改良硫黄素S染色-老人斑.doc

改良硫黄素S老年斑(淀粉质)染色目的：用于鉴别Alzheimers 病脑组织切片中的神经纤维、扣结和老年斑。PRINCIPLE: 切厚度为30m 石蜡切片或冰冻切片，不用贴片而使用漂染法。玻片染色用于荧光检查领域。老年斑显示为成群异常肿胀的神经元突起或神经突，因而被称为“神经炎”。老人斑的可能由中心淀粉体和周围放射状肿胀神经突构成。对照：含有老人斑的脑组织固定液：10%甲醛技术：切片30m，不要贴片。设备：有盖培养皿或小烧杯，弯头玻棒。试剂：0.25%高猛酸钾：高猛酸钾Potassium permanganate 0.25 gm蒸馏水Distilled water 100.0 ml新鲜配制，用后丢弃。警告：腐蚀性。漂白液：亚硫酸钾Potassium metabisulfite 1.0 gm草酸Oxalic acid 1.0 gm蒸馏水Distilled water 100.0 ml 新鲜配制，用后丢弃。警告：腐蚀性。封闭液Blocking Solution:氢氧化钠Sodium hydroxide 1.0 gm过氧化氢30% hydrogen peroxide 3.0 ml蒸馏水Distilled water 100.0 ml新鲜配制，用后丢弃。警告：腐蚀性。0.25% 醋酸洗液Acetic Acid Rinse:醋酸Acetic acid 0.25 ml蒸馏水Distilled water 100.0 ml新鲜配制，用后丢弃。警告：腐蚀性。硫黄素S染色液：硫黄素SThioflavine S 0.0125 gm50%酒精 ethanol 100.0 ml新鲜配制，用后丢弃。警告：毒性，易燃性。50% 酒精Ethanol:无水乙醇Absolute ethanol 50.0 ml蒸馏水Distilled water 50.0 ml警告：易燃性。甘油凝胶：详见备用液。安全：穿戴手套、护目镜和白大衣。避免接触和吸入。高猛酸钾：对眼睛和皮肤有刺激性，摄入可能引起严重胃肠道不适。强氧化剂。草酸：可能引起眼睛、皮肤或口腔粘膜严重灼伤。侵入途径：吸入、摄入。影响靶器官为泌尿和心血管系统，反复接触能引起皮炎。腐蚀性。过氧化氢：对皮肤有刺激性。.氢氧化钠：对眼睛和皮肤有强烈刺激性和腐蚀性。能引起灼烧。程序：1. 石蜡切片，通过二甲苯和酒精脱蜡至水。2. 切片放入0.25%高猛酸溶液中漂染20 minutes。3. 蒸馏水稍洗。4. 切片放入漂白液中漂洗 2 minutes。5. 蒸馏水稍洗。6. 切片放入封闭液中漂染 20 minutes。7. 蒸馏水稍洗。8. 切片放入0.25%醋酸液中漂洗 5 seconds.9. 蒸馏水稍洗。10. 将切片裱于载玻片上凉干、玻片保持平放。11. 玻片用蒸馏水稍洗。12. 滴上硫黄素S染液染 3-5 minutes.13. 50%酒精冲洗2次。14. 蒸馏水冲洗2次。15. 甘油凝胶封裱。结果：老人斑和神经纤维扣结荧光背景黑色参考文献：R.Guntern, C.Bouras, P.R.Hof And P.G.Vallett, An Improved Thioflavine S Method For Staining Neurofibrillary Tangles And Senile Plaques In Alzheimers Disease, 1992Powers, J.M., Making the Diagnosis of Alzheimers Disease, ASCP/CAP 1992 Fall Meeting, Oct. 10-16, 1992程序卡：改良硫黄素S老年斑(淀粉质)染色对照：含有老人斑的脑组织固定液：10%甲醛技术：切片30m，不要贴片。程序：1. 石蜡切片，通过二甲苯和酒精脱蜡至水。2. 切片放入0.25%高猛酸溶液中漂染20 minutes。3. 蒸馏水稍洗。4. 切片放入漂白液中漂洗 2 minutes。5. 蒸馏水稍洗。6. 切片放入封闭液中漂染 20 minutes。7. 蒸馏水稍洗。8. 切片放入0.25%醋酸液中漂洗 5 seconds.9. 蒸馏水稍洗。10. 将切片裱于载玻片上凉干、玻片保持平放。11. 玻片用蒸馏水稍洗。12. 滴上硫黄素S染液染 3-5 minutes.13. 50%酒精冲洗2次。14. 蒸馏水冲洗2次。15. 甘油凝胶封裱。结果：老人斑和神经纤维扣结荧光，背景黑色0.25%高猛酸钾：高猛酸钾Potassium permanganate 0.25 gm蒸馏水Distilled water 100.0 ml新鲜配制，用后丢弃。警告：腐蚀性。漂白液：亚硫酸钾Potassium metabisulfite 1.0 gm草酸Oxalic acid 1.0 gm蒸馏水Distilled water 100.0 ml 新鲜配制，用后丢弃。警告：腐蚀性。封闭液Blocking Solution:氢氧化钠Sodium hydroxide 1.0 gm过氧化氢30% hydrogen peroxide 3.0 ml蒸馏水Distilled water 100.0 ml新鲜配制，用后丢弃。警告：腐蚀性。0.25% 醋酸洗液Acetic Acid Rinse:醋酸Acetic acid 0.25 ml蒸馏水Distilled water 100.0 ml新鲜配制，用后丢弃。警告：腐蚀性。硫黄素S染色液：硫黄素SThioflavine S 0.0125