广西地方标准《陆川猪及其肉制品的分子定性鉴定方法》(征求意见稿)编制说明_第1页
广西地方标准《陆川猪及其肉制品的分子定性鉴定方法》(征求意见稿)编制说明_第2页
广西地方标准《陆川猪及其肉制品的分子定性鉴定方法》(征求意见稿)编制说明_第3页
广西地方标准《陆川猪及其肉制品的分子定性鉴定方法》(征求意见稿)编制说明_第4页
广西地方标准《陆川猪及其肉制品的分子定性鉴定方法》(征求意见稿)编制说明_第5页
已阅读5页,还剩10页未读 继续免费阅读

下载本文档

版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领

文档简介

1广西地方标准陆川猪及其肉制品的分子定性鉴定方法(征求意见稿)编制说明一、工作简况一任务来源根据广西壮族自治区质量技术监督局2016年第一批广西地方标准制定(修订)项目计划的通知(桂质监函2016198号)文。二起草单位起草单位广西大学、广西分析测试研究中心、广西经贸职业技术学院、广西陆川县质量技术监督局。三主要起草人姓名性别职务/职称工作单位任务分工黄丽女副教授广西大学项目负责人黄磊男研究生广西大学鉴定方法研究,标准研制杨磊女高级工程师广西经贸职业技术学院标准研制黄岛平男高级工程师广西壮族自治区分析测试研究中心调研论证庞理松男局长陆川县质量技术监督局原料收集,调研夏宁女副教授广西大学PCR方法研究林葵女高级工程师广西壮族自治区分析测试研究中心调研论证韦保耀男教授广西大学标准研制滕建文男教授广西大学资料收集、组织协调、统稿庞丽女副局长陆川县质量技术监督局原料收集杜寒春女高级工程师广西壮族自治区分析测试研究中心调研论证二、制定标准的必要性和意义陆川猪因其原产于广西壮族自治区东南部的陆川县而得名,是中国华南地区的优良猪种,主要分布于广西玉林、梧州、钦州等地区。是“中国八大地方优良猪种”之一。陆川猪属于小型脂肪型猪种,但其皮薄肉嫩、脆而不腻、味道鲜美、营养丰富。其畜产品可加工成香肠、2无皮五花腊肉、白切猪脚、脆皮乳猪、扣肉等制品,产品价值非常高,不仅深受国内消费者的青睐,更有受到海外消费者的欢迎。然而由于纯种陆川猪本身饲料率低、饲养周期相对较长,为了满足市场需求而以纯种陆川猪为母本与国内外其他的优良猪种进行杂交,得到了高饲料率、短周期的二代陆川猪(称为二元杂猪,例如大陆二元杂)和三代陆川猪(称为三元杂猪,例如大陆长白三元杂)。二元杂猪与三元杂猪的出现弥补了纯种陆川猪的不足,丰富了消费者的选择,提高了陆川猪品牌的价值。新事物的出现也常常伴随着问题,由于陆川猪肉自身的优势,市场上陆川猪肉的价格常常是普通猪肉价格的两到三倍,这种价格的差异诱导了很多不法分子对陆川猪生鲜肉及熟肉制品掺假造假的违法现象。有些不法商贩将普通猪肉混入陆川猪肉,以次充好,更有甚者以普通猪肉的生鲜肉或者熟肉制品假冒陆川猪肉进行销售,牟取不法利润,这样的做法不仅扰乱的肉类市场,欺骗了消费者,打击了陆川猪的的整个产业链的积极性,严重影响了陆川猪品牌的长远发展。目前对陆川猪肉与普通猪肉进行鉴伪的方法较少,监管体系尚未建立起来。在目前的陆川猪研究中,国内学者主要从分子生物学角度,研究了陆川猪的遗传与繁殖、猪支原体肺炎病原分子致病机制,并开发了保健扣肉、腊肠、火腿等一系列的陆川猪肉制品。但是针对陆川猪的鉴定技术研究中,鲜有报道。仅有广西大学何若钢等对杜洛克与陆川猪杂交后代进行过肉质研究,在研究中也发现,虽然色差计、嫩度仪、酸度计、电镜等仪器在数据上能直观的反映出肉制品的品质,但肉质指标大多没有统一的数值范围,个体差异也比较明显,不能作为区别陆川猪及其他品种猪的重要依据。ISSRPCR方法采用可靠的DNA分子鉴定技术,快速、准确的鉴定了陆川猪、陆川猪杂交品种、巴马香猪、瘦肉型猪及其肉制品之间的区别,为广西陆川猪鉴别技术标准研究奠定了基础。