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药物分析复习资料绪 论一、知道药品的定义。二、我国现行药品质量标准1. 中华人民共和国药典，简称中国药典 ；2. 中华人民共和国卫生部药品标准，简称部颁标准三、中国药典（缩写Ch.P），美国药典（缩写USP），英国药典（缩写BP），日本药局方（缩写JP） 记住个药典的缩写四、目前公认的全面控制药品质量的法规有药品(物)非临床研究质量管理规范GLP 药品(物)临床试验质量管理规范GCP 药品生产质量管理规范GMP 药品质量管理规范GSP 绪论就经常靠这些啦，大多是填空题特别是二、四点。第一章掌握中国药典的基本结构以及凡例、正文、附录的主要内容（主要是凡例）。一、中国药典一共出版了八版，2005年版本的可分为三部即第一部（中药）、第二部（西药）、第三部（生物药）；同时也可以分为四个部分即凡例、正文、附录、索引。二、1凡例：把一些与标准有关的、共性的、需要明确的问题，以及采用的计量单位、符号与专门术语等，用条文加以规定，以避免在全书中重复说明。 2、水浴温度：98100，室温：1030，冰浴0，放冷：是指放冷至室温。3、“精密称定”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一；“称定”系指称取重量应准确至所取重量的百分之一；取用量为“约”若干时，系指取用量不得超过规定量的10%。 4、药物分析主要采用化学、物理化学或生物化学等的方法和技术，研究。 5、判断或评价一个药物质量是否符合要求，必须全面考虑鉴别、检查、含量测定三者的检验结果。 6、标准品、对照品系指用于鉴别、检查、含量测定的标准物质。标准品系指用于生物鉴定、抗生素或生物药品中。 7、恒中系指。0.3mg一下。 8、书本第十页精确度哪里称取“0.1g,”系指称取重量可为0.060.14g；基本原理是四舍六入五成双 9、药品检查工作的一般程序取样，检验（鉴别，检查，含量测定），记录，检查报告第二章 药物的鉴别试验IR方法是很好的专属鉴别依据。 PS：其他重要鉴别的将会在各章中讲到。第三章 药物的杂质检查重点在于杂质限量计算以及药物中氯化物、重金属、砷盐等一般杂质检查的原理、试验条件和操作方法。一、杂质的分类：按来源分：一般杂质和特殊杂质；构分：无机杂质和有机杂质；按性质分:信号杂质和有害杂质。二、杂质的来源：1. 生产过程中引；2. 贮存期间引入。三、杂质的限量检查：1杂质限量药物中所含杂质的最大允许量. 2杂质限量计算杂质限量% = 供试品量杂质最大允许量100% L（%）=100%SCV SVL（ppm）= 106C注意: 单位是否统一 供试品是否有稀释 表示方法%或ppm四、氯化物检查法：1、原理 标准对照法 用水稀释至50mL2、操作1.0mL3、结果观察方法：暗处放置5 min (避免光线使 AgCl分解) 黑色的背景上，自上而下的观察4、注意事项及讨论1）加稀硝酸的目的a: 加速AgCl生成并产生较好的乳浊b: 避免弱酸银盐如Ag2CO3、Ag3PO4、Ag2O 的形成而干扰检查。2）试剂：硝酸银。3）稀释到40mL后加AgNO3试液的目的：使生成均匀的白色浑浊而非白色沉淀。4）避光、暗处放置5分钟后比浊的原因：氯化银见光易分解。5）平行操作原则 5、干扰及排除：1. 若供试品有色，需经处理后方可检查。1）内消色法：倍量法，如枸橼酸铁铵中氯化物的检查。2）外消色法：如高锰酸钾中氯化物的检查，可先加乙醇适量，使其还原褪色后再依法检查。2.供试品溶液显碱性的处理方法：先中和为中性后再检查，避免硝酸银在碱性条件下生成氢氧化银和氧化银。五、硫酸盐检查法（不太重要） 硫酸盐检查时，所用的标准对照液是K2SO4六、铁盐检查法 检查Fe2+和Fe3+（一）硫氰酸盐法ChP、USP1、原理 对照法2、操作（略）3、观察方法：同置于白色背景上，自上向下观察4、讨论：1）用FeNH4(SO4)212H2O（硫酸铁铵）配制标准铁贮备液（加入硫酸防止Fe3+的水解）2）加盐酸的目的：防止Fe3+水解。