，同时用烧过的镊子在组织块周围轻轻搅拌。 轻吹蜡液表面，使其凝成一层薄膜后，则放入另一个装有水的盘中，做好标记。 （ （4）修蜡块将蜡块放在冷水中浸泡半小时后，拆去纸盒，修整蜡块（有一端要相应留长），长的一端固定在小木块上。 （ （5）切片与贴片将修整好的蜡块固定于切片机上，切成薄片，一般为6微米厚。 把切好的蜡带用毛笔轻轻挑起，置于报纸上，再用解剖刀选取好的部分（一般3厘米左右），再用钝头镊子取一小滴贴片剂置于洗净滴干的干玻片的一端，用手指涂抹均匀，直至拭得较干，滴几滴水，用镊子夹取一条选好的蜡带，展于水中，每张玻片放2条蜡带。 用纸巾把水吸掉一部分，再快速地置于火上微烘，使蜡和组织块都完全展平于载玻片上。 （ （6）脱蜡、染色及脱水染色前，须用松节油脱去切片中的石蜡，再经由高浓度到低浓度酒精，之后放蒸馏水，就可染色。 黄劲千斤拔对环磷酰胺致小鼠生殖系统损伤的保护8（ （7）封片用玻棒沾取中性树胶，滴一滴于已透明的切片两组织带之间，轻盖上盖玻片。 待树胶略干后，贴上标笺，切片标本就可观察。 2.3.3小鼠精子畸形试验用颈椎脱臼法处死小鼠，取出并分离睾丸，称重。 然后分离两只附睾，用生理盐水冲洗，放入成有4ml生理盐水烧杯剪碎。 通过4擦镜纸滤除组织碎片，滤液离心（1000r/min，离心5min）弃除上清液，将剩余少量液体与沉淀摇匀制片。 干燥后，甲醇固定7min，干后用改良石炭酸品红染色1小时，制片在高倍镜下检查精子形态，每只小鼠检查完整精子1000只。 凡出现双头或者头部无钩、香蕉状、无定形、肥胖以及双尾巴、尾巴折叠等现象定为畸形。 每组观察3个片？，以求出畸形率（）3实验结果3.1千斤拔对环磷酰胺损伤小鼠睾丸细胞微核率的影响表3.1千斤拔对环磷酰胺损伤小鼠细胞微核率的影响（xs?，n=8）表格列得太大，组名要全称，图的箭头不对Table3.1The effectof Philippineflemingiarooton micronucleusof mice（xs?，n=8）与阴性组比*P0.01；与阳性组比#P0.05？，#P0.01组别剂量(gkg-1）睾丸微数阴性对照组-2.401.12阳性组-19.201.58*A组205.201.38*#B组107.321.17*#C组511.341.56*#玉林师范学院本科生毕业论文（设计）9从表3.1中数据可以看出与阴性对照组相比，千斤拔剂量组、阳性对照组睾丸微核率都有明显升高（P0.01）。 但与阳性对照组相比，千斤拔剂量组微核率有明显降低，差异有统计学意义(P0.01)，并且存在一定的量-效关系。 此结果说明千斤拔对环磷酰胺注射引起的小鼠睾丸损伤具有一定程度的保护作用。 3.2小鼠睾丸组织切片图与分析图的箭头要指准确图（a）阴性对照组图(b)阳性对照组Figure（a）the normalgroup Figure(b)exemplar group图图(c)千斤拔高剂量组图(d)千斤拔中剂量组Figure(c)Philippineflemingiaroot Figure(d)Philippineflemingiaroot highdosegroupmidst dosegroup黄劲千斤拔对环磷酰胺致小鼠生殖系统损伤的保护10图图(d)千斤拔低剂量组Figure(e)Philippineflemingiaroot lowdosegroup阴性对照组光镜下,小鼠睾丸组织内各级生精细胞排列紧密规则,管壁基膜完整,管腔内充满成熟的精子，如图3.2.(a)。 阳性对照组小鼠睾丸内生精小管生精上皮明显变薄,生精细胞层数明显减少,管腔内成熟精子明显减少甚至没有,各生精小管形状不规则,管腔间隙增大，如图3.2.(b)千斤拔剂量组光镜下，小鼠睾丸组织生精小管内细胞出现病理改变，如图3.2.(c)。 随着千斤拔剂量的降低，病理改变越来越明显，小鼠睾丸生精小管内的生精细胞变性坏死,主要表现于精原细胞和初级精母细胞,细胞质减少、固缩、细胞膜破裂、坏死脱落，如图3.2.(d、e)。 3.3千斤拔对环磷酰胺损伤小鼠睾丸细胞精子畸形率的影响表3.3.1千斤拔对环磷酰胺诱导小鼠睾丸细胞精子畸形率的影响（xs?