帕金森动物模型PPT课件.ppt

2020 4 8 1 2020 4 8 2 帕金森及动物模型简介 帕金森动物模型制备 模型效果评价 目录 2020 4 8 3 帕金森及动物模型简介 帕金森动物模型制备 模型效果评价 目录 第一部分 简介 总体概况 2020 4 8 4 帕金森简介 调研方法 第一部分 帕金森是继阿耳茨海默病 老年痴呆症 后第二大普遍的老化大脑的神经系统退行性病 1817年Jamesparkinson描述为震颤麻痹 引起该疾病运动症状主要是因为纹状体内多巴胺减少从而导致黑质密致部实质内多巴胺能神经元逐步衰退 2020 4 8 5 病理 第一部分 PD的症状是黑质密致部区域的染色多巴胺分泌细胞减少继发分泌的黑色素减少产生的结果 PS 黑质 在大脑脚底与中脑被盖之间有一大的灰质团块是黑质 见于中脑全长 黑质细胞富含黑色素 是脑内合成多巴胺的主要核团 黑质主要与端脑的新纹状体 尾状核和壳核 有往返纤维联系 由于某些原因使黑质细胞变性 多巴胺合成减少 是引起震颤麻痹 Parkinson病 的主要病因 在正常生理状态下 黑质是调节运动的重要中枢 2020 4 8 6 黑质纹状体 调研方法 第一部分 纹状体 壳核和尾状核通过大量条纹状细胞桥互相连接 所以得名纹状体 根据发生的早晚可分为新 旧纹状体 新纹状体指豆状核的壳和尾状核 旧纹状体指苍白球 纹状体属锥体外系的结构 与骨骼肌的活动有关 新纹状体 在发生学上比较年轻 包括尾状核及壳核 它们起源于端脑 在这两个神经细胞团中 含有大量的小细胞和较少的大细胞 小细胞接受来自大脑皮层各部以及来自丘脑的神经 因此 新纹状体直接受到大脑皮层的影响 而且还间接地受到通过丘脑传来的小脑以及其它锥体外系的影响 大细胞发出的传出纤维到达同侧的苍白球 目前已知 新纹状体与维持机体的固定姿势有关 大量的临床病理资料证明 尾状核头部的变性 萎缩 可出现舞蹈样动作 如慢性进行性舞蹈病 壳核的病变则与临床所见的手足徐动症 肝豆状核变性 扭转痉挛 舞蹈病等不自主运动有关 旧纹状体 系指苍白球 它起源于间脑 进化上比较古老 内含大细胞 除接受同侧新纹状体来的纤维以外 还接受来自丘脑和从大脑皮层来的纤维 由它发出的纤维主要是苍白球丘 丘脑束 一部分纤维分别向下传到丘脑底核 黑质 旧纹状体被视为锥体外系中的一个重要传出中间站 已经证明 苍白球的功能与肢体的肌张力姿势反射有关 帕金森病患者到了中晚期几乎都有苍白球的变性 2020 4 8 7 症状 调研方法 第一部分 PD可见两种症状1 非运动症状情绪障碍认识障碍睡眠障碍感觉障碍 2 运动症状震颤僵直运动过慢 运动不能姿势不稳定其他症状包括步态和姿势障碍拖着脚走慌张步态步态冻结 无法移动 语言和吞咽障碍发声过弱语言仓促流涎吞咽困难 2020 4 8 8 帕金森模型简介 调研方法 第一部分 帕金森动物模型分类 鱼藤酮优点 1 发病因素与流行病学相符2 复制了PD患者大多数LB的形成运动及病理特征缺点 1 非特异性损伤及外周器官毒性2 存活率低机制 氧化损伤方法 大鼠颅内注射12ug 只 黑质 MPTP缺点 1 制剂依赖型可逆模型2 必须依赖左旋多巴存活机制 MPTP在黒质细胞内脱氢生成MPP 离子 这种离子抑制线粒体复合酶 使该细胞死亡 6 OHDA机制 引起特异性几茶酚胺能神经元退行性变方法 1 双侧注射 优点 成功率高缺点 往往因吞咽障碍 缺乏渴感 运动不能而死亡2 单侧注射 成功率 16ug 8ug 4ug组 注射速度1ug min 留置5min诱导剂 阿扑吗啡0 2 0 5mg kg判断依据 共记录30min 若转圈数 7r min或210r 