液相色谱工作原理及简单操作.ppt

Agilent1260HPLC结构及简单操作 1 Agilent1260HPLC工作原理及简单操作 内容 一 HPLC各模块的原理 二 开机 关机操作 三 软件 2 一 HPLC各模块工作原理及维护 HPLC 高效液相色谱仪 HighPerformancesLiquidChromatography 由储液器 泵 进样器 色谱柱 检测器 记录仪等几个部分组成 3 关于溶剂 HPLC各模块的工作原理及维护 所有溶剂应为HPLC级 水应为二次超纯水 所有溶剂应经过过滤 过滤水应使用一次性水相 有机相滤膜 所有溶剂应经过超声脱气 水易滋生藻类 避免直接照射 过滤水最好使用不要超过两天 注意溶剂的相容性 避免使用不相容的溶剂 避免使用强酸 强碱或有机氯等腐蚀性溶剂 在溶剂瓶中的溶剂过滤头可能会堵塞 必要时小心拿下用强酸 35 硝酸 浸泡时 用水冲洗 但不要使用超声处理 4 泵的注意事项 1 溶剂的过滤 脱气 2 避免使用腐蚀性溶剂 3 在满足分析的前提下 尽可能使用较低的流速 较低的系统压力 四元泵 缓冲溶液要放在A D通道 以避免盐颗粒析出 建议A通道 水 B C通道 有机溶剂 D通道 缓冲溶液 HPLC各模块的工作原理及维护 5 自动进样器 样品要干净 经过过滤 洗针 把样品残留降低到最小限度 HPLC各模块的工作原理及维护 6 关于恒温柱箱 控制范围 最高80 C 低温低于室温10 C 左右温度应保持一致 一定要关闭前面板 HPLC各模块的工作原理及维护 7 检测器 DAD 在没有样品分析任务时要关闭氘灯 以延长氘灯的使用寿命 但是也不要频繁的开关 这样也会影响寿命 同时 打开灯需要预热10min左右 HPLC各模块的工作原理及维护 8 检测器 FLD HPLC各模块的工作原理及维护 FLD是一款具有高度灵敏度和高度选择性的检测器 其激发光源是氙灯 此灯不需要预热 9 开机操作 1 打开计算机 2 打开LC各模块的电源 等待仪器自检完毕 1 2min 3 双击桌面上 Instrument1Online 图标 进入化学工作站 在工作站打开各工作模块 4 打开SealWash清洗液开关 清洗10min 5 打开清洗阀 排除系统中的气泡 平衡差不多30min 6 拧上清洗阀 将流量设为所需流速 平衡30min即可以打样 关机操作 1 如果使用了缓冲溶液流动相应先用水冲洗系统30min 2 用纯有机相冲洗系统30min 3 在工作站上关闭各个模块 4 退出工作站 关闭计算机 5 关闭LC各个模块的电源 二 开机 关机操作 10 指示灯状态 开机 关机操作 11 每次用过仪器后必须做 整台液相色谱仪的维护 1 在使用过含盐缓冲液后必须清水冲洗泵15分钟 此时必须打开排放阀 不能使废液进入色谱柱 2 关上排放阀 用90 10 的水 甲醇溶液冲洗整个系统 时间为15 20分钟 流量1ml min 本步骤主要是冲洗干净系统内其他含盐的部位 3 用纯的强溶剂冲洗整个系统 时间为1小时 流量为1ml min 本步骤主要是保护色谱柱 4 如果未使用缓冲液 上面1 2两步骤可免去 直接用纯的强溶剂冲洗整个系统 时间为1小时 流量为1ml min 开 关机操作 12 三 实验操作及软件1 开机 开软件2 冲柱子 95 甲醇 排气泡 5 甲醇 排气泡 流动相 排气泡 3 编辑数据采集方法4 单针及序列5 样品采集6 图谱优化7 报告 13 样品前处理 一 提取1 称样 5 0g2 提取 高氯酸 超声波 水浴 离心 调pH 3 萃取 异丙醇 乙酸乙酯4 浓缩 旋转蒸发仪二 净化1 活化 10ml甲醇 3ml水 3ml磷酸二氢钠 3ml水