但是,遗憾的是前期研究尚未形成能够实施的标准。而且由于陆川猪系的杂交后代品种较多、且目前NCBI文库尚未检索到陆川猪系的全基因序列,陆川猪的全基因组学研究进展缓慢,为陆川猪系(纯种、二元杂、三元杂等陆川猪)的DNA的定量鉴别技术研究带来了很大的难度。因此,针对肉类鉴伪识别技术的发展以及肉类成分鉴定标准现状,在前期陆川猪的DNA分子鉴定技术的研究基础上,拟进一步扩大陆川猪的样本、扩大样品的产地,进一步完善ISSR分子标记鉴定陆川猪系及其肉制品的方法,优化反应体系、研究扩增体系的稳定性和灵敏度。建立标准化陆川猪及其肉制品的PCR定性检测方法,为政府部门规范和监督相关食品企业生产提供法律依据,为保护消费者食品安全提供有力的保障。三、主要起草过程3(一)成立标准编制小组,确定编写方案项目立项后,广西大学立即成立标准编制小组,确定陆川猪及其肉制品的分子定性鉴定方法标准制定方案。(二)收集资料,撰写工作组讨论组通过检索、查阅相关文献资料,收集了广西地区的陆川猪和部分非陆川猪样品,参照可实现的学者研究ISSR鉴定方法,并联系厂家确定用于鉴定方法建立的部分样品。完成大量而充分的前期工作后,编制组开始着手撰写陆川猪及其肉制品的分子定性鉴定方法的工作组讨论稿。(三)调研论证,形成征求意见稿编制小组在充分讨论、研究及集体分析后,几经修改和讨论,完成了陆川猪及其熟肉制品的分子定性鉴定方法的征求意见稿。2016年3月在广西大学轻工与食品工程学院组织相关专家召开标准研讨会,确立鉴别方法使用ISSR技术;2016年7月在广西大学轻工与食品工程学院组织相关专家召开标准研讨会,进一步完善方法的评价体系。2017年10月在广西分析测试研究中心进行了试验方法的复验,认为鉴别方法整体可行、重现性好。四、制定标准的原则和依据(一)本标准按照GB/T112009给出的规则起草。(二)本标准编制遵循“科学、适度、可行”原则,标准的编写参考了GB/T211002007动物源性饲料中骆驼源性成分定性检测方法PCR方法,GB/T211012007动物源性饲料中猪源性成分定性检测方法PCR方法,GB/T211062007动物源性饲料中鹿源性成分定性检测方法PCR方法,GB/T211072007动物源性饲料中马、驴源性成分定性检测方法PCR方法等国家标准,并结合试验结果为基本依据。五、主要条款的说明(一)原理目前可行且得到实证应用的几种肉类掺假鉴定技术和特点。国内外应应用最为广泛的检测方法有近红外光谱鉴别技术、PCR鉴别技术、酶联免疫法、色谱鉴别技术等。这些技术中,虽然近红外光谱检测检测的速度比较快,但是准确度方面还有待改进。酶联免疫法ELISA已有很成功的商业化应用出现,但由于于蛋白活性的影响,其应用范围也会受限。近年来色谱分析方法有了更深入的研究,随着高分辨质谱的出现,通过多肽鉴定肉类品种将是一个新4的研究方向。以为PCR技术为主的DNA分子鉴别技术包括长度多态(PCRRFLP)、随机扩增多态性(PCRRAPD)以及实时定量荧光PCRRTPCR最为成熟,应用最为广泛。国内已将PCR检测技术作为鉴定肉类的标准方法,国家先后出台了牛、羊、猪、鹿、狗、马、驴、兔、骆驼肉的国家检测标准18;农业部也出台了牛、猪和羊肉的检测标准911。出入境出台的PCR技术检测肉类的行业标准最为全面,包括鸡、牛、水牛、山羊、绵羊、鸭、火鸡、鹅、狐狸、猪、狗、貂、鸽子、猫、马、驴、鹤鹑、鹅鸽、鳍鱼、鱿鱼、黄鱼、金枪鱼、安康鱼、石斑鱼、鳖鱼、河豚鱼等1114。所以综合来看,PCR检测技术具有简单、特异性好、灵敏度高等优点。出现ISSRPCR技术是在基因扩增的时添加提前针对保守或特异序列设计的引物,再经过脱氧核酸体外扩增以及相应检测察看样品中是否含有目标基因。