乌鸡白凤口服液对雄激素致不孕大鼠子宫内膜及肌层的影响.doc

乌鸡白凤口服液对雄激素致不孕大鼠子宫内膜及肌层的影响作者：宋翠淼1,杜惠兰2,马爱蕊3,岳华1单位：河北医科大学:1基础课教学部生理学教研室,2中西医结合学院中西医结合妇产科教研室,石家庄050091,3河北省胸科医院普通内科,石家庄050041转化生长因子β1(TGF-β1)协同其它细胞因子共同调节子宫内膜功能,维持子宫内膜组织内环境的稳定1。乌鸡白凤口服液具有补气养血、调经止带之功能。本研究观察乌鸡白凤口服液对雄激素致不孕大鼠(ASR)模型子宫内膜(腺细胞、间质细胞)和肌层转化生长因子β1及其受体(TGF-βR)表达的影响,进而探讨该药如何调节子宫的功能。1材料与方法1. 1材料丙酸睾丸酮(天京市氨基酸公司生产,合格证号:0203232);乌鸡白凤口服液(北京同仁堂制药厂生产,合格证号: 3260008);一抗TGF-β1、TGF-βR(兔抗大鼠、小鼠)工作液;ABC试剂盒。1. 2方法1. 2. 1ASR模型建立、动物分组及给药方法参照魏美娟等2实验方法。9日龄同批出生SD雌性大鼠华中科技大学同济医学院实验动物学部提供,合格证号: (鄂医动字)19-020 30只,分为正常组、模型组、治疗组各10只。模型组及治疗组颈背部皮下一次性注射丙酸睾丸酮1. 25 mg。70 d龄起做连续阴道脱落细胞涂片10 d,阴道上皮细胞持续角化,提示ASR模型复制成功。81 d龄起,治疗组灌服乌鸡白凤口服液,每100 g给药1 m,l连续7周。1. 2. 2标本制备及检测方法于给药6周后每日上午做阴道涂片1次,连续1周,处死前2 d,每隔2 h涂片1次,以确定动情周期。130、131日龄正常组、治疗组处于动情后期大鼠及模型组大鼠腹腔注射2%戊巴比妥钠麻醉,剖腹,取出子宫,用HE染色观察子宫形态学变化;用ABC试剂盒(由VECTOR提供)免疫组化染色检测TGF-β1及TGF-βR在子宫内膜和肌层的表达。1. 2. 3图像分析各组分别随机选取3只大鼠子宫做ABC免疫组织化学染色切片,每个子宫选取1张切片进行分析,每张取子宫内膜和肌层两区,每区取5个视野,应用Leica IM50Version: 1. 20 Release扫描系统,Motic数码医学图像分析系统分析其表达强度。吸光度值越高,表达越强(褐色为表达)。1. 3统计学分析所有数据用-x±s表示,采用SPSS 11. 5统计软件,组间比较采用单因素方差分析。2结果2. 1大鼠子宫组织形态学观察正常组大鼠子宫内膜厚,腺体丰富,肌层厚;模型组大鼠子宫内膜明显萎缩,腺体减少,肌层较正常组变薄;治疗组较模型组大鼠子宫内膜增厚,腺体数目增多,肌层增厚。2. 2大鼠子宫内膜和肌层TGF-β1及其受体的表达与正常组比较,模型组TGF-β1在子宫内膜、肌层表达明显降低(P<0•01);与模型组比较,正常组、治疗组TGF-β1在子宫内膜、肌层表达明显增加(P<0•01)。与正常组比较,模型组TGF-βR在子宫内膜表达明显升高(P<0•05),而在肌层的表达明显降低(P<0•05),见表1。表1大鼠子宫TGF-β1、TGF-βR平均光度值比较(-x±s,n=15)TGF-β1 TGF-βR组别内膜肌层内膜肌层正常组0. 058 7±0. 007 1 0. 070 1±0. 012 5 0. 040 7±0. 004 0 0. 056 4±0. 004 5模型组0. 043 2±0. 010 2a0. 049 0±0. 011 2a0. 052 0±0. 006 9b0. 050 7±0. 004 7b治疗组0. 081 6±0. 018 4 0. 066 5±0. 017 8 0. 051 3±0. 007 0 0. 049 0±0. 007 6a:P<0•01,与正常组、治疗组比较;b:P<0•05,与正常组比较3讨论TGF-β1能刺激子宫内膜间质细胞合成甲状旁腺激素相关蛋白,从而引起子宫内膜细胞环磷酸腺苷升高,对子宫内膜生长起升调作用。另外,TGF-β1参与子宫内膜间质细胞的凋亡,并能调节子宫内膜从增殖向分泌阶段的转化3;还同其他细胞因子协同作用促进细胞外基质的合成,提高子宫内膜容受性,这些都有利于胚泡着床。ASR模型较正常大鼠有高雄激素、无排卵的现象。与正常组比较,模型大鼠子宫内膜萎缩,腺体减少,肌层变薄。子宫内膜、肌层TGF-β1表达明显降低;子宫内膜TGF-βR表达却明显增加,肌层TGF-βR表达亦明显降低。推测模型大鼠子宫内膜及肌层TGF-β1、TGF-βR表达的异常可能影响子宫内膜的分化生长以及肌层的发育。乌鸡白凤口服液可提高模型大鼠TGF-β1在子宫内膜、肌层表达,使其接近正常。推测乌鸡白凤口服液通过上调内膜TGF-β1表达,一方面刺激子宫内膜间质细胞合成甲状旁腺激素相关蛋白,促进子宫内膜生长并向分泌阶段转化,另外和其他因子协同作用,提高子宫内膜容受性。通过上调肌层TGF-β1表达,可能促进肌层的发育。形态学显示:子宫内膜增厚,腺体增生,肌层较模型组增厚。我们相关实验证明,乌鸡白凤口服液可使模型大鼠子宫质量增加。子宫内膜和肌层的变化有利于孕卵着床和胚胎发育的需要,是乌鸡白凤口服液调经种子的作用机制之一。关键词:乌鸡白凤口服液;雄激素致不孕大鼠模型;子宫;转化生长因子β1;受体中图法分类号:R711. 605文献标识码:B参考文献:1金莉萍.转化生长因子β与生殖功能调节研究进展J.国外医学计划生育分册, 2003, 22(1): 17-19.2魏美娟,俞瑾.补肾药对雄激素致不孕大鼠垂体及卵巢的组织形态学变化观察 J.中国中西医结合杂志, 1993, 13(3): 164-166.3 ReisFM, RibeiroM F, ManaA L,etal. Regulation ofhuman endometrial transforming growth factor beta1 and beta3 isoforms throughmenst