30min则合格 2020 4 8 9 第一部分 简介 模型制备 第二部分 2020 4 8 10 模型制备动物选择 第二部分 Wistar大鼠 SD大鼠 8周 鼠290g 术前准备 第二部分 1 仪器准备 大鼠脑立体定位仪 微量注射器 钻孔器 2 手术器材 15 双氧水 戊巴比妥钠 75 乙醇 碘伏手术剪刀 镊子 手术缝合线 医用棉球 抗生素 开颅前 第二部分 1 麻醉 20mg 只 290g 戊巴比妥钠麻醉 2 头部剃毛 3 固定头颅 先将一侧耳棒轻轻插入外耳道 碰到骨性外耳道底后固定耳棒 继之同样插入固定另一耳棒 检查大鼠头部固定是否稳定 松斜 两侧耳棒刻度是否对称 轻移耳棒使两侧刻度一致头位完全居中 再次固定耳棒 固定上颌 将大鼠的上门牙塞进上齿固定板的槽内 旋紧螺丝 从各方向推压动物头部 均不应出现移动 通过定位针的测量调节前后囟在同一矢状线上 并使前囟 Bregma 和后囟 Lambda 尽量处于同一水平面上 检查是否固定好的标准主要有三个 鼻对正中 头部不动 提尾不掉 头部切口 第二部分 3 头部切口用手术刀片沿颅骨正中线切开 再以15 H2O2去除结缔组织 H2O2还可以起到止血的作用 以清晰看到颅骨表面缝隙为宜 第二部分 定位图谱确定注射位点 冠状切面 第二部分 定位图谱确定注射位点 矢状切面 第二部分 定位图谱确定注射位点 水平切面 第二部分 核团定位 4 核团定位首先 在脑定位仪上读出Bregma坐标 AP ML DV 再根据文献上寻找到的目标靶核团坐标 这些坐标都是基于Bregma坐标为0 0 0 换算出此核团在颅骨表面的实际坐标 钻孔 第二部分 5 钻孔1 利用定位仪 保证前囟 Bregma X 0 Y 0 Z 0 和后囟 Lambda 处于同一水平面上 X Z值相差皆小于0 1 2 脑内核团定位 根据脑图谱 确定待注射脑区的位置参数 包含离Bregma和Lambda点的距离以及核团深度 例如 注 包新民图谱 内侧前额叶皮层 medialPrefrontalCortex mPFC 的位置是 门齿线 imcisorbar 向下2 4mm倾斜 Bregma向后3 7mm和4 4mm 中线往右1 7mm和1 2mm Bregma向下7 5mm 3 利用定位仪找到要注射6 OHDA的位置 用Marker笔或定位针在颅骨上做好标记 4 小心地用颅骨钻头 或牙科钻 在注射位点处轻磨颅骨 将颅骨慢慢打薄 当颅骨出现裂缝的时候 至硬脑膜 用医用注射器的针头小心挑破 防止损伤 如果在此过程中有出血 可以用很小的医药棉球拉成长条形将血吸走 钻孔时一定要控制好 否则很容易在钻通颅骨后一不小心钻头进入脑组织 造成严重损伤 6 OHDA注射 第二部分 6 6 OHDA注射1 用PBS冲洗微量注射器 5 l规格 3 5次 2 4ug ul6 OHDA溶解于0 2 Vc 必须当天配置 3 将微量注射泵 微量注射器组装好 置于钻好的孔上方 针尖与颅骨平行 Z 0 微调注射器位置使之与之前钻孔时位置相同 4 根据定好的深度将注射针缓慢下降以0 05 l min的速度注射6 OHDA 每点注射3ul注射完毕后 将注射针停留在注射位置5min待6 OHDA扩散 然后缓慢提针4mm 继续留针5min后缓慢退针7 用PBS清洗微量注射器5次备用 8 注意注射过程中若有出血立刻用棉签吸走 以免带出6 OHDA 缝合抗感染 第二部分 7 缝合定位注射后缝合头皮 即可完成脑立体定位注射 8 术后抗感染先锋v50mg kg肌肉注射或庆大霉素2ml 兑100ml盐水中 每只大鼠0 5m 模型制作 第二部分 模型效果评价 第三部分 建议总