3）加入过硫酸铵的目的a. 氧化剂：Fe2+ O Fe3+ b. 防止由于光线使硫氰酸铁还原或分解褪色。4）加入过量硫氰酸铵的目的a.增加生成配离子的稳定性,提高反应灵敏度。b.消除氯化物等与铁盐生成配位化合物所引起的干扰。（二）巯基醋酸法 BP 本法灵敏度较高，但试剂较贵 七、重金属检查法 重金属指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用呈色的金属。 如：Ag、Pb、Hg、Cu、Cd、Bi、 Sb、Sn、As、Ni、Co、Zn等. （一）第一法 硫代乙酰胺法 适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物。 1. 原理 对照法 2、讨论1）用硝酸铅配制标准铅贮备液（加硝酸防止Pb2+水解）。2）本法用2ml pH3.5的醋酸盐缓冲液控制溶液pH值为33.5。最佳PH3.5 3、干扰及排除（1）供试品如有色，需经处理后方可检查。a. 外消色法：在对照管中加稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液。b. 内消色法。c. 改用第四法，微孔滤膜过滤法（2）若供试品中有微量Fe3+存在，会氧化硫化氢生成单质硫，干扰比色，加入抗坏血酸或盐酸羟胺还原Fe3+为Fe2+，可消除干扰(如葡萄糖酸亚铁中重金属的检查.)（二）灼烧后检查 500600炽灼后的残渣，经处理后，依一法检查。含钠盐或氟的有机药物在炽灼时改用铂坩埚、石英坩埚或硬质玻璃 (玛瑙)蒸发皿。（三）硫化钠法 适用于溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物。如磺胺类、巴比妥类。1、测定条件1）NaOH碱性条件下 2）显色剂：硫化钠 （四）微孔滤膜法 本法适用于重金属限量低的药物(2-5mg).八、砷盐检查检查法(一) 古蔡氏法（Gutzeit）本法适用于不含Sb或含Sb量小于100mg的供试品。1. 原理 对照法 遇HgBr2试纸生成黄色棕色的砷斑，与2ml标准砷溶液在相同条件下生成的砷斑比较2、讨论1）KI的作用还原剂As5+As3+ 2）酸性SnCl2的作用 (3方面) 还原剂. As5+As3+ . 将KI被氧化生成的I2再还原为I- 消除锑化氢干扰, SnCl2与KI可抑制锑化氢的生成 SnCl2与Zn粒表面形成Zn-Sn齐 起去极化作用,使氢气均匀而连续地发生 3）PbAc2棉花的作用 排除硫化物的干扰(生成硫化铅) 使砷化氢以适宜的速度通过。 5）反应的最佳条件 Zn粒约2g（不是Zn粉） 标准砷溶液 2 ml (1 m g /ml) 临用新配3、干扰的排除 1） 供试品是硫化物,亚硫酸盐,硫代硫酸盐。排除方法：加入浓硝酸处理2） 供试品是铁盐(Fe3+)排除方法：先加酸性SnCl2试液使Fe3+ Fe2+3） 具有环状结构的有机药物。排除方法：进行有机破坏（二）Ag-DDC法 本法适用于含Sb量小于500mg的供试品。生成红色胶态银(三) 白田道夫法 对含锑药物中砷盐的检查不能用古蔡氏法,需用白田道夫法.（注意：要看清到底是问含锑药物中检查砷盐还是含砷盐药物中检查锑，还是直接问检查锑。锑是重金属，检查方法按七）(四)奇列氏法（次磷酸法BP）不受S2-,SO32-,Sb干扰,适用于硫化物、亚硫酸盐以及含锑药物。含锑药物中砷盐的检查方法有白田道夫法和次磷酸法。溶液颜色检查法 溶液颜色检查法 易碳化物检查法等廖老师说过不考炽灼残渣检查法中若残渣需留作重金属检查，则500600炽灼至恒重。（正常是700800 ）九、特殊杂质检查法(一) 薄层色谱法(TLC) Rf值的差异1）杂质对照品法结构已知且有杂质对照品。判断方法：比较杂斑数目与杂斑颜色。