17β-二醇葡萄糖醛苷酸化学发光免疫检测试剂盒使用说明书.doc

17二醇葡萄糖醛苷酸化学发光免疫检测试剂盒 使用说明书 ( 美国DRG 编号: CLA-4649 规格：96T)1 预期用途5雄甾3，17二醇葡萄糖醛苷酸（3Diol G）此DRG 化学发光免疫检测试剂盒可用于人血清中5雄甾3，17二醇葡萄糖醛苷酸的定量检测.在美国，此类试剂盒仅供科研，2 注意事项1实验前，为保证有效使用试剂盒，仔细阅读说明书。只有严格遵守说明书操作才能得到可靠的实验结果2每次试验均需设高低质控,来评估实验结果的可靠性3如需用水,用去离子水或蒸馏水稀释或重组4实验操作要带手套,减少接触潜在的有害物质5实验前,将所有试剂和样品平衡至室温.避免反复冻融样品和试剂.6每次试验都要建立一条标准曲线7每次试验都要设阴阳性质控,并且所得到的检测值应在置信界限内.8不正确的实验操作,不精确的加样,不充足的洗板,不适当的存储都会影响实验.导致质控品得不到相应的可接受范围数值9发光底物液(试剂A 和试剂B)具有光敏性,故应瓶装避光保存10试验缓冲液对光敏感，应避光瓶装保存11加底物液时,避免移液管的金属部位接触底物液.12用一次性吸嘴加样品,标准品,质控品,避免试剂污染13切勿混用不同批次号的试剂和使用过期的试剂14试剂应根据相关国家规范,视为有害物质处理.3 局限性1试剂盒是根据检测人血清中5雄甾3，17二醇葡萄糖醛苷酸（3 Diol G）而较准设计的，不能用于唾液、血浆、其它类型样品或动物样品的检测2别使用明显溶血，脂血，黄疸或不当存储的样品3实验不能使用含叠氮化物或硫柳汞的样品或质控品，会导致错误的结果4只能用标准品A稀释高浓度的血清样品。使用任何其它试剂稀释都会导致错误的实验结果。4 安全注意事项含人血清成分的标准品和质控品已经过检测，确定为乙型肝炎表面抗原、丙肝抗体、人HIV阴性。然而，没有任何检测方法能完全保证HIV、HCV、乙型肝炎病毒或其它感染病原体不存在，试剂应视为潜在生物有害物质，按血液样品处理规范，小心处理。5 化学危害物质避免接触试剂。如不慎接触，用大量水冲洗。6 样品收集及储存每次双份检测大约需要0.2 ml血清. 收集4-5 ml的全血至标记试管并让其凝结.离心取其上清,在4C下可保存24小时.需保存更长时间的,置于-10C或更低保存.处理人样品时,应将其当作潜在的生物有害物质并应注意防护措施。7 样品预处理 试剂盒可直接检测样品，样品无需特别前处理8实验所需器材(但本试剂盒没有提供)1. 精密移液管（20, 50, 100, 150 和 300 l）2. 一次性加样枪头3. 蒸馏水或去离子水4. 振荡器5. 化学发光仪9 试剂盒成分1 包被板，预包被有兔抗3 Diol G多克隆抗体 ，可分拆 ，即用成分： 包被板（1 2条x8孔）装于含干燥剂的可重封装的小袋中存储：2-8C稳定性：12月或见标签2 辣根过氧化物酶（HRP）标记3 Diol G复合物（酶联物），需稀释 成分：3 Diol G-HRP浓缩复合物蛋白缓冲液，含非水银物质作为防腐剂 规格：300 l/瓶 存储：2-8C 稳定性：12月或见标签即用型酶联物准备：用试验缓冲液按1：50的比例稀释浓缩HRP标记5雄甾3，17二醇葡萄糖醛苷酸复合物（示范：40 L浓缩酶联物+ 2mL试验缓冲液）如果检测整块板，240L浓缩酶联物+ 12 mL试验缓冲液。实验后，倒掉未使用的即用型酶联物3 3Diol G标准品 ， 即用型 成分：6瓶，含3Diol G蛋白缓冲液、非水银物质防腐剂 下表为标准品的大概浓度，具体请见标签。 