微生物限度方法学验证方案(沙门菌)剖析.doc

微生物限度检测方法学验证方案文件编号：YZ-WJ-001-0批准签字页方案起草岗位/职位姓名签字日期微生物岗/QC人员方案审核岗位/职位姓名签字日期微生物岗/组长生产部/部长质量部/QA监督员方案批准岗位/职位姓名签字日期主管质量受权人目录1.目的42.责任者及职责43.验证简介44 验证过程55 结果判断56 结论和建议57 再验证58附件5附件1：培养基的灵敏度复核6附件2：稀释液的无菌性检查7附件3：方法验证8附件4：培养基厂家报告91.目的按照中国药典2015版（第四部）规定，确认所采用的方法适合该药品的沙门菌的测定。照此检测法和检验条件进行沙门菌检查，能保证结果的准确、可靠。2.责任者及职责部门职责质量部QC起草并审核验证方案进行验证试验的具体操作完成验证记录中相关操作记录的填写根据验证结果起草和审核验证报告主管负责审核并批准验证方案和验证报告质量部QA审核并批准验证方案和验证报告监督验证方案的实施3.验证简介 验证时，按供试液的制备控制菌检查法所规定的方法及要求进行，验证实验至少进行3次独立平行实验。3.1验证用菌株名称及代号编号批号有效期至来源乙型副伤寒沙门菌3.2样品名称及数量样品编号样品名称取样量/批批号 三七粉成品10g三七粉成品10g三七粉成品10g饮用水100ml纯化水100ml3.3实验用品名 称型 号设备编号厂 家生化培养箱生化培养箱洁净工作台3.4培养基名 称编 号批 号有效期至来 源胰酪大豆胨液体培养基木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基三糖铁琼脂培养基检查人： 复核人： 检查日期： 4 验证过程4.1试验器具准备试验前，将先前已准备的适量稀释液和培养基灵敏度复核检查合格的培养基、检品和所用仪器一同放入无菌室的传递厨内。用消毒剂对无菌室进行消毒，并擦拭超净台，打开超净工作台风机及紫外灯灭菌1小时以上。4.2测定4.2.1 按照无菌室更衣程序更衣，进入无菌室。4.2.2 用70%酒精棉球擦拭工作台面与待测品表面。4.2.3菌液制备：沙门菌菌数控制在10100cfu/ml4.2.4取胰酪大豆胨液体培养基两份，分别加入 10ml供试液及1ml10100cfu/ml沙门菌菌悬液，混匀，3035培养1824小时。取上述各培养物0.2ml，接种至木糖赖氨酸脱氧胆算盐琼脂培养基平板上。沙门菌在木糖赖氨酸脱氧胆算盐琼脂培养基平板上生长良好，菌落为淡红色或无色透明或半透明，中心有或无黑色。未接种的木糖赖氨酸脱氧胆算盐琼脂培养基平板作为空白对照。用接种针挑选疑似菌落于三铁琼脂培养基高层斜面上进行斜面和高层穿刺接种，培养1824小时，或采用其他适宜方法进一步鉴定。5结果判定 若木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基平板上有疑似菌落生长，且三糖铁琼脂培养基的斜面为红色、底层为黄色，或斜面为黄色、底层为黄色或黑色，应进一步进行适宜鉴定试验，确证是否为沙门菌。如果平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，或三糖铁琼脂培养基的斜面未见红色、底层未见黄色；或斜面黄色，底层未见黄色或黑色，判定供试品未检出沙门菌。6 结论和建议此项中将根据实际测试的结果给出运行确认的结论，有异议的将给出建议。7 再验证如该验证的试验方法或试验相关试剂发生改变，需再验证。8附件8.1附件1 培养基灵敏度检查记录8.2附件2 稀释液无菌检查记录8.3附件3 微生物方法学验证记录8.4附件4 培养基厂家报告附件1：培养基的灵敏度复核 培养基类型： 鉴别培养基 名称批号名称批号1菌悬液制备菌种名称菌种编号菌种批号培养温度生长状况培养时间培养箱编号乙型副伤寒沙门菌良好 不良2观察记录培养温度培养箱编号培养时间对照培养基厂家配制批号加入菌株培养基简称：待测培养基；：对照培养基加入菌悬液名称 培养基名称培养基样品培养基阴性对照乙型副伤寒沙门菌木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基阳性阴性阳性阴性三糖铁琼脂培养基阳性阴性阳性阴性3评定标准：结 论符合规定 不符合规定复核人： 操作人：附件2：稀释液的无菌性检查名称胰酪大豆液体培养基规 格批号检验依据实验条件培养基名称木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（培养基）三糖铁琼脂培养基（培养基）配制批号培养温度30353035实验观察结果观察天数培养基样品培养基样品培养基阴性对照管培养基阴性对照管阴性阳性阴性阳性阴性阳性阴性阳性第1天第2天评定标准结 论 符合规定 不符合规定 复 核 人： 检 验 人：附件3：方法验证 样品名称： 培养基：试验菌名称： 菌种批号：3批样品按顺序进行3次试验实验观察结果样品批号木