2)供试品自身对照法杂质结构不确定无杂质对照品（高低浓度对比法 ）3) 标准药物对照法杂质结构不确定无杂质对照品(二) 液相色谱法(HPLC) (三)气相色谱法(GC)第四章 药物定量分析与分析方法验证一、含卤素有机药物的分析 （最后都是有机卤素转变为无机的卤素离子）1. 直接回流后测定法 将有机结合的卤素转变为无机的卤素离子，然后采用间接银量法（Volhard法）测定。适用于卤素原子结合不牢固的药物（如卤原子和脂肪碳原子相连者）。 铁胺钒指示剂法2. 碱性或酸性还原后测定法 本法适用于测定结构中碘与苯环直接相连，且一个苯环上含多个碘原子的含卤素有机药物。 3. 氧瓶燃烧法 1）原理 适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析，尤其适用于微量样品的分析2）装置：无色、磨口、厚壁、硬质玻璃锥型瓶；瓶塞空心，底部熔封铂丝一根，下端呈螺旋状或网状。3）称样用材料及称样a. 固体样品用无灰滤纸b. 液体样品用纸袋4)吸收液的选择氟 氟用水；氯用NaOH溶液；溴用H2O2-NaOH， NaOH-硫酸肼饱和溶液；碘用NaOH硫酸肼饱和溶液；硫用NaOH或H2O2；硒用硝酸溶液5）.操作（简单看下书本的P86页的（4）6）.注意事项；根据被燃烧分解的样品量选用适宜大小的燃烧瓶。测定含氟有机药物时，用石英制燃烧瓶铂丝燃烧时起催化作用应同时做空白试验燃烧时要注意防爆燃烧要完全燃烧产生的烟雾完全被吸收二、含金属有机药物的分析1.不经有机破坏的分析方法：1）直接测定法 适用于金属原子不直接与碳原子相连的含金属有机药物或某些CM键结合不牢固的有机金属药物。（如富马酸亚铁的含量测定）2.经有机破坏的分析方法 适用于金属原子与碳原子结合牢固的有机金属药物。1）湿法破坏：多是用强酸将样品破坏，比如硝酸、高氯酸、硫酸等。2）干法破坏：是将有机物灼烧灰化达到分解的目的。本法不适合用于含易挥发性金属（如汞、砷）有机药物的破坏。PS:破坏有机药物进行成分分析可采用干法破坏法，湿法破坏法和氧瓶燃烧法三、定量分析方法特点(一)容量分析法滴定度：指每1ml某摩尔的滴定液所相当的被测药物的重量。Ch.P用mg来表示。 aA(待测物）bB（滴定液）cCdD Tm*(a/b) *M（mg/ml）百分含量计算：直接滴定法和回滴定法1、直接滴定法：含量（）（V*T*F）W*1002、回滴定法：即剩余滴定法。先加入定量过量的滴定液A，使其与被测药物反应；待此反应进行完全后，再用另一滴定液B来回滴反应中剩余的滴定液A1）不做空白试验的含量计算方法：含量(VA*FA-VB*FB)*T/W*100%2）做空白试验的含量计算：含量(V0-VB)*T*F/W*100（F：浓度校正因子=实际浓度/标准浓度） （一般情况下都是体积大的减去体积小的）（二）光谱分析法1、紫外可见分光光度法：一般适用于纯组分的分析，如原料药或单组分制剂（无辅料干扰）。1)对照品比较法的有关计算2）吸收系数发的有关计算。（要求要记住公式书本P9393）一定要弄明白为什么P93那个公式为什么会出现100（原因是单位的换算）最好结合VitC的含量测定那个实验来记。（重点）2、荧光分析法 灵敏度高（三）色谱分析法 HPLC GC TLC四、药品质量标准分析方法验证 (一)准确度：准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用百分回收率表示。测定回收率R（recovery）的具体方法可采用“回收试验法”和“加样回收试验法”。 回收试验1）回收试验法 空白B+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M。2）加样回收试验 已准确测定药物含量P的真实样品+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M3）数据要求：规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次。