，n=8）Table3.3.1The effectofPhilippineflemingiarooton therate ofteratosperm ofmice（xs?,n=8）玉林师范学院本科生毕业论文（设计）11与阴性组比*P0.05，*P0.01；与阳性组比#P0.05，#P0.01从表3.2中数据可以看出与阴性对照组相比，阳性对照组、千斤拔剂量组小鼠睾丸细胞精子畸形率有明显升高（P0.01）（P0.05）。 与阳性对照组相比，千斤拔剂量组睾丸细胞精子畸形率有明显降低，差异有统计学意义(P0.01)（P0.05），并且降低有一定的量-效关系。 此结果说明千斤拔对环磷酰胺注射引起的小鼠睾丸损伤具有一定程度的保护作用。 4.讨论环磷酰胺（CP）是一种临床常见的抗肿瘤药物,广泛应用于各种血液系统和实体肿瘤的治疗,具有诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤细胞增殖的显著作用。 CP能够显著地引起大鼠精子数量减少,精子活力下降。 研究结果同时提示,引起包括精原干细胞在内的多种精子前体细胞凋亡,可能是CP引起生殖毒性的重要原因。 微核是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。 可以通过检测小鼠睾丸细胞的微核出现率,反映睾丸细胞染色体畸变的高低,进而判定受试物是否具有致突变作用。 生殖系统对化学毒物的作用十分敏感,在其他系统还未出现毒性反应之前,生殖系统可能已受损害。 精子畸形率的高低,可反映该化学毒物的生殖毒性和对生殖细胞潜在的致突变性。 本实验通过将一定剂量的环磷酰胺注射给小鼠，诱发其生殖系统的病变，通过实验研究千斤拔对小鼠生殖系统受损的修复作用。 实验结果表明对组织切片观察，组别剂量(gkg-1）精子畸形率阴性对照组-87.4532.32阳性组-363.5466.12*A组xx4.5846.74*#B组10175.4532.15*#C组5221.1264.21*#黄劲千斤拔对环磷酰胺致小鼠生殖系统损伤的保护12与阴性对照组相比，阳性对照组、千斤拔剂量组小鼠睾丸组织结构都出现了病理改变。 而千斤拔剂量组与阳性对照组相比，阳性对照组出现了明显的病理改变，随着千斤拔剂量的减少，病理改变愈加严重。 与阴性对照组相比，阳性对照组、千斤拔剂量组小鼠睾丸细胞诱发微核率、精子畸形率均高于阴性对照组（P0.01）；与阳性对照组相比，千斤拔剂量组小鼠的睾丸细胞诱发微核率、精子畸形率均低于阳性对照组（P0.01），且随着给药剂量的增加，微核率以及精子畸形率均降低。 这说明小鼠生殖系统在受环磷酰胺注射损伤的影响下，通过千斤拔的作用能显著的降低生殖系统的损伤程度，并随着千斤拔浓度的增加，生殖系统损伤程度减弱，存在一定的量-效关系。 桉叶油可降低CP所致小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率和精子畸形率，说明桉叶油对生殖系统损伤具有保护作用16，芦荟多糖能在体内有效降低CP诱发的骨髓多染红细胞的微核率和精子畸形率,与阳性对照组相比差异均有显著17。 李芳亮18等研究发现沙棘叶水溶性多糖剂量为50mg/(kgd)时对CP诱导的小鼠骨髓细胞微核发生率和小鼠精子畸变率有明显的抑制作用(P0.05)，说明WPHL对体细胞和生殖细胞接触致突变物和致癌物的遗传毒性有抑制作用。 （这段你想说明什么？与你的实验结果有何关系？）综上所述，千斤拔提取物能拮抗环磷酰胺对小鼠的损伤，其作用机制可能是千斤拔提取物对DNA、免疫系统的保护及抗肿瘤、自由基，（这句话是怎么推断出来的？）提高机体的抗突变能力有明显作用，从而能够降低环磷酰胺对生殖系统的损伤，促进生殖功能的恢复。 在一定剂量下，千斤拔提取物对环磷酰胺诱导小鼠生殖系统损伤具有一定程度的修复和保护作用，可为千斤拔的进一步开发提供一定的理论依据。 致谢时间如流水，转眼之间美好的大学时光即将过去。 经过一段时间的拼搏，本次的毕业论文设计将接近尾声。 在这次毕业论文设计的过程中，我学到许多专业知识和实验技能，同时也学到了许多做人的道理，非常感谢在这次毕业论文设计过