标准品浓度体积/瓶标准品A0 ng/ml2.0 ml标准品B0.25 ng/ml0.6 ml标准品C1 ng/ml0.6 ml标准品D3 ng/ml0.6 ml标准品E10 ng/ml0.6 ml标准品F50 ng/ml0.6ml 存储：2-8C 稳定性：未开封时保存12个月或见标签 。开封后，标准品液14天内用完，或分装冰冻。避免反复冻融。4质控品 ，即用型 成分：1瓶，含游离5雄甾3，17二醇葡萄糖醛苷酸蛋白缓冲液、非水银物质防腐剂。 期望值及可接受范围，请见标签 规格：0.6 ml/瓶 存储：2-8C 稳定性：未开封时保存12个月或见标签 。开封后，质控品液14天内用完，或分装冰冻。避免反复冻融。5浓缩洗涤液 ，需稀释 成分：1瓶，含非离子清洁剂和非水银防腐剂 规格：50 ml/瓶 存储：2-8C 稳定性：12月或见标签 稀释准备： 使用前，用蒸馏水或去离子水按1：10的比例稀释。如果检测整块板，450 ml 蒸馏水或去离子水+50 ml的浓缩洗涤液，制成稀释洗液液 6试验缓冲液，即用型 成分：含非水银物质作为防腐剂 规格：15 ml/瓶 存储：2-8C 稳定性：12月或见标签7化学发光底物液A ， 需预准备 成分：1瓶，含发光氨增强剂 体积：1ml/瓶 存储：2-8C 稳定性：12个月或见标签 准备：见下8学发光底物液B， 需预准备 成分：1 瓶，含过氧化物 体积：1 ml/瓶存储：2-8C 稳定性：12个月或见标签 准备：见下9发光底物液C， 需预准备 成分：1瓶，含非水银防腐剂缓冲液 体积：15 mL/瓶存储：2-8C 稳定性：见标签 准备：见下9.1即用型化学发光底物液准备：用1个单位的化学发光底物液A+1个单位的化学发光底物液B，制成混合液，再化学发光底物液C按1：6的比例稀释上述混合液，制成即用型化学发光底物液如果检测整块板，具体准备如下：1 mL学发光底物液A+1 mL化学发光底物液B，制成2 ml 混合液，再加此混合液至12ml化学发光底物液C，配制成总体积为14 ml即用型化学发光底物液稳定性：即用型化学发光底物液在室温下稳定保存24小时。10 实验步骤样品前处理：无重要提示1. 实验前将所有试剂平衡至室温2. 实验一旦开始，所有步骤必须完整的进行，保证相等的加样间隔时间3. 洗涤步骤明显影响实验精确度，必须保证完全并有效洗板。操作步骤1. 取实验所需板条固定于板架上。未使用的板条，重新密封小袋，存于冰箱2. 用新的一次性加样枪头,各加50ul的标准品，质控品和样品于相应的孔内，作双份检测，标记好加样位置3. 每孔加入100 L即用型酶联物（建议使用多道移液管）4. 置于振荡器（大约200 rpm）中，室温下孵育15 min5. 每孔用300 L稀释洗涤液洗板5次，最后在吸水纸上拍干，确保完全干燥（建议使用自动洗板机）6. 每孔加100ul即用型发光底物液（建议使用多道移液管）7. 置于振荡器室温下孵育15min 8. 底物液孵育后，20 min内，于发光仪上读取相对光单位(RLU)13 结果计算1. 计算各双份测标准品，质控品和样品的相对光单位(RLU)均值2. 在半对数坐标纸上，以标准品的RLU的均值为Y轴，浓度为X轴绘制标准曲线。如果使用计算机软件，建议用4参数法计算3. 计算样品的RLU均值 4. 直接从标准典线上读取相应的浓度 5. 样品浓度高于最高标准品浓度(50 ng/ml)的则需用标准品A进一步稀释，稀释比例不超过1：8，结果计算时要乘以稀释因子。典型标准数据示例下以数据仅供演示示范,不能用于实验数据的获取.建议用RLU/RLUmax比值作为结果比较分析,因各个厂商的化学发光仪的不同导致读取RLU值的不同,但RLU/RLUmax的