4）判断含量测定方法准确度的方法：（1）回收率试验；（2）与已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较。 （二）精密度 是指在规定条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。用偏差（d）、标准偏差(SD)、相对标准偏差(RSD)表示。 1）重复性；2） 中间精密度 ；3）重现性 （三）专属性：意义：分析复杂样品混合物时衡量其是否受到干扰程度的一种方法。（四） 检测限LOD 试样中被测物能被测出的最低浓度或量。仪器分析中一般以信噪比(S/N= 3或2)时的相应浓度或注入仪器的量确定为检测限。（五）定量限：样品中被测物能被定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和精密度。测定法：以信噪比（S/N）为10时相应的注入仪器的药物浓度或量进行确定。（六）线性及其范围 线性：在设计的范围内，测试结果与被测物浓度呈正比关系的程度。 范围：达到一定精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。（七）耐用性 指测定条件稍有变动时，结果不受影响的承受程度。（八）各种含量测定方法对效能指标的要求1）容量分析法：用原料药精制品(含量99.5)或对照品考察方法的精密度，相对标准差一般应不大于0.2；进行回收率试验。回收率一般在99.7100.3之间。2）UV法：用适当浓度的精制品进行测定，其RSD一般不大于1。制剂的测定，回收率一般应在98102之间。3）HPLC法：要求RSD10C，或贮存时间超过30天。则在临用前必须重新标定标准溶液的浓度2.比色法酸性染料比色法（有机碱通用含测法）1原理:在适当pH溶液中,有机碱（B）可以与氢离子成盐,酸性染料（HIn）可解离成阴离子,阴离子可与有机碱盐阳离子定量地结合成有色离子对，而进入到有机相。通过测定有机溶剂提取液的吸收度;或将有机溶剂提取液酸化或碱化，使与有机碱结合的酸性染料释放出来，测定染料的吸收度来测得有机碱的含量。2、常用酸性染料 溴麝香草酚蓝 溴甲酚绿 溴酚蓝3影响因素最主要条件是水相的pH。要求：能使有机碱全部以盐的形式存在，酸性染料能够解离成离子，以便它们定量地结合成离子对而转溶于有机相，且又能将剩余的染料完全保留在水相。 pH（酸性）BH+，InBH+In-，有机溶剂（常用的是氯仿）提取的是HIn pH（碱性） In-，BH+BH+In-，有机溶剂提取的是BpH的选择：用待测的有机碱加入一定的酸性染料，配制成一系列不同pH值的溶液，分别用有机溶剂提取后测定有机溶剂提取液的吸收度，吸收度值最大的溶液所对应的pH值就是水相的最佳pH值。钯离子比色法：原理：吩噻嗪类药物可与Pd2+在适当pH值的溶液中形成红色的络合物，借以进行比色测定。未被氧化的吩噻嗪类药物的测定异烟肼的含量测定 1）溴酸钾法 反应摩尔比 32 剩余溴（碘）量法 反应摩尔比 14第九章维生素类药物的分析一、维生素A的分析1、结构与性质 个具有共轭多烯侧链的环己烯具有UV吸收 存在多种立体异构化合物不稳定易被氧化2、鉴别试验1）.三氯化锑反应：维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液中即显蓝色，渐变成紫红色。2）紫外吸收光谱VitA的无水乙醇溶液在326nm有最大吸收。3、含量测定紫外分光光度法三点校正法三点校正法（我记得蕾蕾姐说过这个不会考还是不会重点考的）1.）条件：杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；物质对光的吸收具有加和性。