这种方法由于引人为设计的特异性引物,免去了DNA扩增后的测序和多态性分析过程,使得测试更加快速,在节省时间的同时还提高准确度。(二)仪器与试剂1主要仪器与耗材普通PCR仪、电泳仪、凝胶成像设备、高速冷冻离心机、冷藏冷冻冰箱、漩涡振荡器、微量移液器(10L、100L、1000L)、02ML普通PCR管、一次性PE手套、15ML离心管。2主要试剂21除另有规定外,所有试剂均为分析纯或者生化试剂。22实验用水应符合GB/T6682中一级水的规格。23DNA提取试剂盒(GENOMICDNAISOLATIONKITINSTRUCTIONMANUAL)。2410XTAE缓冲液。252XESTAQMASTERMIX(含溴酚蓝染料)。26MARKER为100BPPLUSDNALADDER。3特异性引物。根据陆川猪线粒体细胞TYRP1基因的核苷酸序列设计引物,选用两个特异性较强、重现性好、带有重复碱基且上下游序列相同的陆川猪引物17。上海生工生物工程公司负责合成引物。合成后的引物是白色干粉的形式,使用前先对其进行预处理,使用小型离心机对引物进行2S左右离心,后加入说明书上各引物的稀释所需体积的TE溶液,使引物浓度达到100M,完成后将引物放入20冰箱中保存备用。特异性引物序列如表1。表1特异性引物信息5检测基因引物序列上游5CACCACCACGC3WM12下游5CACCACCACGC3上游5'CTCCTCCTCGC3'WM14下游5'CTCCTCCTCGC3'(三)肉制品制作方法将生鲜猪肉清洗、切分后,在100的水中煮约15MIN,直至肉色发生改变且内外表面无血水,取出冷却至室温即成熟肉样品。将生鲜猪肉样品经过清洗、切块后,在水温为90的水中预煮约30MIN,直至无血水,然后捞出冷却后,放入油温为180左右的油中炸1015MIN,捞出冷却、切片并调味,即成为实验所需的扣肉样品15。将生鲜猪肉样品切块、修整,把25的食盐,适量料酒、香辛料等充分混合后均匀地涂抹在肉品表面,并适当揉搓后放入4冰箱中腌制1D,待配料全部渗入肉内后取出,放入烘箱中,先用40的温度烘烤2H,然后把温度调至55烘烤约36H,待把腊肉烘干后取出即可成为实验所需的扣肉样品16。(四)鉴定步骤1样品DNA提取按照通用型基因组DNA提取试剂盒(GENOMICDNAISOLATIONKITINSTRUCTIONMANUAL)中动物组织基因组DNA提取操作进行提取1819。1将待测的原料猪肉,去除肥肉后,用灭菌刀切分。提取时切取05G肉样,剪碎后用干净镊子或药匙转移至干净的离心管中;2向离心管中加入400LBUFFERL1和20LFOREGENEPROTEASE,涡旋混匀,放置于65金属浴或水浴中2530MIN,其间每间隔10MIN涡旋混匀一次,促进酶解;3酶解完成后,加入400LBUFFERL2,颠倒混匀至分层消失,置于65金属浴或水浴中10MIN,然后12000RPM室温离心510MIN,收集上清液;4将上清液用移液器转移到离心柱中,再将离心柱放入收集管中,然后12000RPM室温离心1MIN,弃掉收集管中的废液;5向离心柱中加入500LBUFFERPW,12000RPM室温离心1MIN,弃掉收集管中的废液;6再向离心柱中加入700LBUFFERWB,12000RPM离心1MIN,弃掉收集管中的废液;将离心柱放回收集管中,12000RPM空管离心2MIN,弃掉离心柱中残余的BUFFERWB;7将离心柱移至新的15ML离心管中,向膜中央悬空滴加100L已于65预热的BUFFEREB,室温放置5MIN,12,000RPM离心1MIN,收集洗脱液;68再次向膜中央悬空滴加100L已预热的BUFFEREB,12,000RPM离心1MIN,收集洗脱液;将两次收集的洗脱液合并,即得样品DNA。