第一法：等波长差法 ； 测定对象：VitA醋酸酯第二法：等吸收度法(皂化法) 测定对象：VitA醇三氯化锑比色法（标准曲线法）注意事项：1）操作要迅速；2）无水介质；3）与标准曲线温差1二、维生素C的分析1、结构特点：具有内酯结构，碱性下可水解。 具有烯二醇基。具有还原性，能够被氧化成去氢抗坏血酸；酸性,能与碱成盐。旋光性。类似于糖的性质。2、含量测定直接碘量法1）原理指示剂 淀粉指示液2）讨论酸性环境 减慢VitC被O2氧化速度新沸冷H2O 赶走水中O2立即滴定 减少O2的干扰附加剂干扰的排除片剂 滑石粉 过滤注射剂 抗氧剂 丙酮、甲醛2，6 - 二氯靛酚钠滴定法法自身指示终点法氧化型（酸性条件下红色） 还原型（无色）终点的颜色是溶液由无色变为红色。三、维生素E的分析1、鉴别1)硝酸反应（橙红色）2)三氯化铁联吡啶反应 2、杂质检查游离生育酚利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈还原成硫酸亚铈试剂：硫酸铈滴定液指示剂：二苯胺（亮黄灰紫）3、含量测定内标法 内标物：正三十二烷实际工作中的计算方法第十章甾体激素类药物的分析一、基本结构和分类基本结构：环戊烷骈多氢菲1肾上腺皮质激素2雄性激素及蛋白同化激素3孕激素4雌激素甾体激素碳原子数A环17位取代基皮质激素21D4-3-酮a-醇酮基雄性激素19D4-3-酮b-OHa-CH3孕激素21D4-3-酮甲酮基雌激素18苯环C3-酚OHb-OHa-CCH二、鉴别试验（一）与强酸的呈色反应(二)官能团的反应 1、C17 醇酮基肾上腺皮质激素药物与四氮唑反应呈色，与氨制硝酸银、碱性酒石酸铜生成沉淀。2. 酮基甾酮类激素药物与羰基试剂呈色常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼3. 甲酮基（孕激素特征反应）黄体酮与亚硝基铁氰化钠反应呈蓝紫色（专属的鉴别反应）其他甾体淡橙色或显色4. 酚羟基与三氯化铁 与重氮苯磺酸（红色）5. 有机卤素有机氟经有机破坏F与茜素氟蓝硝酸亚铈反应呈色 6. 乙炔基含炔基的甾体激素与硝酸银生成银盐沉淀三、特殊杂质检查（一）有关物质 TLC法（高低浓度对比法）HPLC法（类似高低浓度对比法）（二）硒 来源：合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢 经氧瓶燃烧后再测定（三）有机溶剂残留（甲醇和丙酮） 用GC法（四）游离磷酸 对照品法四、含量测定（一）HPLC最常用（二）比色法异烟肼比色法反应条件1）溶剂：无水乙醇，无水甲醇；2）酸的种类、浓度及异烟肼的浓度常用HCl。HCl：异烟肼 = 2M:1M时，获最大吸收度。四氮唑比色法（影响因素太多）反应条件1）无醛无水乙醇；2）加入顺序：碱试液是氢氧化四甲基铵Kober反应比色法 雌激素类药物的特征反应第十一章抗生素类药物的分析一、内酰胺类抗生素 （重点）（一）性质:1、羧基: 与碱金属(Na+、K+)成盐 ；与有机碱(普鲁卡因)成盐 2、手性C 3、共轭体系 青霉素类：母核无明显UV，多数有苯环取代基。头孢菌素类：母核有共轭体系4、内酰胺环不稳定青霉素的水解产物要知道 （二）鉴别试验1. 羟肟酸铁反应（-内酰胺类）生成红色络合物2. 三酮反应(-氨基) 蓝紫色3. 双缩脲反应(-内酰胺类) (似肽键) 紫色4遇酸呈色5 有机胺盐反应 重氮化 - 偶合反应（普鲁卡因青霉素） （三）含量测定（碘量法）反应分两步进行：1）水解反应 (按化学计算量进行)2）氧化-还原反应 (无固定的量关系，受温度、PH值和时间等因素影响，应严格控制反应条件并采用标准品平行对照测定)空白试验 以未经水解的样品作空白测定A、消除样品已降解产物的干扰；B、消除样品中其他消耗碘的杂质的干扰；C、消除碘挥发造成的误差采用标准品平行对照测定A、可消除温度、pH、操作、环境等条件的影响B、使本法测定结果与微生物检定法一致汞量法 以未经水解的样品作空白测定优点 不需标准品二、氨基糖苷类抗生素1、化学结构 链霉素链霉胍 + 链霉糖