DNA提取后置于20保存。2DNA纯度的测定检测提取DNA的纯度。取5LDNA溶液加灭菌水稀释至1ML,用核酸蛋白分析仪或紫外分光光度计分别检测260NM和280NM处的吸光值。DNA纯度为OD260/OD28020。DNA样品的纯度检测结果见表2。表2DNA纯度检测结果样品名OD260NMOD280NMOD260NM/OD280NM纯种陆川猪生鲜肉038102051854纯种陆川猪熟肉纯种陆川猪扣肉纯种陆川猪腊肉036403880376020702110204185318391843二元猪生鲜肉033001841739二元猪熟肉二元猪扣肉二元猪腊肉035903270334018901760185179318581805三元猪生鲜肉036602011899三元猪熟肉三元猪扣肉三元猪腊肉036203780365020302150183178317581995地方土猪生鲜肉045402661707地方土猪熟肉地方土猪扣肉地方土猪腊肉047704850433023502470216203019642004地方黑猪生鲜肉034702011726地方黑猪熟肉地方黑猪扣肉地方黑猪腊肉地方黑猪猪毛地方黑猪猪血033903830376037503980197019902000216021417211924188017361860白条猪生鲜肉029001501733白条猪熟肉白条猪扣肉白条猪腊肉032002940276018001580143177818611931结果表明,PCR扩增的要求是提取DNA的OD260/OD280要达到17至20之间,而DNA试剂盒提取法又高效又能提取达到PCR扩增要求,所以采用DNA试剂盒提取样品DNA。采7用商业的化DNA试剂盒提取,效率高,质量好,且几乎对人体以及环境不存在污染。3PCR反应体系PCR扩增体系的反应液共250L,反应所需的2ESTAQPCRMASTERMIX包含了TAQDNA聚合酶、DNTPS、MGCL2、反应缓冲液、PCR反应的增强剂、优化剂、稳定剂以及溴酚蓝染料等,浓度为2,体系如表321。配置体系时在每个PCR管内按照表3从左至右的顺序依次加入试剂和模板,注意在加样时应使样品DNA模板溶液完全落入反应液中,不应粘附于管壁上,如若管壁上存在粘附残留,必须先进行离心使其全部落入管底,再将PCR管放入PCR仪内准备扩增。表3PCR反应体系上游引物下游引物2ESPCRMASTERMIX模板DNADDH2O05L05L125L10L补足至250L4PCR反应程序在PCR仪表设置界面按照表4设定扩增程序进行35个循环扩增22。表4PCR反应程序预变性变性退火延伸总延伸降温959536727245MIN30S30S2MIN5MIN5MIN5实验对照阴性对照选取与陆川猪不同的猪种,考虑到市场存在以廉价猪肉代替陆川猪肉的现象,将地方土猪或地方黑猪或白条猪或其他非陆川猪按试剂盒提取提取DNA,按表3配置PCR反应体系,按表4程序进行PCR扩增;空白对照选取灭菌水代替DNA模板,按表3配置PCR反应体系,按表4程序进行PCR扩增23。6PCR反应运行设定好PCR仪的扩增程序后,检查PCR反应管是否摆放正确(检查各放反应管是否盖紧,以免反应液泄漏污染仪器),盖紧PCR仪器盖,开始运行仪器进行PCR反应。7琼脂糖电泳检测扩增完成后,尽快进行电泳检测,使用微量移液器取5L扩增产物,加入到浓度为10的琼脂糖凝胶(将凝胶托架两端用胶带封闭并水平放置在工作台上,放上梳子,使梳齿下沿距托架板05MM至10MM;配制足够量的凝胶称取10G琼脂糖于三角瓶中,加入8100ML1倍TAE电泳缓冲液,加热溶解琼脂糖;待琼脂糖溶液冷至50时,将胶液沿托架胶板边缓慢连续注入,让胶液自由流向各方,凝胶厚度控制在3MM至5MM之间。待凝胶完全凝固后,撤去两端胶带;将托架放入电泳槽中,加入1倍TAE电泳缓冲液,使之浸过胶面2MM,拔出梳子,以备加样电泳。)的上样孔中,同时加入2L的MARKER,用1TAE作为缓冲液,合闭电泳槽的盖子,开启电源开关,按5V/CM设定电压,电泳30MIN24。8紫外成像拍照电泳结束后,小心地将凝胶从电泳槽中取出,放入盛有适当浓度溴化乙锭的避光容器里染色15MIN左右,染色完成后将凝胶转移到凝胶成像设备中观察拍照25。获得相应的电泳图进行结果判定。拍照获得相应的电泳图进行结果判定。若不能及时观察,应将凝胶放入1TAE缓冲液中暂时保存,但不宜超过4小时。(五)结果判定与表述1质量控制空白对照,在琼脂糖电泳检测中无条带,无菌水中不含DNA,阴性对照在琼脂糖电泳检测中无条带,提取的地方土猪或地方黑猪或白条猪或其他非陆川猪的DNA中不含与WM12和WM14结合的特异性位点。依据BJS201707植物蛋白饮料中植物源性成分鉴定。2结果判定将电泳后的琼脂糖凝胶置于凝胶成像系统内观察,与标准DNA分子量比较,观察测试样品琼脂糖电泳检测图,如测试样品目标基因琼脂糖电泳检测有1200BP和900BP对应条带,则判定为被检样品阳性,表明样品中含有纯种陆川猪的特异基因;如测试样品目标基因琼脂糖电泳检测无1200BP和900BP对应条带,则判定为被检样品阴性,表明样品中不含有陆川猪的特异基因;如测试样品目标基因琼脂糖电泳检测只有900BP对应条带,则重复试验一次。如再次扩增后电泳检测仍只有900BP对应条带,且阴性对照和空白对照结果达到指控要求,则判定被检样品含有陆川猪源性成分,表明样品中含有陆川猪(包括纯种与杂元猪)的特异基因。3结果表述结果为阳性者,表述为“被检样品为纯种陆川猪”。结果为阴性者,表述为“被检样品为非陆川猪”。结果为含有陆川猪源性成分者,表述为“被检样品为杂元陆川猪”。依据BJS201707植物蛋白饮料中植物源性成分鉴定。(六)实验室防污染措施9按照GB/T2740的规定执行。六、验证试验(一)特异性评价DNA提取试剂盒,按照同样的方法,提取陆川猪、大陆二元杂猪、大陆长白三元杂猪和地方土猪、地方黑猪、白条猪的(生鲜肉、熟肉、扣肉、腊肉)DNA,用设计的引物WM12和WM14对不同来源猪肉样品进行检测,在反应体系和扩增参数等相同的条件下进行PCR及凝胶电泳检测,以评价该引物的特异性26。特异性结果如图1至图4。图1生鲜肉和熟肉特异性电泳图(WM12)图2生鲜肉和熟肉特异性电泳图(WM14)注PCR扩增时的退火温度为36,其中MARKER为100BPPLUSDNALADDER,加入量为2UL。1至13号泳道分别为陆川猪、陆川猪熟肉、二元猪、二元猪熟肉、三元猪、三元杂猪熟肉、白条猪、白条猪熟肉、地方土猪、地方土猪熟肉、地方黑猪、地方黑猪熟肉、空白对照。样品加入量均为5UL。10图3熟肉制品特异性电泳图(WM12)图4熟肉制品特异性电泳图(WM14)注PCR扩增时的退火温度为36,其中MARKER为100BPPLUSDNALADDER,加入量为2UL。1至13号泳道分别为陆川猪、陆川猪熟肉、二元猪、二元猪熟肉、三元猪、三元杂猪熟肉、白条猪、白条猪熟肉、地方土猪、地方土猪熟肉、地方黑猪、地方黑猪熟肉、空白对照。样品加入量均为5UL。如图1至图4所示,纯种陆川猪及其肉制品在引物WM12的条件下扩增,可在DNA分子量1200BP处扩增出条带,而非纯种陆川猪则不扩增出此条带,引物WM12可用于鉴别区分纯种陆川猪与非纯种陆川猪(二元猪、三元猪);陆川猪及熟肉制品在引物WM14的条件下扩增,可在DNA分子量900BP处扩增出条带,而地方黑猪、地方土猪、白条猪则不扩增出此条带,引物WM14可用于鉴别区分陆川猪(纯种陆川猪、二元猪、三元猪)与其他品种猪(地方黑猪、地方土猪、白条猪)。引物WM12和WM14的特异性较强。(二)重现性评价对用DNA试剂盒提取的纯种陆川猪、二元猪、三元猪、地方土猪、地方黑猪、白条猪(生鲜肉、熟肉、扣肉、腊肉)DNA分别作五次PCR及电泳的检测,进而评价该引物的重现性27。重现性结果如表5所示。表5重现性检测结果样品试验次数WM121200BP12345WM14900BP12345陆川猪生鲜肉陆川猪熟肉11陆川猪扣肉陆川住腊肉二元猪生鲜肉二元猪熟肉二元猪扣肉二元猪腊肉三元猪生鲜肉三元猪熟肉三元猪扣肉三元猪腊肉地方土猪生鲜肉地方土猪熟肉地方土猪扣肉地方土猪腊肉地方黑猪生鲜肉地方黑猪熟肉地方黑猪扣肉地方黑猪腊肉白条猪生鲜肉白条猪熟肉白条猪扣肉白条腊猪注意表示样品DNA检测有条带;表示样品DNA检测无条带。重现性检测结果如表5所示,每一种样品均做五次重现性试验,结果表明纯种陆川猪生鲜肉及熟肉制品在引物WM12的条件下扩增,可稳定地在DNA分子量1200BP处扩增出条带,而非纯种陆川猪(二元猪、三元猪)以及其他品种猪(地方黑猪、地方土猪、白条猪)的生鲜肉以及熟肉制品则未扩增出此条带,此外猪血和猪毛的检测结果也同猪肉检测结果一致。WM12的检测重复率达100,可作为鉴别纯种陆川猪与杂元陆川猪的合适引物。而纯种陆川猪,杂元陆川猪及其熟肉在引物WM14的条件下扩增,可在DNA分子量900BP处扩增出条带,而地方黑猪,地方土猪,白条猪则没有扩增出900BP条带。同样的结果也在猪血和猪毛样品上得以重复,重复率达100,可作为鉴别陆川猪与非陆川猪的合适引物。每一种样品的五次扩增结果均一致,证明引物WM12和WM14的重现性较好。(三)实用性评价从市场上购买“陆川猪”生鲜肉及肉制品(龙骨肉、五花肉、瘦肉、腊肉、扣肉、香肠等)并进行处理,用试剂盒提取的相应的生鲜肉、熟肉制品DNA,用引物WM12、WM14分别进行PCR及电泳检测,检测市场上售卖陆川猪的真伪,同时测试引物的实用性28。检测结果如表6所示。12表6市售陆川猪检测结果样品WM121200BPWM14900BP检测与宣传是否符合五花肉(第一批)否龙骨肉(第一批)否瘦肉(第一批)腊肉(第一批)扣肉(第一批)香肠(第一批)否否否是五花肉(第二批)否龙骨肉(第二批)瘦肉(第二批)腊肉(第二批)扣肉(第二批)香肠(第二批)五花肉(第三批)龙骨肉(第三批)瘦肉(第三批)腊肉(第三批)扣肉(第三批)香肠(第三批)否否否否是否否否否否是注意表示样品DNA检测有条带;表示样品DNA检测无条带。表6结果表明,检测的3个批次共18种市场上宣传的陆川猪肉(龙骨肉,五花肉,瘦肉)及熟肉制品(腊肉、扣肉、香肠),唯有陆川猪香肠在引物WM12的条件下扩增出1200BP条带,在引物WM14的条件下扩增出900BP条带,其他样品全部未扩增出1200BP条带,但均扩增出900BP条带。推断市售五花肉、龙骨肉、瘦肉、扣肉和腊肉的DNA中含有WM14所对应的结合位点,因此在PCR时可以与引物结合扩增900BP条带,而样品中不含有WM12所标记纯种陆川猪所对应的位点,因此不会扩增出对应的1200BP条带122。但香肠制品含有WM12和WM14的结合位点,所以900BP和1200BP条带均有出现。结果判定三个批次的3种市售香肠确实与宣传一致为纯种陆川猪;其他15种市售肉及熟肉制品不能判定为纯种陆川猪,但可以判定为杂元陆川猪。使用引物WM12与WM14检测市售猪肉与宣传一致为纯种陆川猪的达标率仅为167,为杂元(二、三元猪)的达标率为100。所以市场上大部分的陆川猪并非纯种陆川猪,而为杂元陆川猪。13七、参考文献1GB/T211002007动物源性饲料中骆驼源性成分定性检测方法PCR方法SGB/T'2110020072GB/T211012007动物源性饲料中猪源性成分定性检测方法PCR方法SGB/T2110120073GB/T211022007动物源性饲料中兔源性成分定性检测方法实时荧光PCR方法SGB/T211022007IDENTIFICATIONOFRABBITDERIVEDMATERIALSINANIMALORIGINATEDFEEDSTUFFS一REALTIMEPCRMETHODS4GB/T211032007动物源性饲料中哺乳动物源性成分定性检测方法实时荧光PCR方法SGB/T211032007IDENTIFICATIONOFMAMMALDERIVEDMATERIALSINANIMALORIGINATEDFEEDSTUFFS一REALTIMEPCRMETHODS5GB/T211042007动物源性饲料中反当动物源性成分牛,羊,鹿定性检测方法PCR方法SGB/T211042007IDENTIFICATIONOFRUMINANTDERIVEDMATERIALSINANIMALORIGINATEDFEEDSTUFFS一PCRMETHODS6GB/T211052007动物源性饲料中狗源性成分定性检测方法PCR方法SGB/T211052007IDENTIFICATIONOFDOGDERIVEDMATERIALSINANIMAL一ORIGINATEDFEEDSTUFFS一PCRMETHODS7GBLT211062007动物源性饲料中鹿源性成分定性检测方法PCR方法SGB/T211062007IDENTIFICATIONOFCERVUSDERIVEDMATERIALSINANIMALORIGINATEDFEEDSTUFFS一PCRMETHODS8GB/T211072007动物源性饲料中马、驴源性成分定性检测方法PCR方法SGB/T2110720079农业部2122号公告一12014转基因动物及其产品成分检测猪内标准基因定性PCR方法S10农业部2122号公告一22014转基因动物及其产品成分检测羊内标准基因定性PCR方法S11农业部2031号公告一142013转基因动物及其产品成分检测普通牛内标准基因定性PCR方法S12SN/T37302013食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法实时荧光PCR法SSN/T3730201313SN/T37312013食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法实时荧光PCR法SJSN/T373120131414SN/T35892013出口食品中常见鱼类及其制品的鉴伪方法实时荧光PCR法SSN/T3589201315王海军,王勤志,滕建文常压蒸煮工艺对包装扣肉品质的影响J食品科技,2011,36913914316张厚军,崔建云,任发政,等腊肉分段烘烤工艺的试验研究J肉类研究,2005,10293117何瑜林,黄丽,封毅,等ISSR分子标记鉴定陆川猪及其肉制品J肉类研究,201410101418高丹丹,陈燕,王迎华,等动物肉制品基因DNA的提取和纯化J食品科技,2007,8424419周正,吕二盼,周巍,等动物源性食品鸭血,猪血DNA提取方法研究及双重PCR检测J食品工业,20121116116620张文兰,李群,段乃彬,等玉米种子DNA快速提取及纯度鉴定新方法J种子科技,2006,241373821CHANGCHAING,CHENCHINCHANG,ICHIEHWU,SABIRKOTWALYUANTAYSHYU,RAPIDMOLECULARIDENTIFICATIONOFFRESHL

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

评论

0/150

提交评论